塞克硝唑的质量标准研究

潘 勇，何鸽飞，郑金凤，童 达，邱细敏（1.湖南省肿瘤医院，长沙 1001；.长沙市第一医院，长沙 10005；.湖南省食品药品检验院，长沙 10001；.湖南师范大学医学院药学系，长沙 10005）

塞克硝唑（Secnidazole）化学名是1-（2-羟基丙基）-2-甲基-5-硝基咪唑，具有抗多种厌氧菌和原虫的作用，特别是溶解宿主组织内阿米巴病、贾第鞭毛虫等[1-2]。该药由罗纳普朗克乐安（Rhone-Poulenc Rorer）公司研制，于1980年在瑞士上市。我国塞克硝唑的现有质量标准为国家食品药品监督管理局标准（试行）YBH09922005和国家食品药品监督管理局标准YBH00562010。目前，《美国药典》（USP）33版、《英国药典》（BP）2009版、《日本药典》（JP）15版以及2010年版《中国药典》均未收载该品种。本研究考察了塞克硝唑原料药的性状、鉴别、检查、含量测定等项目，以为2015年版《中国药典》塞克硝唑质量标准的拟订提供参考。

1 材料

1.1 仪器

YRT-3型熔点测定仪（天津天光光学仪器有限公司）；UV-2550紫外分光光度计（日本岛津公司）；pHS-3C型精密pH计（上海精科仪器有限公司）；1100高效液相色谱（HPLC）仪，配有VWD紫外检测器（美国安捷伦公司）；GC-2010气相色谱（GC）仪（日本岛津公司）；Precisa-120A电子天平（上海分析仪器厂）。

1.2 药品与试剂

塞克硝唑（A公司，生产批号：200910F01、201006F01、201007F14；B公司，生产批号：20071226、20100724、20100725）；甲醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 性状

根据化学原料药质量标准制定指导原则，性状应分别记述药品的外观、嗅、味、溶解度以及有关物理常数。本研究参照现行的质量标准对塞克硝唑的外观、溶解性、熔点及吸收系数进行了考察和统一。

2.1.1 外观 取本品适量，目视法观察其外观性状。结合6批样品的实际外观，将其外观性状项统一修订为：本品为类白色或微黄色结晶或结晶性粉末，无臭，味苦。

2.1.2 溶解性 取本品适量，依2010年版《中国药典》（二部）凡例试验，结合6批样品的实测结果，将其溶解性行为统一修订为：在甲醇、乙醇、三氯甲烷、丙酮中易溶，在0.1 mol/L盐酸溶液中溶解，在乙醚中略溶，在水中微溶。

2.1.3 熔点 取本品适量，依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅥC测定，结合6批样品的实测结果，将本品熔点统一修订为：73～78 ℃。

2.1.4 吸收系数 取本品适量，精密称定，加0.1 mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1 ml中含塞克硝唑13 μg的溶液，依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅣA紫外-可见分光光度法，在277 nm波长处测定吸光度，计算吸收系数。结合6批样品的实际测定值，同时参照国家食品药品监督管理局标准YBH00562010，将吸收系数修订为：331～349。

2.2 鉴别

我国现行的两个质量标准中均收载了化学反应、紫外光谱鉴别和红外光谱鉴别。笔者通过对6批样品进行考察，化学反应和红外光谱鉴别未作修订；紫外光谱鉴别考虑到样品的溶解性，参照国家食品药品监督管理局标准YBH00562010进行了统一：取“2.1.4”项下的溶液，依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅣA紫外-可见分光光度法测定，在277 nm波长处有最大吸收，在241 nm波长处有最小吸收。

2.3 检查

根据《化学原料药质量标准制定指导原则》，检查项目的设置应考虑药品的有效性、纯度要求和安全性。笔者参照现行质量标准设置了乙醇溶液的澄清度与颜色、酸碱度、一般杂质检查（硫酸盐、炽灼残渣、重金属）、水分或干燥失重、有关物质及残留溶剂检查项。

2.3.1 乙醇溶液的澄清度与颜色 取本品适量，加乙醇溶解并稀释制成每1 ml中约含20 mg塞克硝唑的溶液。结果，6批样品的溶液均澄清，其所显溶液的颜色均浅于黄色或黄绿色2号标准比色液。

2.3.2 酸碱度 取本品约0.1 g，加水10 ml使溶解，依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅥH测定。结合6批样品的实际测定值，同时参照国家食品药品监督管理局标准（试行）YBH09922005，将其酸碱度确定为：pH为5.5～7.5。

2.3.3 硫酸盐 取本品1.0 g，加水100 ml使溶解，滤过，取续滤液40 ml，依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅧB检查，与标准硫酸钾溶液2.0 ml制成的对照液（0.05%）比较。结果，6批样品的供试品溶液所显浑浊均浅于对照溶液。

2.3.4 炽灼残渣 取本品1.0 g，依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅧN法检查，遗留残渣不得超过0.1%。结果，6批样品均符合规定。

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2.3.5 重金属 取“2.3.4”项下遗留的残渣适量，依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅧH第二法检查。结果，6批样品重金属的质量分数均不超过百万分之十。

2.3.6 水分和干燥失重 取本品适量，分别依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅧM第一法水分测定法和附录ⅧL干燥失重法测定，结果显示两种方法结果无显著性差异。由于采用60 ℃减压干燥的方法，操作更简单快捷，所以拟定采用60 ℃减压干燥至恒质量的方法来测定样品的水分。由于本品含半分子结晶水[3]，按理论值计算含水量应为4.6%，考虑样品的半分子结晶水和储存过程中的吸附水，将其限度定为：干燥减失重应为4.0%～6.0%。

2.3.7 有关物质 采用HPLC法对有关物质进行考察。现行的质量标准中均收载有此检查项，但色谱条件不尽相同，并且由于本品是以2-甲基-5-硝基咪唑作为起始原料，现行的标准均未对2-甲基-5-硝基咪唑进行控制，不利于控制产品质量[4-5]，因此有必要对其标准进行研究。

（1）方法的确定。依照2010年版《中国药典》（二部）附录ⅤD HPLC法测定[6]，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（20∶80，V/V）为流动相，检测波长为318 nm。理论板数按塞克硝唑峰计算不低于2 000，塞克硝唑峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。取本品适量，加流动相溶解并稀释制成1 ml中约含0.3 mg的溶液，作为供试品溶液；另取2-甲基-5-硝基咪唑对照品约15 mg，精密称定，置于100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2 ml，置于10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密量取供试品溶液1 ml与对照品贮备液1 ml，置于同一100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液20 μl注入HPLC仪，调节检测灵敏度，使塞克硝唑色谱峰的峰高为满量程的10%～20%，再精密量取供试品溶液及对照品溶液各20 μl，分别注入HPLC仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。

（2）样品有关物质检查。取本品适量，按上述色谱条件检查有关物质，结果见表1。

表1 有关物质检查结果Tab 1 Results of related substances

2.3.8 残留溶剂 由于原料生产工艺中可能使用了乙酸乙酯、二氯甲烷、甲苯，所以本研究对这3种残留溶剂进行了考察。

（1）方法的确定。取本品适量，精密称定，加二甲亚砜稀释制成每1 ml中约含20 mg的溶液，作为供试品溶液；另取甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷各适量，精密称定，加二甲亚砜溶解，制成每1 ml中约含甲苯0.017 8 mg、乙酸乙酯0.1 mg和二氯甲烷0.012 mg的溶液，作为对照品溶液。依2010年版《中国药典》（二部）附录ⅧP第三法残留溶剂法测定，以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷作为固定液；起始柱温90 ℃，维持5 min，以每分钟20 ℃的速率升温至170 ℃，维持5 min；检测器温度为200 ℃；进样口温度为220 ℃。甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷的分离度应符合要求。精密量取供试品和对照品溶液各0.5 μl，注入GC仪，按外标法以峰面积计算，应符合要求。

（2）样品残留溶剂检查。取本品适量，按上述方法检查残留溶剂，结果均未检出甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷。

2.4 含量测定

由于本品分子结构中含有咪唑环，依据原料药首选容量分析法测定含量的原则[7-8]，采用非水滴定法测定含量。由于现行质量标准中所选溶剂和指示剂不尽相同，故有必要对其进行研究和统一。

2.4.1 溶剂和指示剂的选择 取本品（厂家：A公司，批号：201006F01）约0.13 g，共8份，其中2份加入冰醋酸20 ml，2份加入冰醋酸10 ml+醋酐10 ml、2份加入冰醋酸5 ml+醋酐15 ml、2份加入醋酐20 ml使溶解。在同一溶剂溶解的2份样品中，分别加入结晶紫指示液及萘酚苯甲醇指示液，均用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定，用电位滴定法指示终点。结果表明，采用冰醋酸20 ml作为溶剂时，滴定终点突跃明显；采用结晶紫作为指示液时，突跃点时溶液的颜色突变为亮绿色；采用萘酚苯甲醇作为指示液时，突跃点时溶液的颜色突变为亮绿色，两者无显著性差异。考虑到检验的经济性，选择结晶紫作为指示剂。

2.4.2 方法的确定 取本品约0.13 g，加入冰醋酸20 ml使溶解，加入结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液现亮绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于18.52 mg的C7H11N3O3。电位滴定曲线详见图1（样品批号：201006F01）。

图1 电位滴定曲线Fig 1 The profile of the potentiometric titration

2.4.3 电位滴定法与容量分析法的比较 取本品（A公司，批号：201006F01）约0.13 g，加入冰醋酸20 ml使溶解，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定，分别采用电位滴定法和容量分析法（结晶紫为指示液）进行测定。结果，两种方法测定结果无显著性差异，详见表2。

表2 含量测定方法结果比较（%）Tab 2 Results of content determination（%）

2.4.4 回收率试验 精密称取本品（A公司，批号：201006F01）约0.052、0.065、0.078 g，各3份，分别置于锥形瓶中；另精密加入60 ℃减压干燥至恒质量的塞克硝唑对照品约0.052、0.065、0.078 g，各3份，分别加入冰醋酸20 ml溶解后，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液现亮绿色，并将滴定结果用空白试验校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于18.52 mg的C7H11N3O3，结果见表3。

2.4.5 重复性试验 取本品约0.13 g（A公司，批号：201006F01），共6份，精密称定，加入冰醋酸20 ml溶解后，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液现亮绿色，并将滴定结果用空白试验校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于18.52 mg的C7H11N3O3。结果，RSD＝0.42%（n＝6），表明该方法重复性良好。

表3 回收率试验结果Tab 3 Results of recovery rates

2.4.6 样品含量测定 样品含量测定结果详见表4。

表4 样品含量测定结果（%）Tab 4 Results of sample’s content（%）

3 讨论

塞克硝唑是硝基咪唑类化合物，与甲硝唑等传统的硝唑类药物有相似的化学结构，具有生理活性更强、不良反应少、半衰期长等特点[9]。本文统一了其性状、鉴别、检查与含量测定方法，可为塞克硝唑质量标准的修订提供依据。

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