羊栖菜不同溶剂提取物抗抑郁活性研究

郭 悦，夏亚男，周 敏，金洪国，关丽萍

（1.浙江海洋学院食品与医药学院，浙江舟山 316022；2.浙江省舟山医院神经内科，浙江舟山 316021）

羊栖菜不同溶剂提取物抗抑郁活性研究

郭 悦1，夏亚男1，周 敏2，金洪国2，关丽萍1

（1.浙江海洋学院食品与医药学院，浙江舟山 316022；2.浙江省舟山医院神经内科，浙江舟山 316021）

探讨了褐藻羊栖菜4种不同溶剂萃取层的抗抑郁药理活性。采用水煎浸提及超声波辅助提取，制备羊栖菜石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水层提取物。采用常用的抑郁模型“强迫游泳实验”和“悬尾实验”，以小鼠强迫游泳和悬尾不动时间作为指标，对4种不同溶剂提取层进行抗抑郁活性研究。实验结果显示，与空白组相比，石油醚、乙酸乙酯和水层均能降低小鼠强迫游泳和小鼠悬尾的不动时间，具有相对的显著性差异。羊栖菜石油醚、乙酸乙酯和水提取物具有抗小鼠实验性抑郁作用。

羊栖菜；抗抑郁；绝无行为；不动时间

抑郁症是一种常见的情感性精神疾病，随着人们生活节奏的加快和社会竞争的不断加剧，工作压力和精神压力逐渐增加，抑郁症日趋成为困扰人们生活的高发病，严重地危害人们的身心健康。目前抑郁症已经成为威胁人类健康的第四大疾病，据WHO统计预测，抑郁症将成为威胁人类健康的第二大疾病，到2020年[1]。目前用于临床的抗抑郁西药存在的一定毒副作用，为此，开发高效、低毒、不良反应少的新型天然抗抑郁药成为研究工作者研究的热点。

褐藻羊栖菜Sargassum fusiforme(Harv.)Setchel为马尾藻科植物，是一种暖温亚热带性海藻，也是一种重要的食药两用海藻。在我国主要分布在浙江、福建、辽宁、山东等省的沿海地区。在民间素有“海人参”和“长寿菜”之美称。在我国古代，羊栖菜也是很好的入药植物，如陶弘景的《神农本草经》和李时珍的《本草纲目》等史书均有记载[2,3]。据文献报道，羊栖菜中含有大量多糖、甾醇类、多酚类、矿物质和维生素等生物活性物质[4-7]。研究表明这些物质显示抗氧化、抗病毒、抗菌、抗疲劳、降血压和免疫调节等药理活性[8-14]。由此可见，开发研究海藻羊栖菜提取物及相关有效成分及分离活性单体具有一定的发展前景。关于羊栖菜提取物抗抑郁活性的研究还鲜有报道。因此，本文以羊栖菜不同溶剂萃取物为研究对象，采用经典的抑郁模型“小鼠强迫游泳实验”和“小鼠悬尾实验”对其进行抗抑郁药理活性研究，为抗抑郁中药研究提供实验理论依据，为开发利用中药羊栖菜提供科学依据。

1 实验材料

1.1 主要仪器

超声波提取仪（JP300型，武汉嘉鹏电子有限公司）；电热恒温水浴锅（HWS12型，上海—恒科技有限公司）；旋转蒸发仪（RE-2000型，上海亚荣生化仪器厂）；循环水式多用真空泵（SHB型，河南省太康科教器材厂）；精密电子天平（BS323S型，北京赛多利斯科学仪器有限公司）；紫外-可见分光光度计（S53型，上海凌光技术有限公司）。

1.2 实验药物和动物

褐藻羊栖菜：采集于浙江省舟山市海域。阳性对照药盐酸氟西汀（美国Lilly公司），使用前采用生理盐水配制成1 g/L，冰箱中放置，备用；其他常用试剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等均为国产分析纯。健康雄性ZCR小鼠（18～22 g），购自浙江省医学科学院实验动物中心。实验开始为适应实验室环境前一周购买并放入动物实验室饲养（室温：21～23℃），每天自由地饮水、进食，昼夜规律12 h/12 h每日保持，常用日光灯08:00 am-08:00 pm照明。

2 实验方法

2.1 羊栖菜不同溶剂萃取物的制备

称取用粉碎机粉碎成粉末羊栖菜200 g，采用水煎煮法进行提取[15]。加入适量的蒸馏水浸泡，超声波辅助加热回流浸提2 h，提取2次，滤液合并，采用旋转蒸发仪旋干得到膏状黑褐色固体。而后加入10倍量的蒸馏水，分别用10倍量的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，合并滤液，真空旋出溶剂得到膏状物，备用。

2.2 实验动物分组及药品处理

取健康雄性小鼠48只，随机分成6组，每组8只，分别为空白对照组、阳性对照组盐酸氟西汀、石油醚层组、乙酸乙酯层组、正丁醇层组和水层组。盐酸氟西汀配成剂量为10 mg/kg；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水层各剂量组分别配成200 mg/kg的剂量；空白对照组灌服同体积[按照0.1 mL/20 g（小鼠体重）]的0.2%羧甲基纤维素钠水溶液进行灌胃给药，连续灌胃7 d，每天1次。末次给药1 h后，对各组小鼠进行行为学测试实验。

2.3 小鼠强迫游泳实验

采用PORSOLT等人[16]建立的方法进行小鼠强迫游泳实验，本实验对此方法进行了一些改进。实验时，在柱状大烧杯内（规格为水深10 cm、直径34 cm的杯内，水温25±1℃），将实验小鼠单独地放入。行为学实验是观察小鼠6 min内游泳的情况，然后统计后4 min内小鼠游泳累积不动时间（不动的状态即小鼠呈漂浮状态或小鼠停止挣扎和小鼠为保持头部在水面四肢有轻微动作）。

2.4 小鼠悬尾实验

采用STERU等人[17]建立小鼠悬尾实验方法，在此基础上略有改进。实验在昏暗、安静的房间里，在悬尾箱（规格为30 cm×30 cm×25 cm）里，在距离小鼠尾尖部约2 cm处用胶布贴于支架上，使小鼠成倒挂状态，使其头部离箱底约5 cm，1次悬挂2只小鼠，中间用隔板隔开。悬挂时间为6 min，统计后4 min内小鼠悬尾累积不动时间（不动状态即小鼠无任何活动或小鼠停止挣扎不动）。

2.5 小鼠开野行为试验

实验采用ARCHER[18]建立的小鼠开野行为方法，实验时在此基础上略有改进。实验装置为一个长宽均为60 cm，高40 cm的盒子，将其分成没有隔板的相等的小格子，而后在其正上方悬有一个60 W的日光灯。将小鼠单独地放在盒子的中央任其自由活动6 min，记录统计小鼠后5 min内爬行过的站立次数、格子数和理毛的次数，整个实验过程在黑暗中进行。

2.6 数据统计处理

实验结果采用单向方差分析（ANOVA）检测，以x±s表示。具有统计学意义（P＜0.05）。

3 结果

3.1 羊栖菜不同溶剂萃取层对小鼠强迫游泳不动时间的影响

4种不同溶剂提取层小鼠强迫游泳行为学实验结果见表1。以200 mg/kg剂量下连续灌胃7d后，与空白对照组相对比，石油醚、乙酸乙酯和水层均能降低小鼠强迫游泳的不动时间。而石油醚层和水层明显的缩短小鼠强迫游泳的不动时间，作用效果与盐酸氟西汀相似，具有统计学意义（P＜0.001），显示较好的抗抑郁活性。

表1 4种不同萃取层对小鼠强迫游泳不动时间的影响（n=8）Tab.1 Tab.1 The result of the forced swimming test(n=8）

3.2 羊栖菜不同溶剂萃取层对小鼠悬尾不动时间的影响

4种不同溶剂提取层小鼠悬尾不动时间行为学实验结果见表2。实验结果与小鼠强迫游泳抑制不动时间相似。在200 mg/kg剂量下，与空白对照组相比较，石油醚、乙酸乙酯和水层均能缩短小鼠悬尾的不动时间，而正丁醇层与空白组相比没有显著性差异（P＞0.05）。

表2 4种不同萃取层对小鼠悬尾不动时间的影响（n=8）Tab.2 Tab.2 The result of the tail suspension test(n=8)

3.3 小鼠开野行为试验

4种不同溶剂提取层开野行为实验结果见表3，实验结果表明，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水层小鼠站立、移动格数、理毛次数均没有显著变化，与空白组相比（P＞0.05）。

表3 4种不同萃取层对小鼠开野实验影响（n=8）Tab.3 The result of the open-field test(n=8)

4 讨论

经典的行为学抑郁模型“小鼠强迫游泳实验”和“小鼠悬尾实验”被广泛用于评价、筛选和观察抗抑郁药物常用的实验方法[16,17]。这两种行为绝望模型实验构建了一个无法回避的压迫环境，小鼠在实验中表现出来的不动状态，形象地反映出被称之为“对强压环境适应的失败”或“行为绝望和扭曲”[18]。对绝大多数抗抑郁药敏感，此行为学实验具有简便、快捷及敏感的特点，

本研究采用经典抑郁模型“小鼠强迫游泳实验”和“悬尾实验”对褐藻羊栖菜的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水层进行抗抑郁活性评价。实验研究结果显示：与空白对照组相比，在200 mg/kg剂量下3灌胃7 d后，石油醚、乙酸乙酯和水层均能缩短小鼠强迫游泳的不动时间和小鼠悬尾的不动时间，尤其是石油醚和水层与氟西汀相似，明显的缩短小鼠强迫游泳的不动时间（P＜0.001），显示较好的抗抑郁活性。初步推断这可能是与羊栖菜中含有甾醇类、多酚类和糖类物质有关。甾醇类物质在石油醚溶剂中含量相对较多，多酚类结合糖及糖类在水层中含量相对较多。韩迎辰[20]报道的天然植物中甾醇类、多酚和低聚糖具有抗抑郁活性。

同时，为了排除假阳性结果对实验的影响，避免中枢兴奋药的干扰[19]，对各提取层进行开野试验实验。实验结果显示各组小鼠移动格数、站立、理毛次数没有显著变化（P＞0.05），表明羊栖菜各提取层明显降低小鼠强迫游泳试验和悬尾试验的不动时间与神经系统兴奋性无关。此结果与绝大多数抗抑郁药相似，既能减少小鼠不动状态时间，小鼠的自主活动又没受到影响。

褐藻羊栖菜资源丰富，且可食药两用，此研究为开发新型抗抑郁中药提供实验理论依据。

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Antidepressant Effect of Different Extracted from Sargassum fusiforme

GUO Yue1,XIA Ya-Nan1,ZHOU Min2,et al
(1.Food and Pharmacy School of Zhejiang Ocean University,Zhejiang 316022;2.Department of Neurology, Zhoushan Hospital of Zhejiang Province,Zhoushan 316021，China）

To explore the antidepressant effect of four different extracted from Sargassum fusiforme.Sargassum fusiforme was extracted by water immersion extraction and ultrasonic wave method.And different extraction were obtained with petroleum ether,ethyl acetate,butanol and water as the solvents resp.To investigate the antidepressant activity of four different extraction by the forced swimming test and the tail suspension test,with behavioral despair mice in the immobility time as an indicator in this paper.Petroleum ether,ethyl acetate and water could significantly reduce the immobility time of mice during the forced swimming test and the tail suspension test,compared with that of the control group.Petroleum ether,ethyl acetate and water from Sargassum fusiforme possessed the antidepressant effects.

Sargassum fusiforme;antidepressant effect;behavioral despair;immobility time

R931.71

A

1008－830X(2015)06－0578－04

2015-01-20

浙江省大学生新苗人才计划项目（2014R411011）；舟山市医药卫生科技计划攻关项目（2015G01）

郭悦（1995-），女，吉林吉林人，研究方向：天然抗抑郁活性成分.

关丽萍，教授.E-mial:glp730@163.com