HPLC法测定溴甲东莨菪碱片的含量

李 莉（邯郸市食品药品检验中心，河北邯郸 056004）

溴甲东莨菪碱片在临床常用于治疗胃及十二指肠溃疡、胃炎、溃疡性结肠炎、肠蠕动亢进等疾病。其检验标准收载于《国家药品标准》化学药品地方标准上升国家标准第15册[1]。该标准采用容量法测定其含量。此方法操作烦琐，终点不易判定，且操作过程中使用了有剧毒的有机物硝基苯。为此，笔者建立了采用高效液相色谱（HPLC）法测定溴甲东莨菪碱片含量的方法，以为其质量控制提供参考。

1 材料

1.1 仪器

LC-2010型HPLC仪，包括紫外（UV）检测器、LC-solution色谱工作站（日本岛津公司）；AE240型电子天平（瑞士梅特勒-托利多有限公司）。

1.2 药品与试剂

溴甲东莨菪碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100476-200301，纯度：99.4%）；溴甲东莨菪碱片（广州白云山光华制药股份有限公司，批号：130701、130902、130303，规格：1 mg/片）；甲醇为色谱纯，庚烷磺酸钠、冰醋酸为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果[2]

2.1 色谱条件

色谱柱：Shim-pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%庚烷磺酸钠溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）[3]；流速：1.0 ml/min；检测波长：230 nm；柱温：室温；进样量：20µl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 取本品100片（约10.673 g），研细，精密量取细粉适量（约相当于溴甲东莨菪碱0.025 g），置于50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。

2.2.2 对照品溶液 取溴甲东莨菪碱对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成1 ml中约含0.5 mg的溶液。

2.2.3 空白样品溶液 取不含溴甲东莨菪碱的空白样品，按“2.2.1”项下方法制备，即得空白样品溶液。

2.3 空白干扰试验

取“2.2”项下供试品溶液、对照品溶液、空白样品溶液各20 µl，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图，详见图1。由图1可见，供试品溶液与对照品溶液色谱在相应位置处有相同的色谱峰，而空白样品溶液色谱中无此峰，表明空白样品溶液对测定无干扰。

2.4 线性关系考察

精密称取溴甲东莨菪碱对照品0.500 9 g，置于50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液各1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 ml，置于100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以质量浓度（x，mg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得溴甲东莨菪碱的回归方程为y＝2.136×103+3.478×105x（r＝0.999 9）。结果表明，溴甲东莨菪碱质量浓度在0.100 2～1.502 7 mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

图1 高效液相色谱图A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.空白样品溶液；1.溴甲东莨菪碱Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference solution；B.test solution；C.blank sample solution；1.methscopolamine bromide

取“2.2.2”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样5次，记录峰面积。结果，溴甲东莨菪碱峰面积的RSD为0.6%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液适量，分别于室温下放置1、2、6、10、12 h时按“2.1”项下色谱条件连续进样5次，记录峰面积。结果，溴甲东莨菪碱峰面积的RSD为0.9%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取样品（批号：130701）适量，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定。结果，溴甲东莨菪碱含量的RSD为0.7%，表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的样品（批号：130701）适量，共9份，精密加入一定量的溴甲东莨菪碱对照品，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.9 样品含量测定

精密吸取“2.2”项下供试品溶液、对照品溶液各20µl，注入色谱仪，以外标法计算样品中溴甲东莨菪碱的占标示量百分含量，并与笔者前期采用容量法测定的结果进行比较。结果，HPLC法测得的结果与容量法基本相同，详见表2。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

根据溴甲东莨菪碱在水中易溶解、在甲醇中微溶的性质[2]，笔者分别采用流动相及水作为溶剂进行试验。结果发现，溴甲东莨菪碱均可溶解，但用水作为溶剂时，溶解时间少、回收率高、成本低，故采用水作为本研究的溶剂。

3.2 检测波长的选择

本研究发现，溴甲东莨菪碱对照品溶液在230 nm波长处有最大吸收，空白样品溶液在230 nm波长处几乎没有吸收，故选230 nm为本研究的检测波长。

3.3 流动相的选择[4-5]

笔者分别比较了以甲醇-水（40∶60，V/V）、0.04%戊烷磺酸钠溶液-甲醇（60∶40，V/V）、甲醇-0.5%庚烷磺酸钠溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）等为流动相时的分离度。结果发现，以甲醇-0.5%庚烷磺酸钠溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）为流动相时的分离效果较好，故选择其作为本研究的流动相。

3.4 溴甲东莨菪碱与东莨菪碱相比

东莨菪碱在临床上以氢溴酸东莨菪碱常见。氢溴酸东莨菪碱含量测定收载于2010年版《中国药典》[6]，以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.25%十二烷基硫酸钠溶液（磷酸调节pH至2.5）-乙腈为流动相，检测波长为210 nm。但实际工作中发现，辛烷基硅烷键合硅胶应用较少，乙腈毒性较大，且210 nm波长处易出现（甲醇）末端吸收。故本研究采用较为常见的C18柱；采用以甲醇-0.5%庚烷磺酸钠溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）为流动相，配制简单，不需调节pH；采用230 nm为检测波长，避免了（甲醇）末端吸收。笔者采用本研究的色谱条件对氢溴酸东莨菪碱的含量进行测定，又采用氢溴酸东莨菪碱的色谱条件对溴甲东莨菪碱的含量进行测定，因二者所采用的色谱柱、检测波长、流动相均不相同，测定结果发现二者分离度及柱效均较低、峰形较差，故建议二者色谱条件不互换。

综上所述，本方法准确度高、操作简便，可用于溴甲东莨菪碱片的含量测定。

[1]国家药典委员会编.WS-10001-（HD-1447）国家药品标准：化学药品地方标准上升国家标准：第15册[S].2003：152.

[2]国家药典委员会编.WS-10001-（HD-0579）国家药品标准：化学药品地方标准上升国家标准：第6册[S].2002：245.

[3]刘文英.药物分析[M].5版.北京：人民卫生出版社，2003：80-83.

[4]李莉，张钢平，李晓敏，等.平喘镇咳类中成药中非法添加4种化学药品的检验方法[J].中国药房，2008，9（19）：676.

[5]李发美.分析化学[M].5版.北京：人民卫生出版社，2003：417-440.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：560.