丹参的化学成分分离及其抗氧化活性研究

黄海亮

丹参的化学成分分离及其抗氧化活性研究

黄海亮

研究丹参的化学成分分离与抗氧化活性, 对丹参的化学成分进行溶液分离, 使用Fenton体系和还原体系对丹参中化学成分的抗氧化活性进行研究。丹参中所含化学成分的抗氧化性和还原能力强。丹参具有较强的抗氧化活性, 能够有效预防心脑血管疾病发展、扩张血管, 具有防止脑血栓等药用价值。

丹参；化学成分分离；抗氧化活性

丹参主要能够入药的部位是其干燥根和根茎, 丹参由于外观为红色又被称做赤参, 在我国大部分地区都能够种植丹参。丹参能够缓减患者的痛感、消除淤血、疏通经络、促进气血活动、恢复患者神智及缓解疲劳的功效, 可以用于治疗胸闷、心绞痛、腹胀腹痛、四肢麻痹、失眠、月经失调及经痛、浮肿及溃疡等症状。本文主要阐述了丹参的化学成分分离的方法及以其抗氧化活性的研究, 现分析如下。

1 丹参化学成分及其抗氧化活性

丹参的化学成分主要分为两大类, 脂溶性化学成分和水溶性化学成分。丹参中的脂溶性化学成分中二萜醌类化学成分占最大比重, 其中又以橙黄色的丹参酮和橙红色的隐丹参酮为主［1］。丹参中水溶性化学成分中以酚酸类水溶性化学成分居多, 酚酸类水溶性化学成分中主要有丹参素、迷迭香酸、丹酚酸、原儿茶醛等化学成分［2］。医学界目前对于丹参中的水溶性化学成分的研究中, 掌握准确的化学成分主要有丹参素、迷迭香酸、原儿茶醛、丹酚酸A、B、C、D、E、F、G等［3］。丹参素是由2个HO分子、1个OH分子及以1个CH2分子和COOH分子构成, 迷迭香酸是由2个O分子、2个HO分子和2个OH分子及1个COOH分子构成。

2 丹参的化学成分分离

将丹参碾成粉状, 使用4倍分量70%浓度的乙醇浸泡提取4次, 将丹参溶液浓缩至100 L, 然后提取溶液, 在常温中放置24 h后, 使用清液将溶液中的乙醇去除, 将溶液加热至室温, 将溶液的pH值调至3, 将乙醇浓度压缩至80%醇沉,将溶液中的乙醇过滤提取致无醇状态, 将溶液的pH值调至5,使用乙酸乙酯对溶液萃取3次, 将溶液浓缩得到提取物45 L,后添入45 L石油醚, 将溶液中的沉淀物溶于乙酸乙酯中, 得到无水硫酸溶液, 将其脱水, 最终分离出含丹酚酸类化合物的样品4.01 L。

将富含丹酚酸类化合物的样品放置烧杯中, 使用硅胶进行第1次正相分离, 放置8 h后, 使用正己烷或乙酸乙酯进行第2次洗脱, 后分成6份样品, 分别为Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5、Fr6。将Fr2样品使用SephadexLH-20柱层析, 然后使用比例为40：9的甲醇进行水梯度对Fr2样品洗脱, 得到含有迷迭香酸的样品, 接着使用CG161柱层析, 再使用比例为40：9的甲醇进行水梯度对含有迷迭香酸的样品洗脱,最终得到迷迭香酸。将Fr4样品使用SephadexLH-20柱层析,然后使用比例为60：13的甲醇进行水梯度对Fr4样品洗脱,得到含有丹酚酸B的样品, 接着使用CG161柱层析, 再使用比例为60：13的甲醇进行水梯度对含有丹酚酸B的样品洗脱, 最终得到丹酚酸B。将Fr5样品在常压下使用硅胶柱层析,后使用正己烷或乙酸乙酯进行梯度洗脱, 后得到25 g的样品,对25 g样品使用SephadexLH-20柱层析, 然后使用比例为50：17的甲醇进行水梯度对25 g样品洗脱, 得到含有丹酚酸A的样品, 接着使用CG161柱层析, 再使用比例为50：17的甲醇进行水梯度对含有丹酚酸A的样品洗脱, 最终得到丹酚酸A。

3 丹参化学成分的抗氧化活性研究

目前对于化学成分的抗氧化活性研究方式主要是使用Fenton体系、邻苯三酚自氧化体系、还原体系、DPPH体系、抗卵黄脂质过氧化体系进行分析和研究［4］。本文使用其中两种方式分析丹参化学成分的抗氧化活性。

3.1 Fenton体系 Fenton体系主要是对于丹参中化学成分进行OH清除, 其工作原理是在Fenton与丹参中的化学成分发生化学反应, 产生OH, 由此可得出丹参中化学成分的OH数量［5］。

检测方式：使用2.5 ml的乙酸乙酯溶液(7 mmol/L), 然后加入1.5 ml硝酸钠溶解剂(pH 7.6；0.3 mmol/L), 搅拌均匀后加入2.5 ml磷酸盐溶液(含二乙烯三胺；2.8 mmol/L), 充分搅拌后加入纯净水, 于常温中放置, 后测得丹参中化学成分的OH数量。见表1。

3.2 还原体系 实验使用高锰酸钾比色法则判断丹参中化学成分的还原能力, 当Fe3+分子与丹参中化学成分发生反应还原成Fe2+时, 与高锰酸钾发生反应形成有色溶液, 溶液的颜色越深, 表示化学成分的还原能力越强［6］。

实验方法：在试管中放入2 ml的丹酚酸A样品, 加入3 ml硫酸亚铁缓冲溶液(pH 6.7；0.3 mmol/L), 3 ml高锰酸钾溶液, 搅拌均匀, 在常温中放置2 h, 后加入纯净水3 ml, 测得丹酚酸A的还原能力。见表2。

表1 丹酚酸B对OH分子的清除率(%)

表2 丹酚酸A的还原能力

4 讨论

丹参是一种唇形科鼠尾草属植物, 我国中医学对于丹参在病理治疗方面有着独特的研究, 是传统中医学中经常使用的一种药材, 且丹参中所含的化学成分非常丰富, 能够制成抗氧化剂, 并广泛应用于治疗各种疾病中。医学界目前对于水溶性酚酸类化学成分的研究有许多新发现, 其中表面丹参中的化学成分具有较强的抗氧化活性效果, 有着非常好的药用价值。

丹参能够效预防心脑血管疾病, 能够发挥扩张血管、防止脑血栓作用。而丹参有特殊的化学成分, 有较强的抗氧化活性, 具有能够有效预防心脑血管疾病发展、扩张血管、防止脑血栓等药用价值。丹参中的化学成分广泛应用在临床治疗心脑血管疾病中的药物制作中, 如复发丹参丸、丹参注射液、复方丹参口服液等。本文主要讨论了丹参的化学成分分离以及丹参化学成分抗氧化活性的实验, 实验证实了丹参具有很好的抗氧化活性作用。

［1］余世春, 琚小龙, 段广勋. 丹参的化学成分和药理活性研究概况(综述). 安徽卫生职业技术学院学报, 2002, 1(2):43-47.

［2］梁晓原. 云南丹参酚酸类成分水醇法制备工艺的初步研究. 云南中医学院学报, 2001, 24(4):6-8.

［3］王志平, 范晋勇.丹参提取液的树脂吸附及醇沉工艺对比研究.离子交换与吸附, 2013, 19(6):554-560.

［4］任德成, 杜冠华, 张均田.总丹酚酸对脑缺血再灌注性损伤的保护作用.中国药理学通报, 2002, 18(2):275-277.

［5］杜冠华, 裘月, 张均田.丹酚酸 A 对大鼠心肌缺血再灌注性损伤的保护作用.药学学报, 1995, 30(10):731-735.

［6］刘颖琳, 刘耕陶.丹酚酸 A 体外对人血清低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用.药学学报, 2002, 37(2):81-85.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.21.209

2015-07-13］

462000 漯河市第二人民医院药剂科