新生儿败血症实验诊断方法研究进展

屠 妍综述，芦 起审校

（重庆医科大学附属儿童医院新生儿诊治中心，重庆400014）

新生儿败血症实验诊断方法研究进展

屠 妍综述，芦 起审校

（重庆医科大学附属儿童医院新生儿诊治中心，重庆400014）

婴儿，新生，疾病；实验室技术和方法；感染；败血症；综述

新生儿败血症是指细菌或真菌在新生儿期侵入血液循环，繁殖并产生毒素所造成的伴有全身炎症反应综合征的临床综合征，是目前造成新生儿死亡的主要原因之一。新生儿败血症的临床表现不典型，且由于新生儿各系统发育不完善，尤其是免疫力低下，若不及时治疗，可能并发其他严重并发症，从而延长住院时间和增加医疗费用，甚至可能遗留严重后遗症，从而提高了潜在医患矛盾的发生率。因此，早期诊断和治疗非常重要。本文旨在对国内外常用于新生儿败血症的实验诊断方法进行阐述，探讨败血症患儿有效的早期诊断方法。

1 微生物培养

微生物培养所需时间长，培养出阳性结果至少需要24～48 h，因此难以在新生儿败血症早期诊断中发挥作用，且存在灵敏度不高、假阴性率较高等不足。微生物培养的阳性率低，仅为5%～10%[1]，且常受采血量、感染细菌数量、提前使用抗菌药物及实验操作技术等影响[2]。尽管如此，目前尚无取代其地位的其他有效方法，药敏试验能有效指导抗菌药物的使用，因此，微生物培养仍是诊断新生儿败血症的“金标准”。

2 外周血象

白细胞计数（WBC）、血小板计数（Plt）、杆状核细胞/中性粒细胞（I/T）早在2003年已被纳入新生儿败血症的诊断标准中[3]。但新生儿外周血象在出生的早期阶段波动范围较大，需结合孕周及采血时的日龄具体分析。Murphy等[4]指出，WBC诊断败血症的灵敏度低，结合Plt、I/T时灵敏度或特异度也无法达到较高的水平，并认为I/T在排除非感染病例中更为可靠。同时，Puopolo等[5]也指出，WBC、绝对中性粒细胞计数、I/T用来排除非感染病例或许较诊断新生儿败血症更为合适。

3 C反应蛋白（CRP）

CRP是一种正性急性时相蛋白，在细菌感染4～6 h开始上升，36 h达高峰。CRP在机体感染24～48 h后才能升至诊断新生儿败血症的有效阈值[6]，因此，CRP无法成为新生儿败血症早期诊断的理想指标。同时，CRP在新生儿出生3 d内变化较大，因此，在诊断早发型败血症中使用受限。CRP≥10 mg/L时，诊断晚发型新生儿败血症的灵敏度为68%，特异度为90%[7]。超敏C反应蛋白（hs-CRP）≥13.5 mg/L时，诊断新生儿败血症的灵敏度、特异度分别为76%、72%[8]。CRP结合其他指标如外周血象、降钙素原（PCT）等可提高诊断的准确率。值得指出的是，CRP和hs-CRP的操作方法简单，价格低廉，采血量少，因此是目前广泛应用于临床诊断新生儿败血症的实验室指标之一。动态观察CRP和hs-CRP变化可反映治疗疗效，以及判断抗菌药物的使用疗程，但停用抗菌药物不能仅靠CRP或hs-CRP决定，同时应结合临床、血培养结果及其他实验室指标综合考虑。

4 PCT

PCT是一种降钙素前体，健康人血浆中的PCT几乎检测不到（＜0.1 ng/mL），细菌感染时可明显升高。PCT在细菌感染4 h后迅速上升，6～8 h达高峰，24～48 h恢复正常，其半衰期为25～30 h，并且不受孕周影响。这意味着与CRP相比，PCT在新生儿败血症早期诊断中能提供有效依据。与CRP一样，在创伤、病毒感染、胎粪吸入、缺氧的新生儿中，PCT的值正常或轻度升高[9]，因此，PCT和CRP可用来鉴别细菌感染。PCT≥8.92 ng/mL时，灵敏度、特异度分别为77.93%、81.84%[1]。但同时需注意的是，PCT在新生儿出生3 d内变化较大，在诊断早发型败血症中需结合采血时的时龄综合分析。推荐出生时诊断阈值大于或等于0.59 μg/L，其灵敏度、特异度分别为48.7%、68.6%，出生后24 h诊断阈值大于或等于5.38 μg/L，其灵敏度、特异度分别为83.3%、88.6%[10]。Vouloumanou等[11]指出，PCT诊断早发型新生儿败血症的准确率较诊断晚发型败血症低。PCT在窒息复苏或孕母患有绒毛膜羊膜炎的非败血症感染的新生儿中升高[12]，且受孕母B族链球菌（GBS）定植、胎膜早破大于或等于18 h的影响较大[13]。Yu等[14]则通过meta分析发现，PCT诊断晚发型新生儿败血症比CRP更可靠。而与CRP一样，PCT也可用来反映治疗疗效。

5 血清淀粉样蛋白A（SAA）

SAA类似于CRP，也是一种急性时相蛋白，在细菌感染时可升高至正常水平的1 000倍。与CRP相比，SAA上升更早、更迅速，Arnon等[15]报道，SAA预测早发型败血症的准确率高于CRP。Yuan等[16]通过meta分析发现，SAA诊断新生儿败血症的灵敏度、特异度分别为84%、 89%。但SAA能否用来诊断新生儿败血症还存在一定争议。汪盈等[17]报道，SAA的增高不仅仅出现在细菌感染，同时在炎症、组织损伤中也明显升高，因此，SAA无法用来区分败血症和非败血症感染。

6 细胞因子

细胞因子是一类细胞信号传导蛋白质，在细菌感染后可迅速释放。目前对白介素-6（IL-6）、IL-8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）诊断新生儿败血症的研究较为广泛。IL-6≥60.00 pg/mL时，诊断新生儿败血症的灵敏度、特异度分别为92%、81%[18]；IL-8≥220.53 pg/mL时，其灵敏度、特异度则分别为72.48%、80.57%[1]。而TNF-α诊断早发型新生儿败血症的灵敏度为66%，特异度为76%，诊断晚发型新生儿败血症的灵敏度为68%，特异度为89%[19]。但Prashant等[20]发现，TNF-α用来诊断机体炎性反应的灵敏度高，但无法鉴别细菌感染与其他炎性反应，也无法用来判断预后，而检测新生儿败血症血清中IL-6、IL-8的水平可在抗菌药物使用48 h时为评估预后提供有效的依据。与CRP、PCT相比，在感染的早期阶段，IL-6、IL-8升高非常迅速，且有较高的灵敏度[21]，因此在早期诊断新生儿败血症中有重要意义，但其半衰期短、检测困难造成了临床应用的困难。

7 细胞表面抗原

中性粒细胞黏附分子 CD11b是Ⅲ型补体受体CD11b/CD18的一部分。正常情况下，CD11b在未活化的中性粒细胞表面呈低水平表达，而在受到内毒素或细菌刺激后数分钟内，CD11b的表达大大增加。郝丽红等[22]测定了33例败血症新生儿、30例非败血症感染新生儿和15例对照组新生儿外周血CD11b，结果发现，CD11b表达在败血症组明显高于非败血症感染组和对照组，其诊断新生儿败血症的灵敏度、特异度分别为72.73%、94.74%。也有研究发现，CD11b在新生儿败血症表达增加的程度与感染严重程度呈正相关[23]。CD64主要分布于抗原呈递细胞表面，在未活化的中性粒细胞表面呈低水平表达。在细菌侵袭1～6 h后，CD64的表达明显升高。CD64诊断早发型新生儿败血症的灵敏度、特异度分别为67%、67%，诊断晚发型败血症的灵敏度、特异度则分别为78%、59%[24]，但无法用来鉴别革兰阳性菌与革兰阴性菌感染[25]。同时，CD64表达持续升高被认为是晚发型新生儿败血症的独立危险因素之一[26]。细胞表面抗原在新生儿败血症的诊断中有较大的潜在应用价值，因其操作方法简单，且所需采血量非常少，仅需0.05 mL。

8 PCR

PCR技术可用来快速、敏感地检测细菌DNA，但通常只能鉴定单株菌。近年来，16S rRNA基因检测已在新生儿败血症诊断中广泛研究，并取得了一定成果。Liu等[27]将706例疑为败血症新生儿的血标本进行16SrRNA基因检测和培养，结果显示，血培养、16S rRNA基因检测阳性率分别为13.5%、17.4%，而与血培养相比，16S rRNA基因检测诊断新生儿败血症的灵敏度为100.0%，特异度为95.4%，阳性预测值为77.2%，阴性预测值为100.0%。与血培养相比，16S rRNA基因检测灵敏度高，在临床上可应用于提前使用抗菌药物、对氧气极端敏感细菌感染的血标本检测；其所需时间短，只需5 h就能得出检测结果，大大缩短了鉴别菌株所需的时间，能在一定程度上指导抗菌药物的使用。但16S rRNA基因检测常常受到污染，还有待进一步解决。

9 小结与展望

目前临床上以血培养、外周血象、CRP检测、PCT的应用最为广泛，但均存在各种不足，其他实验室方法还有待进一步开展。对于新生儿败血症的早期诊断，可选择IL-6、IL-8、TNF-α、CD64、CD11b，但仅凭单一指标难以作出正确判断。16S rRNA基因检测联合血培养可提高菌株检出，而结合外周血象可排除非感染患儿。动态观察CRP和PCT变化可反映治疗疗效，以及判断抗菌药物的使用疗程。综上所述，对于新生儿败血症，应结合患儿病程、临床表现，根据各项实验室指标的灵敏度和特异度作出正确选择，为新生儿败血症的早期诊断、合理使用抗菌药物提供依据。

[1]Meem M，Modak JK，Mortuza R，et al.Biomarkers for diagnosis of neonatal infections：a systematic analysis of their potential as a point-of-care diagnostics[J].J Glob Health，2011，1（2）：201-209.

[2]Camacho-Gonzalez A，Spearman PW，Stoll BJ.Neonatal infectious diseases：evaluation of neonatal sepsis[J].Pediatr Clin North Am，2013，60（2）：367-389.

[3]余加林，吴仕孝.新生儿败血症诊疗方案[J].中华儿科杂志，2003，41（12）：897-899.

[4]Murphy K，Weiner J.Use of leukocyte counts in evaluation of early-onset neonatal sepsis[J].Pediatr Infect Dis J，2012，31（1）：16-19.

[5]Puopolo KM，Draper D，Wi S，et al.Estimating the probability of neonatal early-onset infection on the basis of maternal risk factors[J].Pediatrics，2011，128（5）：e1155-1163.

[6]Hofer N，Zacharias E，Müller W，et al.An update on the use of C-reactive protein in earlyonset neonatal sepsis：current insights and new tasks[J]. Neonatology，2012，102（1）：25-36.

[7]Hotoura E，Giapros V，Kostoula A，et al.Pre-inflammatory mediators and lymphocyte subpopulations in preterm neonates with sepsis[J].Inflammation，2012，35（3）：1094-1101.

[8]Adly AA，Ismail EA，Andrawes NG，et al.Circulating soluble triggering receptor expressed onmyeloid cells-1（sTREM-1）as diagnostic and prognosticmarker in neonatal sepsis[J].Cytokine，2014，65（2）：184-191.

[9]WhicherJ，BienvenuJ，MonneretG.Procalcitoninasanacutephasemarker[J]. Ann Clin Biochem，2001，38（Pt 5）：483-493.

[10]Altunhan H，Annagür A，Örs R，et al.Procalcitonin measurement at 24 hours of age may be helpful in the prompt diagnosis of early-onset neonatal sepsis[J].Int J Infect Dis，2011，15（12）：e854-858.

[11]Vouloumanou EK，Plessa E，Karageorgopoulos DE，et al.Serum procalcitonin as a diagnostic marker for neonatal sepsis：a systematic review and meta-analysis[J].Intensive Care Med，2011，37（5）：747-762.

[12]Chiesa C，Pellegrini G，Panero A，et al.C-reactive protein，interleukin-6，and procalcitonin in the immediate postnatal period：influence of illness severity，risk status，antenatal and perinatal complications，and infectionp[J]. Clin Chem，2003，49（1）：60-68.

[13]Assumma M，Signore F，Pacifico L，et al.Serum procalcitonin concentrations interm delivering mothers and their healthy offspring：a longitudinal study[J].Clin Chem，2000，46（10）：1583-1587.

[14]Yu Z，Liu J，Sun Q，et al.The accuracy of the procalcitonin test for the diagnosis of neonatal sepsis：a meta-analysis[J].Scand J Infect Dis，2010，42（10）：723-733.

[15]Arnon S，Litmanovitz I，Regev RH，et al.Serum amyloid A：an early and accurate marker of neonatal early-onset sepsis[J].J Perinatol，2007，27（5）：297-302.

[16]Yuan H，Huang J，Lv B，et al.Diagnosis Value of the serum amyloid a test in Neonatal Sepsis：a meta-analysis[J].Biomed Res Int，2013，2013：520294.

[17]汪盈，杨祖钦，孙忠敏，等.血清淀粉酶A蛋白、中性粒细胞表面抗原CD64在新生儿败血症中的诊断价值[J].临床儿科杂志，2013，31（6）：526-529.

[18]Hotoura E，Giapros V，Kostoula A，et al.Tracking changes of lymphocyte subsets and pre-inflammatory mediators in full-term neonates with suspected or documented infection[J].Scand J Immunol，2011，73（3）：250-255.

[19]Lv B，Huang J，Yuan H，et al.Tumor necrosis factor-α as a diagnostic marker forneonatalsepsis：ameta-analysis[J].Sci World J，2014，2014：471463.

[20]Prashant A，Vishwanath P，Kulkarni P，et al.Comparative assessment of cytokines and other inflammatory markers for the early diagnosis of neonatal sepsis-A case control study[J].PLoS One，2013，8（7）：e68426.

[21]Ince Z.Diagnosis of neonatal sepsis：what the clinician expects，what the laboratory tells[J].Clin Biochem，2014，47（9）：754-755.

[22]郝丽红，麻庆荣，张文双，等.中性粒细胞黏附因子CD11b与CD64表达对新生儿感染的早期诊断价值[J].天津医药，2011，39（4）：325-328.

[23]Nupponen I，Andersson S，Järvenpää AL，et al.Neutrophil CD11b expression and circulating interleukin-8 as diagnostic markers for early-onset neonatal sepsis[J].Pediatrics，2001，108（1）：E12.

[24]Streimish I，Bizzarro M，Northrup V，et al.Neutrophil CD64 with hematologic criteria for diagnosis of neonatal sepsis[J].Am J Perinatol，2014，31（1）：21-30.

[25]Groselj-Grenc M，Ihan A，Pavcnik-Arnol M，et al.Neutrophil and monocyte CD64 indexes，lipopolysaccharide-binding protein，procalcitonin and C-reactive protein in sepsis of critically ill neonates and children[J].Intensive Care Med，2009，35（11）：1950-1958.

[26]Motta M，Zini A，Regazzoli A，et al.Diagnostic accuracy and prognostic value of the CD64 index in very low birth weight neonates as a marker of early-onset sepsis[J].Scand J Infect Dis，2014，46（6）：433-439.

[27]Liu CL，Ai HW，Wang WP，et al.Comparison of 16S rRNA gene PCR and blood culture for diagnosis of neonatal sepsis[J].Arch Pediatr，2014，21（2）：162-169.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.15.013

A

1009-5519（2015）15-2284-03

2015-03-13）

屠妍（1990-），女，浙江宁波人，硕士研究生，主要从事新生儿感染方面研究；E-mail：tina19902222008@163.com。