胃癌组织中c-erbB-2癌基因表达与胃癌主要病理特征的关系

胃癌组织中c-erbB-2癌基因表达与胃癌主要病理特征的关系

丁兆明

(莱州市人民医院 中心实验室，山东 莱州261400)

原癌基因c-erbB-2(又称neu或HER-2)属于受体酪氨酸激酶Ⅰ类亚家族，定位于人类17号染色体q21区带上，编码产物为Mr18500的跨膜糖蛋白(故又称P185)，参与对细胞生长、繁殖、分裂的调控，其异常表达或基因突变时，使某些不正常细胞的独立生长能力失控，从而发展为肿瘤细胞[1,2]，可作为卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌及消化道肿瘤预后的参考指标[3]。笔者应用非放射性原位杂交技术检测胃癌标本中c-erbB-2基因的扩增情况，分析了其与肿瘤分化、肿瘤浸润和淋巴结转移的关系，现报告如下。

1材料与方法

1.1临床标本2011年1月-2013年3月，经我院病理确诊、手术切除的胃癌标本81例，男52例，女29例；年龄35岁-67岁，平均57.8岁。其中贲门癌35例，胃体癌29例，胃窦癌17例。胃癌组织按Lauren分型，弥漫型48例，肠型33例。根据癌组织有无明显乳头及腺管结构形成，分为分化较差46例，分化较好35例。浸润浅肌层11例，浸润深肌层70例。有淋巴结转移57例，无淋巴结转移24例。癌组织经中性福尔马林固定后，直接在-26℃冰冻切片机上切片，厚约4-6 μm，然后粘贴于经APES处理的玻片上。

1.2c-erbB-2 DNA探针① c-erbB-2 cDNA探针由日本东京大学yamamoto教授惠赠，探针长度461 bp，为c-erbB-2 cDNA的Dra Ⅰ和Sma Ⅰ双酶切产物。②随机引物延伸法进行非放射性地高辛配基-11-dUTP掺入标记，标记试剂盒为Boehringer mannheims公司产品(由华美生物工程公司提供)，点杂交检测探针灵敏度为0.1 pg DNA。

1.3原位杂交①用0.1N HCl、RNase A、蛋白酶k处理切片，0.1%甘氨酸中止。②滴加预杂交液(含有：4×SSC，50%甲酰胺，1×Denhardt液，0.5%PEG，0.5 mg/ml ssDNA)，放置室温1 h。③再加杂交液(探针浓度0.2 μg/ml)，用硅化盖片复盖组织，置甲酰胺湿盒内，95℃ 10-15 min。④直接移置42℃湿箱中杂交过夜。⑤在2×SSC 中滑除盖片，洗涤后加碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体(1∶500稀释)2 h。⑥洗涤后加NBT和BCIP混合底物，避光显色，TE终止，核固红复染，封片。⑦显微镜检查，肿瘤细胞核内出现细小的紫蓝色至粗大的深紫色颗粒为阳性。

图1　胃癌细胞核内出现的c-erbB-2阳性颗粒(400×)

2结果

2.1c-erbB-2在胃癌组织中的表达胃癌标本中c-erbB-2扩增阳性结果见图1，阳性率为50.6%。81例胃癌标本扩增结果与病理特征的关系见表1。

2.2C-erbB-2的表达与胃癌主要病理特征或恶性程度的相关性分析C-erbB-2的表达与胃癌的发展三大病理参数，即肿瘤的分化、组织浸润和淋巴结转移的关系，探讨其相关性。

在胃癌分化程度方面，有35例(43.2%，35/81)高分化胃癌和46例(56.8%,46/81)低分化胃癌。其中41例c-erbB-2阳性病例中，12例高分化胃癌，占总样本的14.8%(12/81)，占高分化组的34.3%(12/35)。29例在低分化胃癌组，占总数的35.8%(29/81)和占低分化组63.0%(29/46)，(χ2= 6.576，P<0.001)(图2)。

表1　c-erbB-2基因表达与胃癌病理特征的关系

NS:not significant*Chi-square test

在胃癌的侵袭方面，有11例(13.6%，11/81)胃癌浸润仅限于浅肌层，70例(86.4%，70/81)胃癌侵犯外深肌层。在浅肌层浸润的情况下，C-erbB-2的表达，发现2例，占该组的18.2%(2/11)或研究的总样本的2.5%(2/81)。另一方面，在深部肌肉浸润的情况下，C-erbB-2的表达，观察到39例，占该组的55.7%(39/70)或研究的总样本的48.1%(39/81)。在C-erbB-2的这两个群体之间的表达有非常显著统计学差异(χ2=5.357，P<0.025)(图2)。

图2　c-erbB-2过度表达与胃癌病理特征的关系

好=高分化，差=低分化;S=肿瘤侵犯浅肌层，D=肿瘤侵犯深肌层;LN(-)=淋巴结转移阴性，淋巴结(+)=淋巴结转移阳性。其中c-erbB-2的表达率为低分化胃癌(35.8%)，明显高于高分化胃癌(14.8%)(P<0.001)；胃癌侵犯深肌层(48.1%)明显高于胃癌侵犯浅肌层(2.5%)(P<0.025)；而胃癌淋巴结转移(42.0%)远高于无淋巴结转移(8.6%)(P<0.025)。

在淋巴结转移方面，有57例(70.4%，57/81)淋巴结转移，有24例(29.6%，24/81)无淋巴结转移。淋巴结阳性组，C-erbB-2的表达中发现34例，占本小组的59.6%(34/57)，占研究的总样本的42.0%(34/81)。相反，在淋巴结阴性组，C-erbB-2的表达，发现7例，占该组总数的21.2%(7/24)或总样本的8.6%(7/81)。这两个群体之间的差异达到统计学意义(χ2= 6.278，P<0.025)(图2)。

3讨论

早期的研究中，C-erbB-2蛋白在胃癌的表达率为9%-44.6%[4-8]，我们用非放射性原位杂交技术检测C-erbB-2蛋白在胃癌中的表达率为50.6%(41/81)，比其高出了许多。究其原因有：首先，我们大部分的病人都是晚期的胃癌， 81例肿瘤中，57(70.3%)例有淋巴结转移，70(86.4%)例有肿瘤扩散至深肌层；第二，我们获得的胃癌组织是在手术后立即取材，在液氮中冷冻保存，故所获标本新鲜，可以保留该基因产物为最大。另一方面，以往大多数研究采用免疫组织化学方法研究c-erbB-2的表达，标本大都是各种固定剂固定后石蜡包埋的组织块。这种标本经固定、石蜡包埋影响胃癌C-erbB-2基因的免疫组化结果[9]，降低了灵敏度。

有作者报道，在胃黏膜轻度异型增生、中度异型增生、重度异型增生组织中，随病变加重，c-erbB-2基因表达呈上升趋势[10]，本文研究表明，c-erbB-2基因与胃癌组织分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05)，分化程度越差、浸润深度越深、淋巴结有转移，c-erbB-2基因表达率越高，说明c-erbB-2基因的活化在癌细胞浸犯胃壁深度至淋巴结转移的过程中起着一定的作用，参与胃癌的发生发展过程。

参考文献：

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[2]GUO Chang Qing,WANG Yu Ping,LIU Guo Yong,et al.Study on Helicobacter pylori infection and P53,c-erbB-2 gene expression in carcinogensis of gastric mucosa[J].WCJD,1999,7(2):114.

[3]贾振军，韩金声，李华新.胃癌组织中c-erbB-2和ki67的表达及临床意义[J].中国现代普通外科进展，2014，5:552.

[4]Sanidas EE,Filipe MI,Linehan J,et al.Expression of the c-erbB-3 gene product in gastric cancer[J].Int J Cancer,1993,54:935.

[5]Ninomiya I,Yonemure Y,Matsumoto H,et al.Expression of c-myc product in gastric carcinoma[J].Oncology,1991,48:149.

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[7]丁春明，喻钢，朱宝华.P53和c-erbB-2表达与胃癌进展的关系[J].实用癌症杂志，2011,26(1)：31.

[8]李小雷，王晓琦，屈海鸥.胃复春和维A酸对胃癌前病变患者基因Rb与c-erbB-2表达的影响[J].中国临床药理学杂志，2014,30(6)：493.

[9]Chiu KY,Loke SL,Ho FC.Immunohistochemical demonstration of c-erbB-2 oncoprotein in gastric adenocarcinoma:comparison of cryostat and paraffin wax sections and effect of fixation[J].J Clin Pathol,1994,47:117.

[10]苏秀丽，金建军.Rb与c-erbB-2基因在胃癌前病变组织中的表达及其临床病理意义[J].河南科技大学学报(医学版)，2012,30(2)：87.

收稿日期：(2013-11-20)

文章编号：1007-4287(2015)04-0635-03