痰热清联合哌拉西林/他唑巴坦对产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的体外抑制作用

李亚娜，陶庆春，苏建荣

(1.首都医科大学附属北京友谊医院检验科，北京 100050；2.北京中医药大学第三附属医院检验科，北京 100029)



·论 著·

痰热清联合哌拉西林/他唑巴坦对产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的体外抑制作用

李亚娜1，陶庆春2△，苏建荣1

(1.首都医科大学附属北京友谊医院检验科，北京 100050；2.北京中医药大学第三附属医院检验科，北京 100029)

目的 观察痰热清注射液及其与哌拉西林/他唑巴坦注射液(又称特治星)联合应用对体外产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的抑菌效果，为耐药菌株的防治提供新方式。方法 按照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)推荐的肉汤稀释法，对产ESBLs肺炎克雷伯菌进行体外抑菌试验，分析痰热清注射液单用及与特治星联合应用(间隔6 h)的抑菌效果。结果 痰热清注射液对产ESBLs肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度(MIC)为750 μL/mL；特治星对产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC为28.125 μg/mL；加入痰热清作用6 h后再加入特治星，当痰热清最终浓度大于450 μL/mL时，特治星的用量比单用时至少减少5倍。结论 痰热清与特治星间隔6 h联合应用具有明显的抑菌效果，能大幅度地减少抗菌药物的用量，这对临床治疗的改善和减少耐药菌株的产生都具有积极意义。

肺炎克雷伯菌； 超广谱β-内酰胺酶； 痰热清注射液； 抑菌试验

近年来，多重耐药或者泛耐药细菌不断出现，如产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌，耐万古霉素肠球菌(VRE)，多重耐药铜绿假单胞菌及全耐药鲍曼不动杆菌等，给临床治疗及感染控制带来了很大的困难。随着中医研究的不断深入和中西医治疗的不断发展，中药治疗的优势不断凸显。中药痰热清具有清热解毒，提高机体免疫功能等多种功效，在治疗呼吸道感染等方面具有良好的效果[1-3]。本研究采用中药痰热清联合哌拉西林/他唑巴坦注射液(又称特治星)，按照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)[4]推荐的肉汤稀释法，对产ESBLs肺炎克雷伯菌进行体外抑菌试验，观察其对产ESBLs肺炎克雷伯菌的抑菌效果。现将研究结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 产ESBLs肺炎克雷伯菌来自临床分离菌株，标本于2011年3月11日取自北京中医药大学附属东直门医院送检的痰标本；质控菌为肺炎克雷伯菌ATCC 700603，由上海复祥生物科技有限公司提供。

1.2 仪器与试剂 痰热清注射液(上海凯宝药业股份有限公司)，特治星(石药集团中诺药业有限公司)；VITEK 32全自动微生物分析系统(法国生物梅里埃公司)，生物安全柜(北京五洲东方科技发展有限公司)，电热恒温培养箱(北京科伟医疗器械厂)。

1.3 方法

1.3.1 产ESBLs肺炎克雷伯菌的分离与鉴定 痰标本严格按照《全国临床检验操作规程》第3版标准进行分离培养。采用VITEK 32全自动微生物分析系统进行鉴定及表型筛选，并按照CLSI推荐的纸片扩散法进行确认。

1.3.2 试验分组 试验分为5组，第1组：痰热清浓度对倍稀释组；第2组：痰热清浓度递减组；第3组：特治星组；第4组：痰热清+特治星组(间隔6 h)；第5组：痰热清+特治星组(间隔6 h)。

1.3.3 抑菌试验 第1组采用对倍稀释法，35 ℃培养24 h后，确定痰热清的最小抑菌浓度(MIC)值；第2组在第1组结果的基础上采用梯度稀释法，35 ℃培养24 h后进一步确定痰热清的MIC值；第3组采用对倍稀释法，35 ℃培养24 h后测定特治星的MIC值；第4、5组为二者联合应用，各自分为10个小组，在痰热清作用6 h后再加入特治星，其中第4组采用双方对倍稀释法，第5组痰热清采用梯度递减稀释法、特治星采用对倍稀释法，35 ℃培养24 h后对抑菌情况进行测定。各组痰热清和特治星浓度，见表1～2。

表1 各组痰热清浓度(μL/mL)

表2 各组特治星浓度(μg/mL)

2 结 果

2.1 各组试验现象 第1组的管1无细菌生长，管2～10均浑浊；第2组管1～4无细菌生长，管5～10均浑浊；第3组管1～6无细菌生长，管7～10均浑浊；第4组的第1小组前2管无细菌生长，后8管浑浊，第2～10小组均为第1管无细菌生长，2～10管浑浊；第5组的第1小组为前6管无细菌生长，后4管浑浊，第2～4小组均为前5管无细菌生长，后5管浑浊，第5小组为前3管无细菌生长，后7管浑浊，第6～10小组为前两管无细菌生长，后8管浑浊。

2.2 抑菌试验结果 痰热清注射液对产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC值为750 μL/mL，特治星对产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC值为28.125 μg/mL；当加入痰热清作用6 h后再加入特治星，痰热清最终浓度大于450 μL/mL时，可以使特治星的用量较单用时至少减少5倍。其作用效果见图1。

注：虚线代表单用特治星的MIC值(MIC=28.125 μg/mL)。

图1 痰热清联合特治星(间隔6 h)抑菌效果曲线图

3 讨 论

痰热清注射液由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘组成，具有清热解毒、解痉、镇静止咳、祛痰平喘、抗菌抗病毒及免疫调节等作用。其中黄芩为君药，具有泻火解毒、清热燥湿的功效；熊胆粉、山羊角为臣药，其中熊胆粉的有效成分熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸具有清热、平肝及明目的功效，二者都有加强黄芩功效的作用；连翘具有清热解毒、疏风散结的功效；金银花具有解表、宣肺和清热解毒的作用[5]。有报道显示，痰热清联合阿奇霉素治疗小儿支原体性支气管肺炎的疗效优于单独使用阿奇霉素[6-7]。另有报道表明，在铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌导致的肺部感染治疗中，痰热清联合西药更具优势[8-9]，此外，有研究表明，单用痰热清或痰热清联合利巴韦林治疗手足口病的效果无明显差异，但均优于单用利巴韦林的疗效[10]。中药以其多方面的抑菌杀毒作用，在临床治疗中的重要性日益凸显，成为临床治疗不可或缺的一部分。

本研究结果显示，痰热清作用于产ESBLs肺炎克雷伯菌6 h后再加入特治星，当痰热清最终浓度大于450 μL/mL时，可使特治星的用量比单用时至少减少5倍。与同时试验的二者同时加入相比，间隔6 h可以更大幅度地减少抗菌药物的用量，减少二者同时应用时可能发生的互相干涉现象，更好地发挥各自的功效。中药的应用首先降低了细菌的耐药性，从而使抗菌药物的抑菌效果更加明显。其根本原因可能是中药可以消除耐药菌的R质粒，或者妨碍甚至阻断R质粒在细菌间的传播途径，抑制细菌主动外排泵，抑制耐药基因的表达，以及干扰细菌的代谢。同时痰热清能增强人体自身的免疫功能，使人体对外界的抵抗力增强，从而达到降低细菌耐药性的作用。

综上所述，痰热清与特治星间隔6h联合应用具有明显的抑菌效果，能大幅度地减少抗菌药物的用量，这对临床治疗的改善和减少耐药菌株的产生都具有积极意义。在后续研究中，需对浓度450～750μL/mL的痰热清联合特治星的抑菌作用进行试验，并且可以加大试验菌株量，以更完整地表述痰热清与特治星联合应用的抑菌效果，确保对临床用药的指导意义。

[1]李伟铭，马厚勋．痰热清联合抗菌药物治疗老年肺部感染35例临床体会[J]．中国中医急症，2009，18(5)：804．

[2]孟凡威，徐太林，李鲁娟．阿昔洛韦联合痰热清治疗婴幼儿呼吸道合胞病毒肺炎疗效观察[J]．中国医疗前沿，2010，5(11)：48．

[3]吕楠，于淑英，贾英民．痰热清注射液治疗老年性社区获得性肺炎疗效观察[J]．人民军医，2013，56(3)：317-319．

[4]Clinical and Laboratory Standard Institute．Performance standard for antimicrobial Susceptibility testing;20th informational supplement[S]．Wayne，PA，USA：CLSI，2010．

[5]冯传咸，彭曙辉．痰热清注射液治疗儿童疱疹性咽峡炎80例[J]．中医药导报，2013，19(5)：101-102．

[6]罗钦宏，梁锦枝，黄艳琼，等．痰热清联合阿奇霉素治疗小儿支原体肺炎的疗效及安全性的Meta分析[J]．中成药，2014，36(4)：702-709．

[7]许丹彦．痰热清联合阿奇霉素治疗小儿支原体肺炎对比分析[J]．中国慢性病预防与控制，2011，19(6)：631-632．

[8]刘瑶，马晓俞，徐航，等．痰热清对ICU铜绿假单胞菌肺部感染的临床研究[J]．临床肺科杂志，2014，19(6)：974-976．

[9]刘瑶，马晓俞，陈淑萍，等．痰热清辅助治疗鲍曼不动杆菌肺部感染的疗效观察[J]．中国感染控制杂志，2014，13(3)：134-137．

[10]梁锦枝，罗钦宏，方乙生，等．痰热清注射液治疗手足口病疗效评价的Meta分析[J]．中国循证医学杂志，2013，13(12)：1446-1454．

Bacteriostasis effect in role of Tanreqing combined Tazocin against ESBLs-producing K.pneumoniae

LIYa-na1,TAOQing-chun2△,SUJian-rong1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedBeijingFriendshipHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100050,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,ThirdAffiliatedHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective To observe the bacteriostatic effect in vitro of Chinese medicine Tanreqing Injection combined with Piperacillin/Tazobactam(Tazocin) against ESBLs-producingKlebsiellapneumoniae(K.pneumoniae),and to provide a new way for the prevention and treatment of drug-resistant strains.Methods According to the broth dilution method recommended by the American Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI),the in vitro bacteriostatic test was performed on ESBLs-producingK.pneumoniaefor analyzing the bacteriostasis effect of Tanreqing Injection and the combination use of Tanreqing Injection and Tazocin (interval of 6 h).Results The minimal inhibitory concentration(MIC) of Tanreqing Injection and Tazocin against ESBLs-producingK.pneumoniaewere 750 μL/mL and 28.125 μg/mL respectively.In the combination use of Tanreqing Injection and Tazocin (interval of 6 h),when the final concentration of Tanreqing was more than 450 μL/mL,the dose of Tazocin was decreased by at least 5 times than its single use dose.Conclusion The combination use of Tanreqing Injection and Tazocin (interval of 6 h) has significant bacteriostatic effect and reduce the dose of antibacterial drugs by a large margin,which could possess an active significance in improving the clinical treatment and reducing the emergence of drug-resistant strains.

Klebsiellapneumoniae； extended spectrum β-lactamases； Tanreqing Injection； bacteriostatic test

李亚娜，女，硕士，检验师，主要从事临床免疫与微生物研究。△

，E-mail:taoqc@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.020

A

1672-9455(2015)05-0631-02

2014-10-15

2014-11-20)