丹参酮ⅡA原料药中有机溶剂残留量气相色谱法测定

舒金富，罗红梅

衢州市食品药品检验所，浙江 衢州 324000

丹参酮ⅡA原料药中有机溶剂残留量气相色谱法测定

舒金富，罗红梅

衢州市食品药品检验所，浙江 衢州 324000

目的：采用气相色谱法测定丹参酮ⅡA原料药中乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷的残留量。方法：采用Agilent DB-624毛细管色谱柱，以DMF作为溶剂，程序升温测定3种有机溶剂的残留量。结果：乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷的检测浓度线性范围分别2.0～400.0 μg/mL（γ=0.9998），2.0～390.0 μg/mL（γ=0.9993），2.0～50.0 μg/mL（γ=0.9992）；平均回收率分别为100.1%，98.1%，97.7%；检测限分别为0.3 μg/mL、0.32 μg/mL、0.56 μg/mL，定量限为0.64 μg/mL、0.656 μg/mL、1.67 μg/mL。结论：气相色谱法简便、专属性强，能准确可靠地检测出丹参酮ⅡA原料药中乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三种有机溶剂的残留量，适合用于丹参酮ⅡA原料药中溶剂残留量的测定。

丹参酮ⅡA；残留溶剂；气相色谱法

丹参酮ⅡA为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎，具有扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改善心肌收缩力、促进心肌再生、抑制内源性胆固醇的合成等作用，临床常用于治疗冠心病、心绞痛、心律过速等［1］。药物生产过程中往往会使用有机溶剂，其残留量对人体均具有不同程度的毒性且会影响药物的稳定性［2］。丹参酮ⅡA原料药在生产时往往会使用乙醇、乙酸乙酯及二氯甲烷等有机溶剂，在《中华人民共和国药典》2010年版中这些有机溶剂均为需检查种类。为了保证用药安全，控制产品的质量，本研究采用气相色谱对上述3种有机溶剂的残留量进行了检测，现报道如下。

1　材料与方法

1.1材料与试剂实验仪器为Agilent7890A气相色谱仪、氢火焰离子化检测器（FID）；Mettler XP205型电子天平。丹参酮ⅡA（TanⅡA，自制）；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为色谱纯；其余试剂为分析纯。

1.2色谱条件色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱（30 m× 0.324 mm×1.80 μm）；柱温：初始温度为40℃，以5℃/min的速度升至80℃，保持1 min后，再以50℃/min的速度升温至220℃，保持2 min；进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；载气：氮气；流速：1.0 mL/min；进样量：2 mL；分流比：12∶1。

1.3溶液的制备对照品溶液：精密称取异丙醇适量，加入DMF溶解并稀释成为浓度为2000 μg/mL的内标溶液；精密称取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷适量，加入DMF分别制成4000 μg/mL、4000 μg/mL、2000 μg/mL的对照品贮备液。精密移取贮备液适量于20 mL量瓶中，加入内标溶液1 mL，以DMF将乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷浓度分别稀释成为250 μg/mL、250 μg/mL、30 μg/mL的混合对照品样品溶液；精密称取丹参酮ⅡA0.5 g，置于10 mL量瓶中，加内标溶液1 mL，再用DMF稀释至刻度，放至室温，加DMF进行定容，得到50000 μg/mL的混悬液，过滤取上清即为样品溶液。

2　结果

2.1系统适用性试验见图1。移取对照品溶液按上述色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，各相邻色谱峰的分离度均大于2，理论板数均不低于11000，系统适用性较好。

2.2线性关系试验见表1。精密移取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷对照品混合溶液各2 mL进样，测得峰面积，以对照品峰面积/内标峰面积（y）对对照品溶液浓度（x）进行线性回归。结果显示，乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷在相应的线性范围内线性关系良好。

2.3精密度试验取混合对照品溶液2 mL，重复检测6次，计算可得出乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为1.5%、2.2%及2.6%，各溶剂峰面积的RSD均小于5%（n=6），表明精密度较好。

2.4检测限和定量限试验分别取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷对照贮备液，用DMF稀释溶解后进样，以S/N=3计算检测限，以S/N=10计算定量限。结果乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷的检测限分别为0.3 μg/mL、0.32 μg/mL、0.56 μg/mL，定量限分别为0.64 μg/mL、0.656 μg/mL、1.67 μg/mL。

2.5回收率试验见表2。称取已知溶剂残留量的样品0.25 g，置于10 mL量瓶中，精密移取对照品贮备液，分别加入高、中、低3种浓度的对照品贮备液（相当于各溶剂限度80%、100%、120%）各3份，加入1 mL内标液，用DMF稀释，根据峰面积计算回收率及RSD。测得3种溶剂的平均回收率为97.7%～100.1%；RSD为0.67%～1.29%，均小于5%（n=3）。

2.6稳定性试验取对照品溶液，室温下放置0、2、4、8、12 h后分别进样检测，测得乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷在12 h的峰面积RSD分别为3.4%、2.1%、3.2%（n=3），表明本溶液在室温放置12 h内稳定性良好。

2.7样品的测定精密量取混合对照品溶液和样品溶液各2 mL，记录色谱图，以峰面积计算样品中残留溶剂的含量，样品中未检出乙醇，乙酸乙酯的残留量分别为0.020%、0.022%、0.021%，二氯甲烷的残留量分别为 0.011%、0.008%、0.012%，残留量均＜0.03%。

3　讨论

3.1溶剂的选择气相色谱的常用溶剂有水、DMF、乙醇、DMSO（二甲基亚砜）等，丹参酮ⅡA易溶于氯仿，在其他常见的有机溶剂中溶解度较差［3］。但选用氯仿作为溶剂，其溶剂峰会对二氯甲烷的检出造成干扰；以DMF作用溶剂，大部分样品均可溶解，且不干扰其他组分的检出，同时采用超声的方式释放出残留溶剂，过滤后取滤液作为检测液［4］。对滤渣进行二次处理，试验结果显示经二次处理后，有机溶剂残留量均低于检出限，说明采用DMF作为溶剂测定效果良好。

3.2内标物的选择采用内标法有机溶剂的含量进行测定，可有效减少各种误差（包括仪器误差及操作误差）的出现［5］。内标物应满足以下要求：试样中不含有该物质；与被测组分性质比较接近；不会与试样发生化学反应；出峰位置位于被没组分附近，且无组分峰影响［6～7］。本实验中选择异丙醇作为内标物，可以和3种待测溶剂进行有效分离，且在分析中无峰出现，不造成干扰，经验证效果满意。

3.3色谱柱的选择由于乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三种溶剂的极性存在不同程度的差异，在最初采用DB-5MS气相色谱柱时，分离度较低，峰型并不理想；在尝试用中等极性的色谱柱Agilent DB-624时，3种有机溶剂和内标液间分离度均大于2，且峰型较好，表明采用该色谱柱能将3种有机溶剂进行有效分离。

3.4温度的选择由于乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三种溶剂和DMF之间沸点存在较大差异，对于宽沸程样品应采用程序升温［8］。使柱温按照一定的程序进行升温，低沸点的组分在较低温度下分离，高沸点组分在较高温度下分离，能较快地去除溶剂DMF，缩短分析时间，峰形理想，达到最佳的分离效果。

3.5进样方式的选择本研究采用顶空进样法测定3种有机溶剂的残留量。顶空气相色谱法（HS-GC）又称液上气相色谱分析，是一种联合操作技术。顶空色谱进样器可与国内外各种气相色谱仪相连接，它将液体或固体样品中的挥发性组分直接导入气相色谱仪进行分离和检测［9］。相比于经典气相色谱法，顶空进样法可以有效避免样品对色谱柱的污染以及样品基质对检测结果的干扰［10］。

丹参酮ⅡA原料药是一种广泛应用于治疗心血管病的中成药制剂，但关于其残留溶剂的实验研究，国内外则少有报道。本研究根据人用药品注册技术规范国际协调会（ICH）的要求以及2010年版《中华人民共和国药典》中的相关规定，选用DMF作为试验的溶解介质，对样品有很好的溶解性，且对待测组分无干扰；采用气相色谱法对丹参酮ⅡA原料药中的乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三种有机溶剂的残留量进行了测定。经验证，此实验方法在线性、定量限、检测限、精密度、稳定性、回收率等系统适用性方面均表现良好，且具有方法简便、专属性强等优点。因此顶空气相色谱法能够准确可靠地检测出丹参酮ⅡA原料药中乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三种有机溶剂的残留量，为修订药品质量标准提供依据，对于用药安全和药品质量保障都具有重要意义。

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［8］谢颖，戴丹，谢春燕.气相色谱法测定丹参酮ⅡA原料药中有机溶剂残留量［J］.华西药学杂志，2014，3（1）：84-86.

［9］刘蝉.气相色谱法测定维生素E软胶囊中8种有机溶剂残留量［J］.安徽医药，2014，8（4）：624-626.

［10］刘薇芝，胡汉昆，郑保根，等.气相色谱法测定磷酸二甲啡烷中有机溶剂残留［J］.中国药师，2014，8（4）：563-565.

（责任编辑：骆欢欢）

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0256-7415（2015）03-0239-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.03.115

2014-10-05

舒金富（1969-），男，主管药师，主要从事药品检验工作。