清肺止喘合剂工艺研究

袁丽娟

（连云港中医药高等职业技术学校 江苏连云港 222007）

清肺止喘合剂由鱼腥草、连翘、板蓝根、黄芩、炙麻黄、甘草、桔梗七味药组方通过水提取工艺制成合剂，具有清热解毒、化痰止咳的功效，本品对肺热所致的支气管炎、肺炎见咳嗽痰多等症,具有较好的临床疗效，临床多应用与儿童咳嗽。本实验在原方剂基础上，将影响水提取工艺的主要因素加水量、浸泡时间、煎煮次数及时间为考察因素，方中黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根, 对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、溶血性链球菌等多种细菌有抗菌作用[1], 其有效成分为黄芩苷。以方中主要活性成分黄芩苷含量及得膏率为考察指标，按正交试验设计表设计L9(34)试验优选最佳工艺。

一、仪器、试剂与试药

1.仪器：美国Waters 1525 高效液相色谱仪；UV 检测 器（HanbonLichrospher C18 250×4.5mm 5μm）； 电子天平（SECURA5102-1CN）；KQ2200E 型医用超声清洗器(昆山舒美超声仪器有限公司)；HH-2 数显恒温水浴锅 (北京中西远大科技有限公司)；SZ-93 自动双重纯水蒸馏器。

2.实验用药材和对照品：实验用黄芩苷对照品采购于中国生物制品检定所(批号：110715-200815)鱼腥草、连翘、板蓝根、黄芩、炙麻黄、甘草、桔梗由连云港三禾兴药店采购，经我校中药资源教研室鉴定符合2010版药典标准。

3.实验用试剂：实验用试剂乙腈、磷酸、乙醇等均购于国药集团化学试剂有限公司，纯化水（自制）。

二、方法与结果

1.正交试验优选最佳提取工艺

将鱼腥草、连翘、板蓝根、黄芩、炙麻黄、甘草、桔梗七味药材按处方比例称量混合好，通过实验发现影响提取的主要因素包括四方面：水量、浸泡时间、提取时间以及提取次数。实验设计以加水量、浸泡时间、提取次数以及提取时间四个因素为考察因素，每因素各选三个水平，见表1，进行L9(34)正交试验。

本次实验以黄芩苷为主要考察指标，将9 组实验样品分别测定黄芩苷的含量，所得结果进行方差分析。试验方法及结果如下。

表1 提取因素水平表

2.样品制备方法

按处方量称取鱼腥草、连翘、板蓝根、黄芩、炙麻黄、甘草、桔梗七位药材9 份，将实验所得的正交样品液混合过滤后进行浓缩，9 份浓缩液定容到1000ml 容量瓶中，即得样品溶液，备用进行黄芩苷、干浸膏率测定。试验结果，见表2。方差分析结果，见表3.

3. 对鱼腥草、连翘、板蓝根、黄芩、炙麻黄、甘草、桔梗提取液中的黄芩苷进行含量测定

供试品溶液参照2010 版中国药典黄芩项下含量测定[2]。

（1）黄芩苷的含量测定

①色谱条件

色 谱 柱 为HanbonLichrospher C18 250×4.5mm 5μm； 柱 温：25 ℃， 以 甲 醇- 水- 磷 酸 水 溶 液（43 ∶57:0.2）； 流 速：1.0mL/ 分 钟； 检 测 波 长280nm；理论塔板数不低于4000[3]。

②对照品溶液的制备

精密称定黄芩苷对照品6.0200mg 置于10 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，再精密量取1 mL 置于10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得黄芩苷为0.0602g·L-1的对照品溶液。

③供试品溶液的制备

精密量取清肺止喘合剂提取液25 mL 置于100mL 容量瓶中，加乙醇至含醇量为70%，超声处理 20 min，放置至室温，然后加70%乙醇定容至刻度，摇匀，静置，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL 置10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度。用0.45 μm 膜过滤，作为供试品溶液[4]。

④线性关系考察 分别精密吸取黄芩苷对照品溶液2μL、4μL、6μL、8μL、12μL、16μL、20μL， 注入液相色谱仪，以上述色谱条件进行测定。以峰面积( Y) 与对照品体积( X)进行线性回归，得黄芩苷的回归方程为Y = 2745.4X + 15.32( R2= 0.9995)，线性范围为0.1304 ～1.2060μg; 结果表明，黄芩苷在相应范围内线性关系良好。

⑤样品测定 分别精密吸取对照品溶液、1 ～9 号供试品溶液，在上述色谱条件下一次进样10μL，记录峰面积，含量测定结果。

4.干膏质量的计算

精密量取供试品溶液50 mL 于已干燥至恒质量的蒸发皿中，水浴蒸干，再于105 ℃烘箱中干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速称质量，记录干浸膏的质量，计算干膏率。

三、实验结果分析

表2 L9(34)正交试验结果

表3 水提工艺正交试验方差分析

注：F0.05（2，2）=19 , F0.01（2，2）=99

综合黄芩苷，方差分析结果，兼顾生产实际，确定最佳水提工艺条件为A2B2C3D1，即药材无需浸泡，每次加10 倍量的水回流提取3 次，每次1.5h。

四、 讨论

肺热咳嗽或由外邪袭肺，蕴郁化热或饮食不节，蕴积化热，导致肺内郁热，炼液为痰，痰盛生热，肺失宣肃，故而咳嗽频作，痰难咯出。清肺止喘合剂对肺热咳嗽效果极佳，作为医院制剂在临床已经使用20 年，在临床应用中取得了满意疗效。清肺止喘合剂应用复方制剂达到标本兼治的作用。本方采用正交试验法，优选清肺止喘合剂制水提工艺，以黄芩苷含量为指标，分别用HPLC 法进行含量测定，结果进行方差分析，最终优选出A2B2C3D1的制备工艺。

[1] 迟戈夫,丁丽,常丽敏.目前国内黄芩药理研究进展[J].内蒙古民族大学学报(自然科学版) , 2005,20(2):207.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2010:283,97.

[3] 戴航,侯小涛,程世贤.正交试验优选复方百部止咳颗粒中黄芩苷的提取工艺[J]世界中西医结合杂志,2008,3(3):139.

[4] 赵明伟，孙耀志，高松等. 黄芩汤提取工艺研究[J]中医学报,2013,12(28):187.