新型坤净栓原味药中有效组分的测定

刘 杰，任 娜 ，吴 伦，田振坤

(黑龙江中医药大学 中医药研究院，哈尔滨 150040)

新型坤净栓原味药中有效组分的测定

刘 杰，任 娜 ，吴 伦，田振坤

(黑龙江中医药大学 中医药研究院，哈尔滨 150040)

建立测定中药复方药新型坤净栓原味药柴胡和火绒草中各组分量的测定方法.采用高效液相色谱法.色谱柱为Hypersils C18(250 nm×4.6 nm)，流动相为甲醇-水(梯度洗脱)，流速为1.0 mL/min，检测波长分别为：210 nm和320 nm，柱温为25 ℃.柴胡皂苷a：y=161.27x+85.83，R2=0.999 2；柴胡皂苷d：y=450.89x-254.78，R2=0.999 1；咖啡酸：y=4 333.9x-357 880，R2=0.999 7；其质量浓度分别在2.0～20.0 μg，1.0～10.0 μg线性范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系；精密度、重复性、稳定性试验的RSD值分别为1.30%，1.22%，1.87%；平均加样回收率分别为98.30%，98.37%，97.65%，RSD值分别为2.39%，2.02%，3.42%(n=5).该方法简便、灵敏、准确，可为新型坤净栓的质量控制提供依据.

高效液相；柴胡；火绒草；测定

新型坤净栓是在收载于中华人民共和国卫生部《药品标准》中药成方制剂中坤净栓[1]的基础上改剂型而成的新药，由柴胡、火绒草和呋喃唑酮组成.具有清热燥湿，去腐生肌之功效，临床上常用于治疗湿热带下、宫颈糜烂、宫颈炎等.方中柴胡主要的活性成分为柴胡皂苷，其中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的活性较强，具有较强的保肝、抗炎、降低胆固醇等药理活性[2]；火绒草是我国西北东北等地的民间常用中草药，其有效成分为咖啡酸、原儿茶醛和香草酸等，具有抗炎症反应的作用[3].呋喃唑酮为硝基类的抗菌药，有较好的抗菌作用，疗效确切.以往的研究中[4]对坤净栓中的指标性成分柴胡皂苷a进行过质量评价，结果重复性良好，本文采用高效液相色谱法对新型坤净栓中的柴胡皂苷a、柴胡皂苷d和咖啡酸进行测定，取得了满意的结果.本操作简便，重复性好，可用于新型坤净栓的质量控制.

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260型高效液相色谱仪(安捷伦科技)；MS205DU型电子天平(梅特勒-托利多上海有限公司).

1.2 试药

柴胡皂苷a对照品(中国药品生物制品检定：生产批号：110778-200402)，柴胡皂苷d对照品(中国药品生物制品检定：生产批号：110777-200303)，咖啡酸对照品(中国食品药品检定研究院：生产批号：110885-200102)，甲醇为色谱甲醇，水为去离子水，其余试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验

色谱柱：Hypersils C18柱；检测波长：210 nm，320 nm；柱温：室温； 流速：1.0 mL/min；流动相：甲醇-水(梯度洗脱)，见表1

表1 柴胡皂苷a,d，咖啡酸的色谱条件[5-6]

标准品时间/min甲醇/%水/%柴胡皂苷a3050～10050～0柴胡皂苷d5025～9075～10咖啡酸3010～10090～0

2.2 溶剂的配置

2.2.1对照品溶液的制备

精密称量柴胡皂苷a和柴胡皂苷d对照品各5.0 mg，置5 mL容量瓶中，加甲醇并稀释至刻度配制成每1mL含柴胡皂苷a和柴胡皂苷d 1.0mg的对照品溶液，摇匀，过0.22 μL微孔膜，作为储备液.精密称取咖啡酸对照品5.0 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇并稀释至刻度配置成每1 mL含咖啡酸0.5 mg的对照品溶液，摇匀，过0.22 μL微孔膜，作为储备液.

2.2.2供试品溶液的制备

取3份北柴胡和火绒草供试品各5 g，80%乙醇提取3次，每次30 min，合并提取液，回收后配置成1 mg/mL的样品溶液，过0.22 μL的微孔膜，待用.

2.3 标准曲线及线性范围

精密吸取柴胡皂苷a对照品溶液(质量浓度为1.0 mg/mL)，2、4、6、8、10、12、16、20 μL，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积.以峰面积(A)为纵坐标，柴胡皂苷a质量m(μg)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：y=161.27x+85.83，R2=0.999 2.结果表明，柴胡皂苷a在2.0～20 μL内线性关系良好.

精密吸取柴胡皂苷d对照品溶液(质量浓度为1.0 mg/mL)，2、4、6、8、10、12、14、16、20 μL，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积.以峰面积(A)为纵坐标，柴胡皂苷d质量m(μg)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：y=450.89x-254.78，R2=0.999 1.结果表明，柴胡皂苷d在2.0～20 μL内线性关系良好.

精密吸取咖啡酸对照品溶液(质量浓度为0.5mg/mL)，2、4、6、8、10、12、16、20 μL，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积.以峰面积(A)为纵坐标，咖啡酸质量 (μg)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：y=4 333.9x-357 880，R2=0.999 7.结果表明，咖啡酸在1.0～10 μg内线性关系良好.

2.4 精密度实验

分别精密吸取同一浓度的各对照品10 μL，按照上述色谱条件重复测定6次，柴胡皂苷a、d和咖啡酸的峰面积积分平均值分别为2 006.761、5 206.247、30 049 538，RSD值分别为1.30%，1.22%，1.87%，表明本方法精密度良好.

2.5 重复性实验

分别精密吸取同一供试品溶液6份，按上述色谱条件注入色谱仪，连续进样6次，每次10 μL，柴胡皂苷a、d和咖啡酸的峰面积积分平均值分别为1 422.696，3 433.177，2 409 947.17；RSD值分别为0.55%，1.08%，1.87%，结果表明重现性良好.

2.6 稳定性实验

在上述色谱条件下，制备供试品溶液完成后，立刻精密吸取10 μL测定，记录峰面积，以后在2、4、8、12、24 h各测定1次，记录峰面积，柴胡皂苷a、d和咖啡酸峰面积的RSD值分别为0.55%，1.08%，1.07%，结果可见供试品溶液在24h内稳定性良好.

2.7 加样回收率实验

称取已知含量的样品1 mL，分别精密加入对照品溶液1 mL，按上述色谱条件各进样3次，结果见表2.

表2 加样回收率实验结果

平均回收率/%RSD/%柴胡皂苷a柴胡皂苷d咖啡酸柴胡皂苷a柴胡皂苷d咖啡酸98．3098．3797．62．392．023．42

2.8 样品测定

取上述2.2.2中配置的供试品溶液，按上述色谱条件注入色谱仪，记录峰面积，计算其中柴胡皂苷a、d和咖啡酸的百分含量.经计算，原味药柴胡中柴胡皂苷a和d分别为0.75%和1.72%；原味药火绒草中咖啡酸为0.36%.

3 讨 论

新型坤净栓是以便捷、科学和创新为出发点，解决了阴道栓剂基质遇高温易软化的缺点，增加了药物与腔道黏膜褶皱的充分接触，利于药物的吸收，可用于各种妇科阴道疾病的治疗.本研究采用高效液相色谱法对新型坤净栓原味药柴胡和火绒草中的活性成分柴胡皂苷a、柴胡皂苷d和咖啡酸进行了量的测定，并且柴胡中柴胡皂苷a、d百分含量的总和高于0.30%[7]，取得了较满意的结果.实验方法易于操作，重复性良好，可用于新型坤净栓的质量控制.

[1] 中华人民共和国卫生部. 药品标准中药成方制剂[M]. 北京: 人民卫生出版社, 1998. 166-168.

[2] 陈亚双, 孙世伟. 柴胡的化学成分及药理作用研究进展[J]. 黑龙江医药, 2014, 27(3): 630-633.

[3] 伍仪行, 王建国, 谢家声, 等. 火绒草的研究进展[J]. 中草药, 2000, 31(1): 64-66.

[4] 王 巍, 张 亮. 坤净栓提取工艺及基质筛选研究[J]. 黑龙江中医药, 2009(2): 52-53.

[5] LI X Q, GAO Q T, CHEN X H,etal. High performance liquid chromatographic assay of saikosaponins from radix Bupleuri in China [J]. Biol Pharm Bull, 2005, 28(9): 1736-1742.

[6] KWON H J, SIM H J, LEE S I,etal. Analysis of saikosaponins in Bupleuri Radix and Caihu-shugan-san using reversed-phase HPLC with pulsed amperometric detection [J]. J Sep Sci, 2011, 34(6): 651-658.

[7] 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010. 263-264.

Content determination of effective component of natural medicine in new KunJing suppository

LIU Jie, REN Na, WU Lun, TIAN Zhen-kun

(Reasearch Institute of Traditional Chinese Medicine, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China)

To develop a method for content determination of natural medicine radix bupleuri and edelweiss in Chinese herbal compound new KunJing suppository. In this paper, the content were analyzed using high-performance liquid chromatography (HPLC) analysis. Chromatographic analysis was performed on a Hypersils C18column (250 nm×4.6 mm); the mobile phase was methanol and water with a constant flow rate of 1.0 mL/min. Peaks were detected at 210 nm and 320nm of UV detection. Column temperature was 25 ℃. Saikosaponin a:y=161.27x+85.83,R2=0.999 2; Saikosaponin d:y=450.89x-254.78,R2=0.999 1; Caffeic acid:y=4 333.9x-357 880,R2=0.999 7. The mass concentrations were in the range of 2.0～20.0 μg and 1.0～10.0 μg, respectively, and have a good linear relation with their peak area integral. TheRSDvalues of precision, reproducibility, stability were 1.30%, 1.22% and 1.87%, respectively. The average sample recovery rates were 2.39%, 2.02% and 3.42%, respectively. The established method was sensitive, simple,accurate applicable, and it provides the reference for the quality control of new KunJing suppository.

HPLC; radix bupleuri;edelweiss; content determination

2014-12-17.

黑龙江省教育厅科学技术研究面上项目(12541736)；黑龙江省教育厅科学技术研究面上项目(12541755)；黑龙江中医药大学新药研究基金项目(2013xy02)；黑龙江中医药大学博士创新基金项目(2012bs02).

刘 杰(1985-)，女，博士，研究方向：中药创新药物研究.

田振坤(1955-)，男，教授，博士生导师，研究方向：中药创新药物研究.

R284

A

1672-0946(2015)06-0675-03