九节木的抗阿尔茨海默病活性部位筛选

□卢海啸，勾 玲，李典鹏*

（1.玉林师范学院，广西 玉林 537000；2.广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，广西植物功能物质研究与利用重点实验室，广西 桂林 541006）

九节木的抗阿尔茨海默病活性部位筛选

□卢海啸1,2，勾 玲1，李典鹏2*

（1.玉林师范学院，广西 玉林 537000；2.广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，广西植物功能物质研究与利用重点实验室，广西 桂林 541006）

目的 探讨九节木的提取物对阿尔茨海默病模型小鼠的影响. 方法 采用跳台法及Morris水迷宫实验，检测九节木的不同极性提取物对D-半乳糖和亚硝酸钠所致阿尔茨海默病模型小鼠的影响，并检测了小鼠脑内AChE酶活力和LPO含量，血清SOD酶活力和MDA含量. 结果 九节木的提取物能延长小鼠的潜伏期，减少错误次数，缩短小鼠寻找平台时间，并且能降低AChE酶活力、LPO、MDA含量，提高SOD酶活力。结论 九节木的乙酸乙酯提取物和水提取物具有改善学习记忆能力的作用，其中乙酸乙酯部位和水部位为活性部位，且其作用呈现一定的量效关系.

九节木；小鼠；阿尔茨海默病；活性部位

老年痴呆中有70%是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）导致的[1].为了寻找新的抗阿尔茨海默病药物，根据本课题组的前期研究和国内外的研究[2-9]，我们选择了同样具有环烯醚萜苷类成分的九节木（Psychotria rubra(Lour.) Poir）作为研究对象.为了进一步研究九节木的抗阿尔茨海默病活性部位，本课题组对九节木的抗阿尔茨海默病活性部位进行了筛选，并初步探讨了九节木的作用机理.

1 材料与仪器

1.1 动物 昆明种小鼠150只，体质量为（20±5）g，♀♂各半，清洁级，购于广西医科大学实验动物中心.许可证号：SCXK桂2003-000.

1.2 药物和试剂 九节木根采于广西玉林市龟山公园，经广西中医学院刘寿养教授鉴定为茜草科九节属植物九节（Psychotria rubra(Lour.) Poir）.采后粉碎，60℃烘干，备用；0.9%氯化钠注射液（A130724H、贵州科伦药业有限公司）；AChE试剂盒、LPO试剂盒、SOD试剂盒、MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所）；吡拉西坦片（3120718、宜昌人福药业有限责任公司）；其余试剂均为分析纯，购于天津百世化工有限公司.

1.3 主要仪器 DT-200小鼠跳台测试箱（成都泰盟科技有限公司），Morris水迷宫测试系统（成都泰盟科技有限公司），RV10 digital旋转蒸发器（德国IKA），BS124S型电子分析天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）等.

2 方法

2.1 九节木萃取物的制备 取九节木粗粉适量，采用热回流法进行提取（95 %乙醇，2 h/次×3次），过滤，合并提取液，减压浓缩，采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇组成极性梯度系统，萃取，分别减压浓缩得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位提取物，备用.

2.2 动物分组 在分组前，用跳台法对小鼠进行测试和筛选，采用分层随机法进行分组，将小鼠分为7组（空白对照组、模型组、吡拉西坦片组、石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组、水部位组），每组10只.

2.3 阿尔茨海默病模型的制作 参照文献[9]的方法制作阿尔茨海默病模型.

2.4 活性部位的筛选 采用跳台法及Morris水迷宫法进行测试，采用灌胃的方式给药，各九节木提取物组的给药剂量为200 mg·kg-1，以吡拉西坦为阳性对照，实验方法参照文献[10].

2.5 生化指标测定 各组小鼠于造模给药49d后，参照文献[10]的方法，测定脑组织中AChE酶活力、LPO含量以及血清中SOD酶活力和MDA含量.

2.6 活性部位的量效关系 将60只昆明种小鼠，采用分层随机法，分为空白对照组、模型组、吡拉西坦片组、水部位组高、中、低剂量组，共6组.灌胃给药，九节木水部位低、中、高剂量组给药剂量分别为：100 mg·kg-1、200 mg·kg-1、300 mg·kg-1；阳性对照组、空白对照组和模型组给药剂量同文献[10].实验方法同“2.4”项.

2.7 数据处理 所有数据以均值±标准差表示，采用SPSS17.0 for windows软件进行数据统计分析，实验结果采用one-way ANOVA方差分析法分析，组间比较用t-test法检验，并且以P＜0.05为差异具有统计学意义指标.

3 结果

3.1 活性部位的筛选 实验结果显示，吡拉西坦和九节木的不同极性提取物具有延长阿尔茨海默病模型小鼠潜伏期、减少出错次数和缩短平台寻找时间的作用（P＜0.05或P＜0.01）.尤其是乙酸乙酯部位和水部位（P＜0.01）.（详见表1）

表1 九节木活性部位筛选结果（±s，n=10）

表1 九节木活性部位筛选结果（±s，n=10）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01.

组别剂量/mg•kg-1跳台水迷宫潜伏期t/s出错次数/次找到平台时间/s空白对照组—1292.60±440.64##0.45±0.54##19.86±12.77##模型组—510.20±335.70**2.80±2.45**70.67±27.39**吡拉西坦组1501300.00±172.08##0.90±0.11#35.00±10.84##石油醚部位组2001013.00±291.72#1.00±1.00#48.67±23.32#乙酸乙酯部位组2001478.13±385.33##0.37±0.51##34.43±9.85##正丁醇部位组2001351.33±425.74##0.50±0.83##45.33±13.43*#水部位组2001534.17±441.46##0.33±0.57##34.00±3.61##

3.2 量效关系 由表2可知，九节木水部位高、中剂量组的生物活性最为显著（P＜0.01），并呈现出一定的量-效关系.

表2 九节木水部位活性部位的量效关系（±s，n=10）

表2 九节木水部位活性部位的量效关系（±s，n=10）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别剂量/mg•kg-1跳台水迷宫潜伏期t/s出错次数/次找到平台时间/s空白对照组—1278.60±340.32##0.43±0.44##20.32±15.68##模型组—520.20±217.51**3.30±1.33**74.76±23.23**吡拉西坦组1501343.00±230.00##0.90±1.10#35.40±13.56##水部位低剂量组1001213.00±271.82#1.00±0.12#42.67±27.39#水部位中剂量组2001551.17±326.45##0.62±0.73##35.33±3.43*##水部位高剂量组3001735.02±235.63##0.23±0.63##23.50±4.61##

3.2 生化指标测定

从表3可知，吡拉西坦和九节木的不同极性提取物对AChE、LPO均有抑制的作用（P＜0.05或P＜0.01）.其中，九节木乙酸乙酯部位和水部位生物活性最高（P＜0.01），应为其活性部位.

表3 九节木对小鼠脑内AChE酶活力和LPO含量的影响（±s，n=10）

表3 九节木对小鼠脑内AChE酶活力和LPO含量的影响（±s，n=10）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别剂量/mg•kg-1AChE酶活力/U·mgprot-1LPO含量/μmol·gprot-1空白对照组—0.16±0.03##1.55±0.09##模型组—0.33±0.01**5.46±0.34**吡拉西坦片组1500.19±0.06##1.83±0.67##石油醚部位组2000.23±0.02*#2.63±0.47*#乙酸乙酯部位组2000.15±0.03##1.36±0.37##正丁醇部位组2000.20±0.03*#2.40±0.23*#水部位组2000.15±0.03##1.44±0.16##

由表4可知，吡拉西坦和九节木的不同极性提取物均能提高SOD活力并降低MDA含量（P＜0.05或P＜0.01）.九节木乙酸乙酯部位和九节木水部位尤为显著（P＜0.01），进一步说明这两个部位应为九节木的活性部位.

表4 九节木对小鼠血清SOD酶活力和MDA含量的影响（±s，n=10）

表4 九节木对小鼠血清SOD酶活力和MDA含量的影响（±s，n=10）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别剂量/mg•kg-1SOD酶活力/U·ml-1MDA含量/ nmol·ml-1空白对照组—132.40±0.74#95.30±19.87#模型组—116.42±0.99**126.95 ±22.12**吡拉西坦片组150214.60±1.25**##68.37 ±18.31*##石油醚部位组200155.44±0.62*#89.14±22.92#乙酸乙酯部位组200215.58±0.92**##66.17±20.75*##正丁醇部位组200161.49±0.86*#93. 27±25.95#水部位组200216.38±0.68**##64. 47±19.99*##

4 讨论

九节木主产于广西玉林市[11]，本课题组在前期进行了初步的活性筛选，发现九节木提取物具有显著的抗抑郁活性[6,7]、提示九节木对中枢神经系统具有调节作用；接着，又发现九节木的乙酸乙酯提取物和水提取物具有改善学习记忆障碍小鼠学习记忆能力的作用，且呈现一定的量效关系[8].本研究继续对九节木的抗阿尔茨海默病活性部位进行了研究，并对其进行了衰老指标的检测，发现九节木的活性部位主要为乙酸乙酯部位和水部位，尤其是水部位活性最强，并呈现一定的量-效关系.九节木能降低阿尔茨海默病模型小鼠脑中的AChE的酶活力、LPO、MDA含量，提高SOD酶活力.

在阿尔茨海默病患者的脑中，常出现AChE 的活力升高及LPO含量增加，而乙酰胆碱酯酶（AChE）具有促进Aβ沉淀的作用[12-15]，MDA是脂质过氧化的最终产物，它的浓度可以反映脂质过氧化程度[16]，而SOD是机体清除自由基的重要酶[17].本实验选择这四个指标进行检测，结果发现九节木能降低阿尔茨海默病模型小鼠中的AChE的酶活力、LPO、MDA含量，提高SOD酶活力.本课题组正在对九节木的具体有效成分及其作用机制进行进一步研究. ■

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【责任编辑 谢文海】

Study on Anti- Alzheimer's Disease Activity Part of Psychotria rubra

LU Hai-xiao1,2，GOU Ling1，LI Dian-peng2*
(1. Yulin normal university, Yulin, Guangxi 537000; 2. Guangxi Key Laboratory of Functional Phytochemicals Research and Utilization, Guangxi Institute of Botany, Guilin 541006)

Objective: To study on the anti-Alzheimer's disease effects of extracts from Psychotria rubra in mice. Method: The effect of extracts of Psychotria rubra against D-galactose and sodium nitrite induced Alzheimer's disease mouse model were tested by step down test and Morris water maze, and measured the brain AChE enzyme activity and LPO content and the serum SOD enzyme activity and MDA content in mice. Result: The extracts from Psychotria rubra could prolonged latency and decreased error frequency and found plat time of mice and decreased the brain AChE enzyme activity and LPO content and the serum SOD enzyme activity and MDA content in mice. Conclusion: The ethyl Acetate extracts and the water extracts of Psychotria rubra had improved the learning and memory abilities of Alzheimer's disease model mice. The ethyl Acetate extracts and the water extracts of Psychotria rubra were activity part and its role in showing a dose-effect relationship.

Psychotria rubra; mice; Alzheimer's disease; activity part

R285.5

A

1004-4671（2015）05-0043-05

2015-09-01

广西植物功能物质研究与利用重点实验室开放基金（FPRU2013-5）；玉林师范学院博士启动基金项目（G20120024）。

卢海啸（1974～），广西百色人，博士，玉林师范学院发展规划处副教授，主要研究方向：中药与天然药物活性成分及药效筛选。*

李典鹏（1969～），广西资源人，博士，广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所研究员，研究方向：中药、天然药物和植物化学。