测定栀子金花丸中三种成分的含量及栀子苷的溶出度

陈 威，尹长江，刘翠哲，常金花，刘 沛，刘喜纲*

(1.河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，承德 067000；2.承德医学院临床技能教学中心，承德 067000)



药品质量与检验

测定栀子金花丸中三种成分的含量及栀子苷的溶出度

陈 威1，尹长江2，刘翠哲1，常金花1，刘 沛1，刘喜纲1*

(1.河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，承德 067000；2.承德医学院临床技能教学中心，承德 067000)

目的：建立同时测定栀子金花丸中栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷含量的方法，并测定丸中栀子苷的溶出度。方法：采用高效液相色谱法，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.8 ml/min，检测波长为254 nm；采用《中国药典》中桨法测定栀子金花丸中栀子苷在水中的溶出量，计算累积溶出度。结果：栀子苷在0.007～0.336 μg 范围内线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为99.7%，RSD为2.5%；盐酸小檗碱在0.013～0.624 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8)，平均回收率为100.2%，RSD为1.7%；黄芩苷在0.010 5～0.630 μg 范围内线性关系良好(r=0.999 8)，平均回收率为99.0%，RSD为2.3%。栀子苷45 min和120 min累积溶出度分别为79.9%和92.7% 结论：建立的方法简便、重复性好，可用于栀子金花丸的质量控制。

栀子金花丸，栀子苷，盐酸小檗碱，黄芩苷，溶出度

栀子金花丸由栀子、黄连、黄芩、黄柏、大黄、金银花、知母、天花粉等8味中药组成，收载于《中国药典》2010年版一部。临床用于肺胃热盛、口舌生疮、牙龈肿痛、目赤眩晕、咽喉肿痛、吐血衄血、大便秘结等症。《中国药典》中已有栀子苷的含量测定，规定每1 g含栀子以栀子苷计不得少于2.8 mg，其他药物的含量测定尚未收录。处方中栀子、黄芩、黄柏、黄连等4味药约占处方量的60%，这4味药的主要有效成分为栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱，进行3种有效成分的含量测定可同时控制丸中4味药的含量。参考文献[1-4]，本文建立了HPLC法同时测定栀子金花丸中栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷的含量，同时以栀子苷为指标成分，考查其在水中的溶出度，以进一步评价其质量。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪(AT-350柱温箱，美国安捷伦公司)；JA2003电子天平(北京精科天平)；AG-254电子分析天平(瑞士METTLER公司)；北利离心机(北京时代北利离心有限公司)；KQ2200DE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；RC806溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)；栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷对照品(批号分别为110749-201115、110713-201212、110715-201117，均购自中国药品生物制品检定所)；栀子金花丸(北京同仁堂制药有限公司，水丸，9 g/瓶，10瓶/盒，批号3083063、4082211、4082209)；甲醇为色谱纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Dimonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B)梯度洗脱，梯度洗脱程序为0 min(25%A)，18 min(25%A)，20 min(35%A)，30 min(35%A)，50 min(60%A)，55 min(80%A)，60 min(25%A)；检测波长为254 nm；流速为0.8 ml/min；柱温35 ℃；进样量5 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷对照品，分别置于25 ml量瓶中，加入70%甲醇超声(100 W，40 kHz)溶解，放至室温，再加入70%甲醇定容至刻度，摇匀。分别精密量取上述3种对照品溶液各5 ml，置于25 ml量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，制成每1 ml含栀子苷 28 μg、盐酸小檗碱52 μg和黄芩苷42 μg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取栀子金花丸(水丸)适量，用研钵研细，精密称取约1 g置于50 ml量瓶中，加入适量70%甲醇溶液，超声40 min(100 W，40 kHz)，放至室温，加70%甲醇定容至刻度，然后置离心机中离心15 min(13 000 r/min)，取上清液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取知母、天花粉、大黄和金银花，分别粉碎，按照《中国药典》2010年版一部栀子金花丸项下各味药的处方量，称取知母、天花粉、大黄和金银花，混合，用水泛丸制备得到缺栀子、黄连、黄柏与黄芩的阴性样品。取阴性样品适量，研细，精密称取1 g，按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.3 专属性考查 分别精密吸取对照品、供试品和阴性对照溶液各5 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。在上述色谱条件下，样品溶液的栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷的主峰与杂质峰之间的分离良好，且阴性无干扰。

2.4 线性关系考查 取上述3种对照品的混合对照品溶液，分别进样0.5、1、3、5、8、10和12 μl，测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积值(Y)为纵坐标绘制工作曲线，分别得到回归方程：栀子苷Y=2.17×106X-538(r=0.999 9)；盐酸小檗碱Y=8.54×106X+4 785(r=0.999 8)；黄芩苷Y=3.29×106X+40 044(r=0.999 8)；表明栀子苷在0.007～0.336 μg、盐酸小檗碱在0.013～0.624 μg、黄芩苷在0.010 5～0.630 μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取上述混合对照品溶液5 μl，重复进样6次，测定峰面积，结果栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷峰面积的RSD分别为1.97%、1.80%和1.69%。

1.栀子苷 2.盐酸小檗碱 3.黄芩苷

2.6 稳定性试验 取一定量的供试品溶液，室温放置0、4、8、12和24 h，分别进样测定峰面积，结果栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷峰面积的RSD分别为2.13%、1.48%和0.75%，表明24 h内溶液稳定。

2.7 重复性试验 分别精密称取样品共6份，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备并测定样品含量，结果栀子苷含量为6.59 mg/g，RSD为1.99%；盐酸小檗碱含量为4.42 mg/g，RSD为1.93%；黄芩苷含量为15.92 mg/g，RSD为0.76%。

2.8 加样回收率试验 取已知含量的栀子金花丸细粉6份，精密称定，分别加入一定量的栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷对照品溶液，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备，测定并计算回收率，结果栀子苷平均回收率为99.7%，RSD为2.5%，盐酸小檗碱平均回收率为100.2%，RSD为1.7%；黄芩苷平均回收率为99.0%，RSD为2.3%。见表1。

2.9 样品测定 取栀子金花丸3批，按“2.2.2”项下方法制备，分别取对照品溶液与供试品溶液各5 μl进样，按上述色谱条件测定，计算，结果见表2。

2.10 溶出度测定 按《中国药典》2010年版二部溶出度测定法(附录ⅩC 第二法，桨法)，以900 ml脱气纯化水为溶出介质，温度(37±0.5)℃，调节转速100 r/min，取样品6份，精密称定置于溶出杯中，分别于5、8、10、20、30、45、60、90和120 min时取样2 ml，同时补加同温介质2 ml，离心，注入液相色谱仪，测定峰面积并计算溶出度，结果平均累积溶出度分别为21.0%、30.4%、33.1%、53.2%、64.6%、79.9%、87.1%、92.2%和92.7%。溶出曲线见图2。

表1 3种成分的加样回收率试验结果

表2 栀子金花丸样品中3种成分的含量测定结果

图2 栀子金花丸中栀子苷在水中的溶出曲线

从栀子苷在水中的溶出度结果可以看出，45 min时为79.9%，120 min时为92.7%，其结果符合《中国药典》二部溶出度测定法中规定的一般在45 min溶出70%以上的要求。一般认为传统丸剂(如蜜丸和水丸等)释放迟缓，起效慢，而本研究发现，栀子金花丸在100 r/min情况下栀子苷的溶出行为更符合普通制剂。由于丸剂多以药材粉末入药，药材经过粉碎后，一部分破碎细胞的有效成分溶出和化学药物相似，另一部分具完好细胞结构的有效成分的溶出需要经过溶剂渗透入细胞，细胞内溶解后经过细胞壁，再扩散到介质中的过程，相比化学药物来说，溶出过程会延缓，因此本研究选择了搅拌强度为“最强级”的100 r/min[5]。同时由于丸剂以药材粉末入药，由于产地的差异，药材质量差异大[6]，相应制剂质量差异较大，但质量标准控制却不如化学药严格，中药没有溶出度检查，从本研究来看，在相对化学药的溶出条件适当宽松的情况下，增加一些丸剂的溶出度指标控制，如增加栀子金花丸的栀子苷溶出度控制指标，可以更好地控制丸剂的质量。

3 讨论

3.1 采用DAD 检测器考查了不同波长下栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷峰形及峰面积，检测波长为254 nm时，发现3种成分的峰型，分离度均较好，故选择254 nm作为测定波长。

3.2 分别采用不同比例和梯度的流动相时，发现杂质干扰测定，分离效果不好，采用文中的流动相比例时，使得3种成分能够很好的分离。

3.3 在进行溶出度考查研究时，由于栀子苷溶解于水，选择水作为溶出介质，转速选择100 r/min，而其在“最弱级”50 r/min和“中级”75 r/min时的溶出情况还需要进一步研究[5]。而且由于栀子金花丸中有效成分较多，仅以栀子苷作为指标研究溶出度，并不能全面反映制剂的质量，需要测定其他成分的溶出度，但以水为溶出介质时液相色谱图中未检测到盐酸小檗碱和黄芩苷的峰，这可能与盐酸小檗碱和黄芩苷在水中的溶解度小有关，故本文只考查了栀子苷的溶出情况，盐酸小檗碱和黄芩苷的溶出情况需要下一步改变溶出条件来进行测定。虽然本文只考查了栀子苷的溶出情况，但也提示我们，在一定的溶出条件下，通过溶出度检查来控制栀子金花丸的质量是可行的。

1 高晓燕，卢建秋. 栀子金花丸中栀子苷、黄芩苷、番泻苷A和番泻苷B的含量测定方法研究[J]. 中国中药杂志，2009，34(20)：2649-2651

2 李伟佳，王强.HPLC测定4种中药制剂中栀子苷和黄芩苷的含量[J].中成药，2007，29(8)：1177-1179

3 黄燕萍，黄焜. HPLC法同时测定栀子金花丸中栀子苷和黄芩苷的含量[J].中国药事，2010，24(10):1002-1004

4 马群，艾路，刘勇，等. 安宫牛黄丸中栀子苷、黄芩苷和盐酸小檗碱含量测定研究[J].中国中药杂志，2009，34(20)：2647-2648

5 谢沐风. 如何科学、客观地制订溶出度试验质量标准[J]. 中国医药工业杂志,2012,43(3):A23-A32

6 郭兰萍，张燕，朱寿东，等. 中药材规范化生产(GAP)10年:成果、问题与建议[J]. 中国中药杂志, 2014, 39(7):1143-1151

Deter mination the content of three active components in Zhizi Jinhua pills and dissolution of geniposide

Chen Wei1，Yin Changjiang2，Liu Cuizhe1，Chang Jinhua1，Liu Pei1，Liu Xigang1

(1. Hebei Province key laboratory of Research and Development for Chinese Traditional Medicine；2. Clinical Skills Teaching Center，Chengde Medical College，Chengde 067000)

Objective：To develop an HPLC method for smultaneously determining the contents of geniposide, berberine hydrochloride and baicalin in Zhizi Jinhua pills and dissolution of geniposide. Methods: An HPLC analytical system established here included with methanol-0.1% phosphoric acid solution as mobile phase,the flow rate of which was 0.8 ml/min, the detection wave length was at 254 nm. The dissolubility of geniposide from tablets in aqueous solution was determined and the cumulative dissolution rate was calculated. Results:The linear range of geniposide was between 0.007～0.336 μg(r=0.999 9)；The linear range of berberine hydrochloride was between 0.013～0.624 μg(r=0.999 8)； the linear range of baicalin was between 0.010 5～0.630 μg(r=0.999 8). The average recoveries of geniposide, berberine hydrochloride, baicalin were 99.7% (RSD was 2.5%)，100.2%(RSD was 1.7%), 99.0% (RSD was 2.3%), respectively. The cumulative dissolution rate of geniposide was 79.9% in 45 min and 92.7% in 120 min. Conclusion：The method is simple and reproducible, it can be used for the quality evaluation of Zhizi Jinhua pills.

Zhizi Jinhua pills，geniposide，berberine hydrochloride，baicalin，dissolution

2015-02-04

河北省高等学校科学技术研究项目(No.QN2014145)；承德市科学技术研究与发展计划项目(No.201021020)；河北省高校定点学科建设项目(No.冀教高[2003]4号)

R+.

A

1006-5687(2015)03-0004-03

*通讯作者：刘喜纲，E-mail：liuxgmail@sina.com。