四川地区猪传染性胸膜肺炎流行病学调查

张 俊，张 飞，文心田，冉 曦，黄小波，伍 锐，文翼平，曹三杰

(四川农业大学 动物医学学院/猪病研究中心，四川 成都 611130)

猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia，PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)引起的一种以肺炎和胸膜炎症状为特征的接触性呼吸道疾病，该病广泛存在于所有养猪国家，常与其它病原混合感染，不同年龄、性别的猪均可感染[1]。该病导致猪的生产性能下降，给养猪业造成严重的经济损失。及时准确地掌握该病的流行情况是预防和控制的关键，其中血清学检测是流行病学研究的重要手段之一，具有准确、快速的特点[2]。

本研究对采集自2014 年1 月～12 月四川省16个地区、各生产阶段猪的28 个规模化猪场临床样品感染APP 的情况进行了血清学调查，为制定该病有效的防控措施提供了流行病学基础数据。

1 材料和方法

1.1 样品采集及主要试剂 2014 年1 月～12 月从四川地区16 个市的28 个规模化猪场共计采集临床样品552 份(表1)。随机从被检猪的前腔静脉采血，收集血清保存待检。ApxⅣ-ELISA 抗体检测试剂盒购自武汉科前动物生物制品有限责任公司。

1.2 血清样品的检测 按照ApxⅣ-ELISA 试剂盒说明书操作方法对采集的血清样品进行检测。实验成立的条件为：阳性对照孔OD630nm值均≥0.6；阴性对照孔OD630nm均<0.3。

如果S(样品孔OD630nm值)≥P(阳性对照孔平均OD630nm值)×0.25，判为阳性；如果S

1.3 统计学分析 调查结果资料建立统一的SPSS数据库，采用统计软件SPSS 16.0 进行变量间的相关分析，建立Logistic 回归分析模型，以是否为阳性为因变量，以地区、猪群和采样时间为自变量，以p<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同地区阳性检出率及分析 对来自四川省16 个不同地区采集的552 份血清样品进行检测，结果显示：四川地区PCP 的总体阳性检出率为20.29%(112/552)，成都、绵阳、眉山等地均有APP 感染，并且感染水平不同，呈地方性流行，其中成都和攀枝花的阳性率分别为42.98 %和42.86 %，为总体阳性检出率的2 倍以上(表1)。多因素Logistic 回归分析显示：地区不同对是否阳性的影响具有统计学意义(Wald 值为2.997，p 值为0.043<0.05)，表明采样地区与阴阳性具有显著的相关性。

表1 四川地区APP 血清阳性检出率统计结果Table 1 The epidemiological status of pigs infected with APP in different regions

2.2 不同猪群阳性检出率及分析 对不同猪龄的血清样品进行检测，结果显示：PCP 阳性检出率与猪的生产阶段具有密切关系，不同生产阶段猪血清阳性检出率具有较大差异。种母猪阳性检出率为44.83 %，哺乳仔猪、保育猪、育肥猪的阳性检出率分别为22.22 %、7.66 %、3.95 %。种母猪与其它猪相比血清阳性检出率更高(表2)。Logistic 分析结果显示：不同猪龄对阴阳性也具有统计学意义(Wald值为40.974，p 值<0.001)，并且猪龄与阴阳性表现为显著的正相关性(回归系数B>0)。

表2 不同年龄猪群APP 血清阳性检出率统计结果Table 2 The epidemiological status of pigs infected with APP at different ages

由于PCP 不能垂直传播[3]，本研究针对眉山采集了5 头母猪血清样品，每头母猪对应采集其哺乳仔猪样品2 份进行检测。15 份血清样品分为5 组，编号为1～5，每组3 个样品，结果显示：5 组中有3 组哺乳仔猪样品检测为阳性，而其对应母猪血清样品检测均为阴性，未发现母猪与哺乳仔猪同时感染APP 的现象，表明APP 确实不能垂直传播。

2.3 不同季节的阳性检出率及分析 对2014 年不同季节的血清样品进行检测，结果显示：该病四季均有发生，但四川地区以夏季和冬季多发，并且不同季节阳性检出率表现出较大的差异。各变量间的相关分析显示：地区、猪龄和采样季节与阳性率有显著的相关性，但在多因素Logistic 回归分析模型中采样季节对应的p 值大于0.05，没有统计学意义，因此认为对阴阳性的影响作用不显著。

表3 不同季节APP 血清阳性检出率统计结果Table 3 The epidemiological status of pigs infected with APP in different seasons

3 讨论

APP 有15 种血清型，各血清型之间缺乏良好的交叉保护，这给PCP 的诊断和防治带来了困难[4-5]。目前，APP 的实验室诊断方法有PCR 法或采用间接血凝抑制实验(IHA)、ELISA 等[6]。本研究首次采用15 种APP 血清型均分泌的ApxⅣ作为抗原进行流行病学调查，其具有特异性强和灵敏度高，能够区分APP 全菌灭活苗免疫和野毒感染的特点[7]，也能特异性区分副猪嗜血杆菌和APP。ApxⅣ-ELISA 试剂盒的使用大大提高了APP 检测的准确度。

本研究结果相比樊祜卿等2009 年报道的18.5%阳性检出率有所上升[8]，表明在2009 年～2014 年，四川地区PCP 感染有小幅度的提升，该病在四川地区的感染呈上升趋势。同时，实验过程中，虽然有些地区的阳性检出率很低，但却发现这些地区存在大量可疑阳性血清，这些可疑感染猪只随着日龄和季节变化极有可能转变为阳性感染猪[9]，四川地区APP 的流行程度还可能会进一步上升，因而继续加强四川地区APP 流行情况的监测和养猪场对APP 的防控显得尤为重要。

本研究对PCP 在四川地区的流行病学调查，样品来源多，覆盖面广，从地区、采样季节、不同猪龄3 个不同角度对四川地区PCP 流行情况进行调查，通过应用统计学Logistic 回归分析，科学分析了四川地区PCP 的流行特点和流行情况，为四川地区规模化养猪场对PCP 的防控具有重要参考意义。

[1]Ito H,Matsumoto A.Isolation and genetic characterization of an Actinobacillus pleuropneumoniae serovar K12:O3 strain[J].J Vet Diagn Invest,2015,27(1):102-106.

[2]Ting S H,Tan H C,Wong W K,et al.Seroepidemiology of neutralizing antibodies to Japanese encephalitis virus in Singapore:continued transmission despite abolishment of pig farming?[J].Acta Trop,2004,92(3):187-191.

[3]Wongnarkpet S,Pfeiffer D U,Morris R S,et al.An on-farm study of the epidemiology of Actinobacillus pleuropneumoniae infection in pigs as part of a vaccine efficacy trial[J].Prev Vet Med,1999,39(1):1-11.

[4]姜宏泽，李英，文心田，等.胸膜肺炎放线杆菌抗体ApxⅣ-Dot-PPA-ELISA 检测方法的建立[J].中国兽医科学，2015，45(06)：633-638.

[5]肖国生，李娟，黄小波，等.胸膜肺炎放线杆菌铁离子摄取的分子机理[J].中国预防兽医学报，2010，01：77-80.

[6]Wei Bo,Li Fang,Yang Hui-cui,et al.Magnetic beads-based enzymatic spectrofluorometric assay for rapid and sensitive detection of antibody against ApxIVA of Actinobacillus pleuropneumoniae[J].Biosens Bioelectron,2012,35(1):390-393.

[7]Yan B,Ma J Z,Yu T F,et al.Development of an indirect ELISA with epitope on nonstructural protein of Muscovy duck parvovirus for differentiating between infected and vaccinated Muscovy ducks[J].Lett Appl Microbiol,2014,59(6):631-635.

[8]樊祜卿，储岳峰，贺英，等.四川省部分地区猪传染性胸膜肺炎的流行病学调查[J].中国动物检疫，2009，(05)：49-50.

[9]Tobias T J,Bouma A,Van Den Broek J,et al.Transmission of Actinobacillus pleuropneumoniae among weaned piglets on endemically infected farms[J].Prev Vet Med,2014,117(1):207-214.