酪氨酸激酶ALK、ROS1、RET融合基因与肺癌临床特征的关系分析

潘放 任庆兰

酪氨酸激酶ALK、ROS1、RET融合基因与肺癌临床特征的关系分析

潘放 任庆兰

目的探讨肺癌酪氨酸激酶ALK、ROS1、RET融合基因与其临床特征的关系。方法采用蛋白免疫印迹法检测410例肺癌肿瘤组织标本中ALK、ROS1、RET基因蛋白的表达情况，分析ALK、ROS1、RET基因突变阳性患者的临床病理特征，并与阴性患者进行比较。结果ALK、ROS1基因突变阳性患者性别和病理类型与RET基因突变阳性患者比较有显著差异，差异具有计学意义(P＜0．05);所有基因突变阳性患者未发现同时存在2种及以上的基因突变同时发生的情况;基因突变阳性患者与阴性患者在性别、年龄(岁)、抽烟史、病理类型方面比较，差异无统计学意义(P＞0．05)。结论ALK、ROS1、RET突变阳性患者临床病理类型上有各自特征，三种基因在肺癌的表达中相互排斥。

肺癌;酪氨酸激酶;融合基因;临床特征

(The Practical Journal of Cancer，2015，30:958～960)

肺癌是临床常见恶性肿瘤，大量临床研究表明肺癌与基因改变相关［1］。目前遗传改变可对靶向药物的临床活性产生影响已经获得了多数专家的认可，酪氨酸激酶基因突变在肺癌分子治疗靶点中的应用较多［2］。酪氨酸激酶种类较多，其中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)、ROS1激酶(c－ros oncogene 1 receptor tyrosine kinase，ROS1)以及RET激酶(ret proto－oncogene，RET)融合基因作为肺癌靶向治疗的新型潜在治疗位点［3］，临床研究相对较少。现对肺癌酪氨酸激酶ALK、ROS1、RET融合基因与临床特征的关系进行分析，为肺癌的靶向治疗提供参考，报告如下。

1 材料与方法

1．1 一般资料

选取2012年1月至2014年1月我院收治的410例肺癌患者作为研究对象。所有患者均经常规影像学及组织病理学检查确诊，组织病理分型参照世界卫生组织(WHO)肺癌组织学分类标准［4］。所有患者均经常规纤维支气管镜下肺活检取得新鲜肺癌或胸膜组织标本共410例。肿瘤组织标本取出后立即保存于液氮中，所有标本均保存于－80℃低温冰箱中待检。其中男性患者338例，女性患者72例，患者年龄为岁，平均年龄为(58．77±8．91)岁。病理类型:鳞癌248例，腺癌62例，小细胞肺癌84例，其他16例。肿瘤分化程度:高分化75例，中分化159例，低分化176例。312例有抽烟史。

1．2 方法

所有410例肿瘤组织标本均经福尔马林固定石蜡包埋后切片，采用蛋白免疫印迹(western blotting，WB)法检测肿瘤组织标本中ALK、ROS1、RET基因蛋白的表达情况，分析ALK、ROS1、RET基因突变阳性患者临床病理特征，比较基因突变阳性患者与阴性患者临床病理特征。

1．3 图像采集及结果判定

使用400倍高倍显微镜采集图片，随机选取5个视野，每个视野下细胞数不低于100个，计数阳性表达细胞占总细胞数的百分比，取5个视野的平均值作为阳性细胞表达结果。

1．4 统计学分析

应用SPSS 19．0统计软件进行统计分析，计量资料结果用均数±标准差(±s)表示，治疗前后及组间比较采用t检验，计数资料以构成比表示，采用χ2检验。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 ALK、ROS1、RET基因突变阳性患者临床病理特征分布

ALK基因突变阳性患者12例，其中10例为基因融合，2例为野生型;ROS1基因突变阳性患者10例，其中8例为基因融合，2例为野生型;RET基因突变阳性患者4例，均为基因融合;ALK、ROS1基因突变阳性患者在性别和病理类型方面上与RET基因突变阳性患者有显著差异，差异具有计学意义(P＜0．05)(表1)。所有基因突变阳性患者未发现同时存在2种及以上的基因突变同时发生的情况，表明ALK、ROS1与RET基因在肺癌的表达中相互排斥。

表1 ALK、ROS1、RET基因突变阳性患者临床病理特征分析(例，%)

2．2 基因突变阳性与阴性患者临床病理特征比较

基因突变阳性患者与阴性患者在性别、年龄、抽烟史、病理类型方面比较，差异无统计学意义(P＞0．05) (表2)。

3 讨论

ALK属于1种跨膜受体的酪氨酸激酶，棘皮动物微管相关蛋白4－间变性淋巴瘤激酶(EML4－ALK)融合基因是非小细胞肺癌的一个新的分子亚型［5］。临床研究表明，EML4－ALK融合基因引发肺癌病变的机制与表皮生长因子受体突变诱发癌症的机制十分相似，均表现出对癌基因的依赖特性［6］。本研究中ALK基因突变阳性患者的临床特征主要为男性、年龄≥59岁、有抽烟史、病理类型以小细胞肺癌和腺癌为主。提示ALK基因突变已经成为了肺癌的一个重要分子亚型［7］，而Audigier等［8］采用ALK抑制剂治疗肺癌得到的前期临床结果较为满意，也证实了这一点。本研究中采用免疫印迹法检测出的ALK融合基因阳性患者应用免疫组化法进行验证时均表现为弱表达，可能与ALK特异性抗体不适用于免疫组化技术有关［9］。提示不同抗体和检测技术可能对研究结果产生较大影响［10］。

ROS1重排基因为非小细胞肺癌(NSCLC)的1个酪氨酸激酶受体，属于NSCLC的重要临床亚型基因［11］。由于ROS1基因阳性的肺癌患者数量较少，临床上缺少对于ROS1基因阳性者的人口统计特征和融

合类型特异性特征的资料［12］，Cheng等［13］的研究中腺癌为ROS1基因阳性NSCLC患者的主要病理类型，而本研究中10例ROS1突变阳性患者临床特征主要表现为男性、≥59岁、有抽烟史、病理类型以鳞癌为主，这可能与本研究410例患者中鳞癌较多有关。Chiari等［14］的研究结果显示ROS1基因的表达与ALK基因相互排斥，本研究中未出现1例存在两种及以上的基因突变同时发生的情况，表明ALK、ROS1与RET基因在肺癌的表达中相互排斥。

RET融合基因也为肺癌中的重要分子亚型，在NSCLC中表达率较低［15］。本研究中发现的4例RET基因突变阳性患者病理类型均为小细胞肺癌，与上述研究报道一致。而本研究中所有标本均经纤维支气管镜采集，提示经纤维支气管镜采集的小标本可以用来检测肺癌患者的基因突变情况［16］。另外，本研究中4例RET基因突变阳性患者临床特征主要为女性、无特定年龄段、抽烟史有无均可。提示RET融合基因表达与年龄或抽烟史无紧密联系。另外，本研究对基因突变阳性患者与阴性患者临床及病理特征进行了比较，结果显示基因突变阳性患者与阴性患者性别、年龄、抽烟史、病理类型分布上比较，差异无统计学意义。

总之，ALK、ROS1、RET突变阳性患者临床和病理类型各有特征，3种基因在肺癌的表达中相互排斥。

表2 基因突变阳性患者与阴性患者临床病理特征比较(例，%)

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Relation between Tyrosine Kinase ALK，ROS1，RET Fusion Gene and Clinical Features of Lung Cancer

PAN Fang，REN Qinglan．The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，400042

ObjectiveTo explore the relation between tyrosine kinase ALK，ROS1，RET fusion gene and clinical features of lung cancer．MethodsThe gene expression for ALK，ROS1，RET in 410 cases of lung cancer were tested by Western blot．The clinicopathological characteristics of patients with positive and negative ALK、ROS1、RET gene mutation were compared．ResultsGender and pathological types between patients with positive ALK、ROS1 and RET gene mutation had significant difference(P＜0．05)．There was no cases with 2 types of gene mutation;There had no significant difference in gender，age，smoking history，pathological type between patients with positive and negative gene mutation(P＞0．05)．ConclusionALK，ROS1，RET positive mutation gene have different clinicopathological characteristics，the 3 gene are mutually exclusive in lung cancer．

Lung cancer;Tyrosine kinase;Fusion gene;Clinical features

10．3969/j．issn．1001－5930．2015．07．003

R734．2

:A

:1001－5930(2015)07－0958－03

2014－11－05

2015－04－07)

(编辑:吴小红)

400042重庆医科大学附属第一医院肿瘤科

任庆兰