D2-40在结直肠癌淋巴道转移中的研究进展

邓 洪综述，徐 亮审校

（泸州医学院附属医院胃肠外科，四川泸州646000）

D2-40在结直肠癌淋巴道转移中的研究进展

邓 洪综述，徐 亮审校

（泸州医学院附属医院胃肠外科，四川泸州646000）

D2-40； 胃肠肿瘤； 淋巴管； 结直肠癌； 转移； 综述

结直肠癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内，结直肠癌的发病率处于恶性肿瘤的第3位，而在欧洲发达国家，结直肠癌的发病率处于第2位[1]。据统计，美国2011～2012年结直肠癌新发病数和死亡数均居美国癌症发病数和死亡数的第3位[2]。在我国，随着居民生活水平的不断提高、饮食习惯的改变，结直肠癌的发病率呈逐年上升趋势。当前，结直肠癌发病率仅次于肺癌、胃癌，位于第3位，病死率次于肺癌、胃癌、肝癌、食管癌，位于第5位[3]。尽管结直肠癌以手术治疗为主已得到广泛认同，并取得一定成效，但其5年生存率仍不满意。淋巴道转移是结直肠癌最常见的转移、扩散途径，也是影响预后的最主要因素。D2-40是最新发现的淋巴管内皮细胞特异性标记物，其与结直肠癌淋巴道转移关系的研究在国内外已有一些报道，现作一简要综述。

1 淋巴管内皮细胞标志物

1.1 D2-40分子生物学结构及功能 D2-40是一种表达于淋巴管内皮细胞的蛋白质分子，早先在研究生殖细胞肿瘤和胚胎睾丸的精母细胞瘤时，Marks等[4]发现，其为一种唾液酸糖蛋白，由166个氨基酸构成，可与表达于胎儿睾丸、睾丸生殖细胞肿瘤表面的癌胚抗原M2A特异结合。起初研究发现，D2-40对精母细胞瘤和无性细胞瘤的诊断具有重要价值，而后研究发现，D2-40可识别在O-藕联唾液酸糖蛋白上分化的固有抵抗性抗原决定表位，且仅在淋巴管内皮细胞表达，而在血管内皮细胞上不表达，因此认为，D2-40可作为淋巴管特异性标记物。在此后，其被广泛用于标记淋巴管而运用于多种恶性肿瘤与淋巴道侵袭、转移关系的研究[5-7]。同时在研究中也发现，D2-40同样表达于许多正常组织，包括间质细胞、肌上皮细胞、间皮细胞、基底细胞、滤泡树突状细胞和部分皮肤上皮细胞，以及某些肿瘤，包括淋巴管瘤、卡波肉瘤、精原细胞瘤、血管内皮瘤、样间皮瘤、成肌纤维细胞瘤、多形性腺瘤、神经鞘瘤、脑脊膜瘤、颅咽管瘤等[8]。此外，Nakamura等[9]研究发现，在脑发育过程中，D2-40在大脑的未成熟脑膜、脉络丛和室管膜及小脑的浦肯野细胞层、外粒细胞层表达。进一步研究发现，D2-40还能特异性识别肾小球足突细胞膜蛋白（podoplanin），其是近年来发现的另一种特异性的淋巴管内皮标志物。但是与目前已作为商品化的D2-40抗体相比，D2-40较podoplarnin具有更高的敏感性和特异性，且在和石蜡包埋的病理切片染色反应时毫不受影响。尽管D2-40可于皮肤真皮、前列腺和乳腺的基底细胞等表达，但其在淋巴管标记方面的特异性仍具有重大意义。

1.2 其他淋巴管内皮细胞标志物

1.2.1 血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3） VEGFR-3是一种酪氨酸激酶受体，是最早被发现的淋巴管内皮标记物，其配体有血管内皮生长因子A（VEGF-A）、VEGFB、VEGF-C和VEGF-D，其中VEGF-C和VEGF-D在调节淋巴管内皮细胞生长上的作用已被广泛认可。VEG FR-3虽然名为血管内皮生长因子受体，但仅在胚胎静脉血管内皮细胞表达，出生后就不再于血管内皮表达，而表达于淋巴管内皮细胞，故VEGFR-3曾被认为是淋巴管特异性标记物。但VEGFR-3在某些肿瘤细胞和肿瘤的微血管内皮也有表达。因此，VEGFR-3用于鉴别血管内皮和淋巴管内皮的特异性是有限的。

1.2.2 淋巴管内皮透明质酸-1（LYVE-1） LYVE-1是分布于淋巴管内腔面上的含有322个氨基酸的膜蛋白，是被发现的又一淋巴管内皮特异性标记物，其配体是透明质酸。LYVE-1与CD44糖蛋白同源，在淋巴管腔面和外表面有同等表达，其生理功能是将透明质酸通过淋巴内皮转运至淋巴。LYVE-1也并非淋巴管内皮所特有，其可表达于人正常的肺组织血管、肝血窦及部分肿瘤微血管中。

1.2.3 podoplarnin podoplarnin是一种黏液型跨膜糖蛋白，定位于肾小球足突细胞膜，另外主要表达于小淋巴管，而不表达于具有平滑肌结构的大淋巴管。podoplarnin是于1999年发现的仅表达于淋巴管内皮细胞的一种膜蛋白，其后有学者用其标记微淋巴管获得成功，进而认为podoplarnin也是一种淋巴管内皮标记物[10]。Fiedler等[11]研究发现，podoplarnin和CD34联合染色可以区分毛细血管和淋巴管。但大量研究也发现，podoplarnin不仅表达于淋巴管内皮细胞，也表达于一些正常组织和良性肿瘤，如肾足细胞、成骨细胞、肺泡Ⅱ型细胞以及血管瘤和血管肉瘤内[11]。

1.2.4 同源异型核转录因子基因产物-1（Prox-1） Prox-1是从黑腹果蝇Prospero基因克隆的同源基因，与胚胎淋巴管出芽生长、内皮细胞的分化相关（在胚胎发育时期，淋巴管是以出芽方式自静脉内皮细胞生成），是淋巴管发育所不可缺少的转录因子[12]。Wigle等[13]研究发现，敲除Prox-1基因后，胚胎发育过程中静脉内皮细胞无法向淋巴内皮细胞定向分化，说明Prox-1是淋巴管生成的一种调控因子，且Prox-1可使podoplarnin和VEGFR-3的表达增高，因此认为，Prox-1在胚胎淋巴脉管形成的分子机制中发挥着非常重要的作用。Prox-1主要表达于淋巴管内皮，但在其他组织和细胞中也有表达，包括角膜、肝细胞、心脏等，但在内皮细胞中，仅表达于胚胎和成人的淋巴管内皮。但有研究表明，联合Prox-1与LYVE-1检测可以更好地标示淋巴管内皮细胞[14-15]。

早在D2-40广泛应用之前，研究人员常采用2个或2个以上标记物联合鉴定肿瘤淋巴管。如LYVE-1和Prox-1联合鉴定肝淋巴管，VEGFR-3联合podoplarnin检测血管肉瘤和卡波肉瘤中的淋巴管，所得结果更加准确[16]。这样做虽可以提高检测的准确性，但敏感性却不佳，阳性率较实际偏低，且可能增加实验过程中的误差。这就不难理解，在运用淋巴管标记物进行研究的同时，学者仍致力于淋巴管标志物特异性的相关研究，且正在深入进行。

2 D2 -40 的应用及相关研究

D2-40定位于淋巴管内皮细胞的细胞膜和细胞质，采用免疫组化（Envision法）染色后，显示为棕黄色颗粒。最早应用D2-40检测肿瘤淋巴管来进行研究是乳腺癌，有学者在对比苏木精-伊红染色（HE染色）和D2-40 Envision法染色标记乳腺癌中的淋巴管后，发现D2-40检出率较明显高于HE染色，D2-40能更良好地标记出淋巴管，尤其在分化程度差、有淋巴结转移组阳性率更高，并由此推测肿瘤淋巴管的检测对于判断肿瘤的预后有重要意义[17-18]。许俊龙等[19]应用D2-40研究早期胃癌时发现，在正常胃黏膜组织中，D2-40染色阳性的脉管在黏膜下层数目最多，而在黏膜固有层、肌层及浆膜层均有少量表达；在早期胃癌中，D2-40也呈现高表达，其显示的微淋巴管在肿瘤中心区和边缘区形态上无明显差异，而在中心区分布要多于边缘区。Coskun等[20]在对65例胃癌的研究中以D2-40标记淋巴管，结果显示，肿瘤周围均有D2-40标记的淋巴管，瘤周微淋巴管密度（LMVD）与肿瘤大小、TNM分期、有无淋巴结转移和有无远处转移显著相关。Ozardili等[21]在肾癌的淋巴管研究中发现，肿瘤周围LMVD和临床各病理参数无关，但肿瘤中心区LMVD与淋巴结转移和远处转移显著相关。

在应用D2-40和CD34联合检测结直肠癌淋巴管时，Saad等[22]发现，几乎所有的肿瘤组织均存在淋巴管生成，且LMVD与CD34标记的微血管密度呈正相关。Barresi等[23]研究Ⅰ期结直肠癌显示，D2-40标记的LMVD与淋巴结微转移相关，有淋巴管侵犯的病例LMVD则更高。孙建军等[24]成功建立人结肠腺癌裸鼠原位种植瘤后，以D2-40、LYVE-1检测肿瘤淋巴管显示，无瘤组D2-40、LYVE-1阳性表达率极低，而结肠癌种植组D2-40、LYVE-1表达则呈强阳性，LMVD明显高于无瘤组，且多分布在肿瘤组织与正常组织交界处，瘤内几乎无阳性脉管。赵杨等[25]以D2-40联合VEGF-C、VEGFR-3研究发现，大肠癌的LMVD明显高于大肠腺瘤和正常大肠黏膜，大肠癌LMVD与VEGF-C、VEGFR-3的表达呈显著正相关。Kenney等[26]以D2-40研究淋巴管在正常大肠组织、大肠息肉、腺瘤、大肠癌以及炎性肠病（溃疡性结肠炎、克罗恩病）的表达位置时，发现炎性反应或肿瘤微环境可能促使淋巴管新生。黄振宇等[27]以D2-40和CD34联合检测52例结肠癌肝转移患者的原发灶、肝转移灶及淋巴结转移灶中的新生淋巴管密度和新生血管密度，结果显示，新生淋巴管密度明显高于新生血管密度，提示淋巴管新生在结肠癌肝转移中起重要作用。姚明等[28]研究发现，结直肠癌组织中D2-40标记淋巴管计数显著高于正常组织，且与肿瘤的浸润深度、大小、淋巴结转移和TNM分期密切相关，但与患者年龄、性别、肿瘤部位和分化程度无关，由此认为，瘤周LMVD对结直肠癌患者预后的判断有重要意义。

以D2-40标记结直肠癌瘤内、瘤周以及正常组织淋巴管的大量研究表明，肿瘤内、瘤周同正常组织LMVD存在显著差异，这提示肿瘤内或瘤周存在淋巴管新生[22，24-26，28]。进一步研究发现，肿瘤内与瘤周不仅在淋巴管密度上存在差异，且淋巴管形态上也有差异，表现为不同区域的淋巴管密度、管腔形状大小不一致。瘤内淋巴管样呈细小或条索样，多呈闭锁状；而瘤周淋巴管较瘤内更丰富，且管壁较薄，管腔扁大，或呈扩张状，且发现癌栓多见于癌周扩张的淋巴管[28-29]。推测其原因可能是由于肿瘤不断地向外扩张生长，过度生长的肿瘤细胞导致肿瘤中心存在较高的组织压，又或者淋巴回流障碍引起组织水肿，从而压迫淋巴管腔；而瘤周处于扩张的淋巴管以及内皮细胞间宽大的间隙，都是脱落的癌细胞易于进入淋巴道发生转移的因素。据此推测，瘤周LMVD明显高于瘤内，与淋巴管浸润及淋巴结转移密切相关；而瘤周处于扩张状的功能性淋巴管，在淋巴管浸润和淋巴道转移过程中扮演着十分重要的角色。

3 展 望

D2-40标记的LMVD已成为结直肠癌的一个独立而重要的预后因素，但目前国内关于此方面的研究并不多，且研究中尚存在一些问题。例如（1）由于大肠壁的不同层次淋巴管密度也有很大差别，取材及切片部位不一致，将直接导致LMVD的巨大差异；（2）淋巴管特异标志物的选择不同，得出的研究结果可能有很大差别；（3）淋巴管密度的判读受观察者主观因素的影响，研究者的主观认知和选择会导致不同的结果，但这个问题难以在病理阅片中避免。虽然，目前临床病理研究和动物实验已陆续开展，但结直肠癌淋巴管生成在肿瘤转移中的具体机制和过程还有待进一步研究。然而，是否遏制了淋巴管新生就能阻止淋巴道转移呢？此类研究的开展将会为结直肠癌的分子水平治疗提供新的依据。

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：1009-5519（2015）06-0854-03

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2014-10-31）

邓洪（1984-），男，四川绵阳人，在读硕士研究生，主要从事胃肠道肿瘤的诊疗与研究工作；E-mail：bati_stu@126.com。

徐亮（E-mail：33642090@qq.com）。