不同方法测定痤疮患者外周血中IL-4及IFN-γ水平分析

全洪兵 于国东 罗娇娜 陈伟才 李琳 李广华

不同方法测定痤疮患者外周血中IL-4及IFN-γ水平分析

全洪兵 于国东 罗娇娜 陈伟才 李琳 李广华

目的用不同方法检测痤疮患者外周血中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的细胞因子表达量, 探讨痤疮患者相应的免疫功能的失衡状况, 从而为临床采用更有效的检测和治疗的方法提供理论依据。方法60例痤疮患者为实验组,60例健康体检者为对照组, 分别采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法、流式细胞术两种方法, 检测外周血中IL-4及IFN-γ水平, 比较两种方法测定实验组及对照组血浆IL-4及IFN-γ水平的不同。结果双抗体夹心ELISA法检测实验组血清中IL-4表达量为(45.48±17.36)ng/L, 相对于对照组显著升高(P＜0.001)；IFN-γ为(40.59±16.47)ng/L, 相对于对照组显著降低(P＜0.001), IFN-γ/IL-4比值相对于对照组显著降低(P＜0.001)。流式细胞术检测实验组外周血中胞内IL-4占总T细胞百分比为(6.767±1.477)%, 相对于对照组显著升高(P＜0.01), IFN-γ为(5.70±3.766)%, 相对于对照组显著降低(P＜0.001), IFN-γ/IL-4比值相对于对照组显著降低(P＜0.001)。结论 两种方法进行IL-4及IFN-γ测定表达水平不同, 但是痤疮患者与健康人相比IL-4及IFN-γ表达升高或降低趋势一致。

双抗体夹心酶联免疫吸附试验；流式细胞术；痤疮；白细胞介素4 ；γ干扰素

痤疮(acne)是临床常见毛囊皮脂腺慢性炎症性皮肤病,好发于青春期男女[1]。Andrews《皮肤病学》中指出：10余岁青少年中90%发生过痤疮[2]。痤疮的发病机制除因皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管过度角化、痤疮丙酸杆菌引发炎症及性激素分泌对皮脂腺调控异常等因素外, 近年来的研究表明, 免疫失衡在痤疮炎症发展中起关键性作用[3]。在痤疮皮损中, 角质形成细胞和皮脂腺细胞均可表达TLR-2 和TLR-4 并诱导产生IL-8、IL-2、肿瘤坏死因子α 及IFN-γ等细胞因子, 引起粒细胞、巨噬细胞趋化聚集[4,5], T 细胞介导的细胞免疫活化反应参与痤疮发病过程, 并随着病情的加重而增强, IL-4的水平在此过程会明显升高[6]。本实验旨在通过用ELISA方法与流式细胞术检测痤疮患者外周血中血清IL-4、IFN-γ的细胞因子水平与外周血中胞内IL-4、IFN-γ占总T细胞百分比水平, 探讨痤疮患者相应的免疫功能的失衡状况, 从而为临床采用更有效的检测和治疗方法提供理论依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 研究对象选取本院及广东省人民医院门诊2013年8月～2014年3月门诊痤疮患者共60例为实验组,选择60例健康体检者为对照组, 采用的纳入及排除标准如下[7]：纳入标准：①符合Pillsbury诊断标准；②痤疮分级明确；③年龄16～30岁。排除标准：①孕妇及哺乳期妇女；②有严重心肝肾及免疫系统疾病者；③近1个月有应用糖皮质激素及其他免疫抑制剂。两组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及处理 所有研究对象均于清晨空腹时采肘静脉血, 分A、B两管, A管2 ml EDTA抗凝, B管2 ml肝素钠抗凝。A管及时3000 r/min(离心半径15 cm)离心20 min,分离吸取血浆, 血浆标本于-20℃冻存, 待统一条件下以ELISA检测。B管直接流式细胞术检测。

1.2.2 检测方法 检测血浆IL-4及IFN-γ水平, 分别在本院以及广东省人民医院检测。本院采用双抗体夹心ELISA法, 试剂盒由上海将来试剂有限公司提供, IL-4批号：201312, IFN-γ批号：201312, 严格按说明书操作。广东省人民医院采用流式细胞术检测Th1/Th2细胞(CD3/ IFN-γ/ IL-4)(试剂盒为美国BD提供, FastImmune Cytokine Value, 货号：340460, 批号：615324), 严格按照说明书操作。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差 (±s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 双抗体夹心ELISA方法检测外周血血清中IFN-γ、IL-4的表达水平分别为(40.59±16.47)ng/L、(45.48±17.36)ng/L, IFN-γ/IL-4为(0.9848±0.4403), 与对照组进行比较, 差异具有统计学意义(P＜0.001)。见表1, 图1(A)。

2.2 流式细胞术检测外周血中胞内IFN-γ、IL-4占总T细胞的百分比分别为(5.70±3.766)%、(6.767±1.477)%, IFN-γ/ IL-4为(0.8962±0.466), 与对照组进行比较, IFN-γ百分比与IFN-γ/IL-4比值差异具有统计学意义(P＜0.001), IL-4比值比较差异具有统计学意义(P＜0.01)。见表1, 图1(B)。

表1 两组不同方法IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平检测比较 (±s)

表1 两组不同方法IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平检测比较 (±s)

注：与对照组比较,aP＜0.001,bP＜0.01

检测方法 组别 例数 IFN-γ IL-4 IFN-γ/IL-4 ELISA方法 实验组(ng/L) 60 40.59±16.47a 45.48±17.36a 0.9848±0.4403a对照组(ng/L) 60 75.64±23.21 30.13±12.13 2.819±1.314流式细胞术 实验组(%) 60 5.70±3.766a 6.767±1.477b 0.8962±0.466a对照组(%) 60 10.92±6.036 5.683±1.935 2.12±1.203

图1 两组不同方法IFN-γ、IL-4水平检测比较

2.3 ELISA方法与流式细胞术检测IFN-γ/IL-4比值比较差异无统计学意义(P＞0.05), 表明两种方法检测IFN-γ/IL-4具有一致性。

3 讨论

痤疮的发病机制中, 免疫失衡在痤疮炎症发展中起关键性作用[8]。T 细胞介导的细胞免疫活化反应和体液免疫均参与了痤疮的发病机制, T细胞介导的细胞免疫活化反应参与痤疮发病过程[9]。

本文采用ELISA方法与流式细胞术检测痤疮患者外周血中血清IL-4、IFN-γ的细胞因子水平与外周血中胞内IL-4、IFN-γ占总T细胞百分比水平与对照组进行对比分析。双抗体夹心ELISA方法检测外周血血清中IFN-γ、IL-4的表达水平, 与对照组进行比较, 差异具有统计学意义(P＜0.001)。流式细胞术检测外周血中胞内IFN-γ、IL-4占总T细胞的百分比, 与对照组进行比较, IFN-γ百分比与IFN-γ/IL-4比值比较差异具有统计学意义(P＜0.001), IL-4比值比较差异具有统计学意义(P＜0.01)。ELISA方法与流式细胞术进行比较, IFN-γ/IL-4比值比较差异无统计学意义(P＞0.05), 表明两种方法检测IFN-γ/IL-4具有一致性。

本文研究说明痤疮患者外周血中无论是血清中还是胞内, 都存在IFN-γ/IL-4比例相对于正常人显著降低, 细胞因子水平失衡。痤疮治疗上目前临床主要采用抗感染、调节内分泌、抗雄激素、中药熏蒸[10]等常规药物方法, 但治疗存在不良反应多、易反复等问题, 可通过细胞主动免疫治疗,与免疫抑制剂等从调节机体免疫功能方面等新方法着手治疗痤疮, 可能达到良好效果。

[1]赵辨.临床皮肤病学.第3版.南京:江苏科学技术出版社,2001:935.

[2]Odom RB, James WD, Berger TG. Andrews Diseases of the Skin.9th ed. Philadelphia: Sauders,2000:284-306.

[3]Jugeau S, Tenaud I, Knol AC, et al. Induction of toⅡ-Iike receptors by Propion ibacterium acnes. Br J Dermatol,2005,153(6):1105-1113.

[4]McCaskill JG, Chason KD, Hua X, et al. Puomonary inmune responses to Propionibacterium acnes in C57BL/6 and BALB/cmice. Am J Respir Cell Mol Biol,2006,35(3):347-356.

[5]林新瑜, 罗旭松, 董巍, 等.痤疮患者血清白介素-1α、白介素-6、白介素-8和α-肿瘤坏死因子水平的检测分析.临床皮肤科杂志,2003,32(6):435-436.

[6]吴小红, 刘瓦利.细胞免疫和体液免疫在寻常性痤疮发病中作用.中国麻风皮肤病杂志,2006,22(11):915-916.

[7]Lehmann HP, Robinson KA, Andrews JS, et al. Acne therapy: a methodologic review. J Am Acad Dermatol,2002,47(2):231-240.

[8]李佳妍.痤疮发病机制中免疫应答的研究进展.医学综述杂志,2008,25(9):1124-1126.

[9]马喜兴, 刘科峰. 座疮发病机制中的免疫因素.中国美容医学杂志,2011,20(4):695-696.

[10]梅莉红, 干慧慧, 曾义斌, 等.中药熏蒸治疗轻、中度寻常痤疮疗效观察及血清细胞因子水平检测.中国皮肤性病学杂志,2011,25(9):716-718.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.15.025

2015-04-27]

525300 广东省佛山市顺德区中医院检验科(全洪兵于国东 陈伟才 李琳)；广东省佛山顺德区计生服务中心检验科(罗娇娜)；广东省人民医院检验科(李广华)