云南松松塔的化学成分研究

刘 爽，刘 熙，李冬梅，刘光明*，王 飞，高 原*

1大理学院药学与化学学院，大理 671000;2 云南西力生物技术股份有限公司，昆明 650201

松科(Pinaceae)松属(Pinus)植物多为常绿乔木，稀为灌木，约80 余种，分布于北半球，北至北极地区，南至北非、中美、中南半岛及苏门答腊赤道以南地方;我国产22 种10 变种，另引入16 种2 变种，分布几遍全国［1］。对松属植物的化学成分研究表明，该属植物富含二萜、三萜、黄酮等结构类型［2］，但是，针对云南松松塔部位化学成分的相关研究却很少。松塔(Pine cone)系松属植物的球果，在我国具有悠久的药用历史，始记于汉末的《名医别录》，《本草纲目》中对松塔的祛痰、止咳平喘、祛风和润肠等功效也有详细记载［3］。此外，生物活性研究发现，松塔具有抗肿瘤［4］、抗菌［5，6］、抗病毒［7，8］、抗氧化［9］和免疫增强［10］等功能，日本南部九州地区民间也有长期服用日本白松松塔煎水喝治疗胃癌的习俗。日本学者对此进行追踪研究，发现松塔提取物不仅有抗癌活性，还有抑制HIV 复制作用［11］。本课题组从日本学者的研究中得到启发，对云南松等多种松树的松塔提取物进行了活性研究，结果显示几种松塔提取物均能选择性地抑制U14(宫颈癌)细胞、S180(实体癌)细胞、Hepa(肝癌腹水)、Mmtv(乳房肿瘤)细胞等的生长，并且具有抗HIV 活性［12］。为了从云南松松塔中寻找具有潜在药物开发价值的活性先导化合物，我们对云南松松塔的化学成分进行了深入、系统地分离，并利用现代波谱技术对分离得到的13 个单体化合物进行了结构鉴定。以上研究丰富了该植物的化学成分研究内容，为充分开发利用云南松松塔奠定了理论基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂

Bruker AV-400 和Bruker Avance III 600 MHz 核磁共振光谱仪。柱色谱正相硅胶(200～300 目)和薄层色谱硅胶GF254均为青岛美高集团有限公司生产;反相填充材料为Chromatorex C-18(40～75 μm，Fuji Silysia Chemical Ltd.，Kasugai，Aichi，Japan);MCI 填充材料为MCI-gel CHP-20P(75～150 μm，Mitsubishi Chemical Corp，Tokyo，Japan);凝 胶 为Sephadex LH-20(Amersham Biosciences，Sweden);中压液相色谱(MPLC)系统为Büchi Sepacore System equipping pump manager C-615，pump modules C-605，fraction collector C-660(Büchi Labortechnik AG，Flawil，Switzerland)。化合物检测用TLC(Qingdao Marine Chemical Inc，China)结合Agilent 1200 HPLC series system equipped by Eclipse XDB-C18column(5 μm，4.6 × 150 mm)。显色剂为香草醛H2SO4/EtOH 溶液。

1.2 实验材料

云南松松塔于云南大理州漾濞县小金牛村附近采集，由云南省大理学院夏从龙教授鉴定，该植物样品存放于大理白族自治州大理学院药学与化学学院。

2 提取与分离

干燥的云南松松塔26.5 kg，粉碎后，立即用95%乙醇在室温条件下冷浸提取5 次，每次48 h;合并5 次提取液浓缩后，得到浸膏1.2 kg。浸膏用氯仿∶甲醇=1∶1 溶剂溶解后，硅胶拌样，经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮体系进行梯度洗脱(v∶v=95∶5，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，50∶50，0∶100)，检测合并后得到11 个流分。Fr 1 分别经硅胶(氯仿∶丙酮=200∶1，100∶1，50∶1，20∶1)和Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇=1∶1)柱层析分离纯化，得到化合物12(3 mg)。Fr 4 经过反复硅胶、MCI、Sephadex LH-20(甲醇)、RP-18 柱层析分离，得到化合物13(7 mg)、1(12 mg)、5(94 mg)、6(15 mg)。Fr 7～11 经反复硅胶(氯仿∶甲醇=200∶1、100∶1、50∶1)和Sephadex LH-20(甲醇)柱层析分离，得到化合物9(3 mg)、11(12 mg)、7(2 mg)、8(617 mg)、4(82 mg)、2(2 mg)、3(57 mg)、10(439 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 无色油状物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:7.70 (1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-12)，7.62(1H，d，J=1.8 Hz，H-14)，7.32 (1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，2.94 (2H，m，H-7)，2.55 (3H，s，-COMe)，2.32 (1H，dd，J=12.4，3.0 Hz，H-1a)，2.19 (1H，dd，J=12.0，2.3 Hz，H-5)，1.84 (1H，m，H-6a)，1.76 (2H，m，H-2)，1.59 (1H，m，H-3a)，1.47 (1H，m，H-3b)，1.39 (1H，m，H-6b)，1.36(1H，m，H-1b)，1.27 (3H，s，H-19)，1.20 (3H，s，H-20);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:198.2 (s，C-15)，183.6 (s，C-18)，154.7 (s，C-9)，135.4 (s，C-8)，134.5 (s，C-13)，129.3 (d，C-14)，125.8 (d，C-12)，124.6 (d，C-11)，47.3 (s，C-4)，44.1 (d，C-5)，37.6 (t，C-1)，37.5 (s，C-10)，36.6 (t，C-3)，29.8 (t，C-7)，26.6 (q，C-17)，24.8 (q，C-20)，21.5(t，C-6)，18.3 (t，C-2)，16.2 (q，C-19)。以上数据与文献［13］报道的16-降-15-氧代脱氢松香酸数据基本一致，故化合物1 鉴定为16-降-15-氧代脱氢松香酸。

化合物2 无色油状物;1H NMR (CDCl3，600 MHz)δ:8.52 (1H，d，J=1.8 Hz，H-14)，8.13(1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-12)，7.48 (1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，2.77 (1H，dd，J=17.4，14.4 Hz，H-6a)，2.70 (1H，dd，J=14.4，3.0 Hz，H-5)，2.61(3H，s，-COMe)，2.53 (1H，m，H-1a)，2.39 (1H，dd，J=17.4，3.0 Hz，H-6b)，1.83 (1H，m，H-2)，1.77 (1H，m，H-3)，1.64 (1H，m，H-1b)，1.35 (3H，s，H-19)，1.27 (3H，s，H-20)。以上数据与文献［14］报道的16-降-7，15-二氧代脱氢松香酸数据基本一致，故化合物2 鉴定为16-降-7，15-二氧代脱氢松香酸。

化合物3 无色油状物;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.43 (1H，d，J=2.0 Hz，H-14)，7.34(1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-12)，7.25 (1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，4.72 (1H，d，J=3.2 Hz，H-7)，2.54 (1H，dd，J=12.8，2.0 Hz，H-5)，2.36 (1H，brd，J=12.8 Hz，H-1a)，2.11 (1H，d，J=4.4 Hz，H-6a)，1.93 (1H，dd，J=12.8，4.0 Hz，H-3a)，1.83(1H，m，H-2a)，1.75 (1H，m，H-2b)，1.67 (1H，m，H-3b)，1.64 (1H，m，H-6b)，1.50 (3H，s，H-16)，1.50 (3H，s，H-17)，1.48 (1H，m，H-1b)，1.26(3H，s，H-19)，1.15 (3H，s，H-20);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:182.2 (s，C-18)，148.8 (s，C-9)，148.1 (s，C-13)，136.7 (s，C-8)，127.6 (d，C-14)，125.5 (d，C-12)，124.8 (d，C-11)，72.8 (s，C-15)，68.5 (d，C-7)，48.3 (s，C-4)，40.9 (d，C-5)，39.0 (t，C-1)，38.5 (s，C-10)，37.6 (t，C-3)，32.3(t，C-6)，31.8 (q，C-17)，31.8 (q，C-16)，24.7 (q，C-20)，19.7 (t，C-2)，17.1 (q，C-19)。以上数据与文献［15］报道的7α，15-二羟基脱氢松香酸数据基本一致，故化合物3 鉴定为7α，15-二羟基脱氢松香酸。

化合物4 无色油状物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:7.99 (1H，d，J=2.0 Hz，H-14)，7.69(1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-12)，7.30 (1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，3.59 (3H，s，-COOMe)，1.51 (3H，s，H-16)，1.51 (3H，s，H-17)，1.28 (3H，s，H-20)，1.20 (3H，s，H-19)。以上数据与文献［16］报道的15-羟基-7-氧代脱氢松香酸甲酯数据基本一致，故化合物4 鉴定为15-羟基-7-氧代脱氢松香酸甲酯。

化合物5 无色油状物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:4.82 (1H，brs，H-17a)，4.48 (1H，brs，H-17b)，3.66 (2H，brt，J=6.5 Hz，H-15)，1.23 (3H，s，H-19)，0.58 (3H，s，H-20);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:183.2 (s，C-19)，148.2 (s，C-8)，106.4 (t，C-17)，61.2 (t，C-15)，56.5 (d，C-9)，56.3 (d，C-5)，44.1 (s，C-4)，40.5 (s，C-10)，39.5 (t，C-14)，39.1 (t，C-1)，38.7 (t，C-7)，37.9 (t，C-3)，36.3(t，C-12)，30.2 (d，C-13)，29.0 (q，C-18)，26.0 (t，C-6)，21.1 (t，C-11)，19.9 (t，C-2)，19.8 (q，C-16)，12.7 (q，C-20)。以上数据与文献［17］报道的南洋杉醇数据基本一致，故化合物5 鉴定为南洋杉酸。

化合物6 无色油状物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:5.01 (1H，brs，H-15a)，4.94 (1H，brs，H-15b)，4.15 (1H，dd，J=10.0，4.5 Hz，H-9)，3.07(1H，td，J=10.0，7.5 Hz，H-2)，2.60 (1H，dt，J=14.0，4.5 Hz，H-7b)，2.43 (1H，m，H-11b)，2.29(1H，td，J=11.5，2.0 Hz，H-11a)，2.22 (1H，tdd，J=11.5，9.0，1.5 Hz，H-10b)，2.06 (1H，t，J=10.0 Hz，H-3b)，2.02 (1H，m，H-10a)，1.86 (1H，m，H-5)，1.86 (1H，m，H-7a)，1.73 (2H，m，H-6)，1.42(1H，dd，J=10.0，7.5 Hz，H-3a)，1.02 (1H，s，H-13)，1.01 (1H，s，H-14)。以上数据与文献［18］报道的异考布松数据基本一致，故化合物6 鉴定为异考布松。

化合物7 白色粉末状;1H NMR (CD3OD，600 MHz)δ:7.23 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.68 (1H，d，J=2.5 Hz，H-5')，6.59 (1H，d，J=2.5 Hz，H-3')，6.35 (1H，d，J=2.0 Hz，H-4)，2.75 (3H，s，H-7')。以上数据与文献［19］报道的交链孢酚数据基本一致，故化合物7 鉴定为交链孢酚。

化合物8 无色油状物;1H NMR (CDCl3，500 MHz)δ:6.82 (1H，d，J=7.0 Hz，H-5)，6.79 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，6.61 (1H，s，H-2)，6.59 (1H，d，J=7.0 Hz，H-6)，6.49 (1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6')，6.40 (1H，d，J=1.5 Hz，H-2')，5.59 (2H，brs，Ar-OH)，4.14 (1H，dd，J=9.0，7.0 Hz，H-9'a)，3.87 (1H，dd，J=9.0，7.0 Hz，H-9'b)，3.80(3H×2，s，-OMe)，2.93 (1H，dd，J=14.0，5.5 Hz，H-7a)，2.88 (1H，dd，J=14.0，7.0 Hz，H-7b)，2.61(1H，m，H-7'b)，2.56 (1H，m，H-8)，2.53 (1H，m，H-7'a)，2.47 (1H，m，H-8');13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:178.8 (s，C-9)，146.6 (s，C-3)，146.5 (s，C-3')，144.4 (s，C-4)，144.3 (s，C-4')，129.7 (s，C-1)，129.5 (s，C-1')，122.0 (d，C-6)，121.3 (d，C-6')，114.3 (d，C-5)，114.0 (d，C-5')，111.4 (d，C-2)，110.1 (d，C-2')，71.3 (t，C-9')，55.8 (q，-OMe)，55.7 (q，-OMe)，46.5 (d，C-8)，40.9 (d，C-8')，34.5 (t，C-7)，38.2 (t，C-7')。以上数据与文献［20］报道的罗汉松脂素数据基本一致，故化合物8鉴定为罗汉松脂素。

化合物9 无色油状物;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:6.77～6.95 (6H，m，Ar-H)，5.60，5.58(2H，s，Ar-OH)，4.85 (1H，d，J=5.2 Hz，H-7)，4.42 (1H，d，J=7.2 Hz，H-7')，3.92 (3H，s，-OMe)，3.90 (3H，s，-OMe)。以上数据与文献［21］报道的(+)-表松脂素数据基本一致，故化合物9 鉴定为(+)-表松脂素。

化合物10 无色油状物;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.38 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.10 (1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6')，6.89 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，5.92 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，5.88(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，4.98 (1H，d，J=11.6 Hz，H-2)，4.57 (1H，d，J=11.6 Hz，H-3)，4.82(1H，d，J=7.6 Hz，H-1'')，3.88 (1H，dd，J=12.0，2.0 Hz，H-6''a)，3.67 (1H，d，J=6.0 Hz，H-6''b)，3.51 (1H，dd，J=9.2，7.7 Hz，H-2'')，3.46(1H，t，J=9.3 Hz，H-3'')，3.43 (1H，m，H-5'')，3.37 (1H，t，J=9.1 Hz，H-4'');13C NMR (CD3OD，100 MHz)δ:198.4 (s，C-4)，168.7 (s，C-7)，165.3(s，C-9)，164.4 (s，C-5)，148.9 (s，C-4')，146.5(s，C-3')，130.0 (s，C-1')，124.6 (d，C-6')，118.1(d，C-2')，116.8 (d，C-5')，104.0 (d，C-1'')，101.8(s，C-10)，97.3 (d，C-8)，96.3 (d，C-6)，84.9 (d，C-2)，78.3 (d，C-5'')，77.6 (d，C-3'')，74.9 (d，C-2'')，73.5 (d，C-3)，71.5 (d，C-4'')，62.5 (t，C-6'')。以上数据与文献［22］报道的二氢槲皮素3'-O-葡萄糖甙数据基本一致，故化合物10 鉴定为二氢槲皮素3'-O-葡萄糖甙。

化合物11 白色粉末状;1H NMR (CD3OD，500 MHz)δ:7.46 (2H，d，J=7.5 Hz，H-2'，H-6')，7.28(2H，t，J=7.5 Hz，H-3'，H-5')，7.18 (1H，t，J=7.5 Hz，H-4')，6.99 (1H，d，J=16.5 Hz，H-7)，6.95 (1H，d，J=16.5 Hz，H-8)，6.45 (2H，d，J=2.0 Hz，H-2，H-6)，6.15 (1H，t，J=2.0 Hz，H-4)。以上数据与文献［23］报道的数据基本一致，故化合物11 鉴定为赤松素。

化合物12 无色油状物;1H NMR (CDCl3，500 MHz)δ:7.29 (2H，s，H-2'，H-6')，7.20 (2H，s，H-3'，H-5')，7.19 (1H，s，H-4')，6.59 (1H，d，J=12.0 Hz，H-8)，6.49 (1H，d，J=12.0 Hz，H-7)，6.38(1H，s，H-4)，6.30 (1H，s，H-6)，6.26 (1H，s，H-2)，4.72 (1H，brs，Ar-OH)，3.63 (3H，s，-OMe)。以上数据与文献［24］报道的(Z)-3-羟基-5-甲氧基二苯乙烯数据基本一致，故化合物12 鉴定为(Z)-3-羟基-5-甲氧基二苯乙烯。

化合物13 黄色油状物;1H NMR (CDCl3，500 MHz)δ:9.64 (1H，d，J=7.5 Hz，H-3')，7.39 (1H，d，J=16.0 Hz，H-1')，7.13 (1H，d，J=8.0，2.0 Hz，H-6)，7.06 (1H，d，J=2.0Hz，H-2)，6.96 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.59 (1H，dd，J=16.0，8.0 Hz，H-2')，6.06 (1H，s，Ar-OH)，3.94 (3H，s，-OMe)。以上数据与文献［25］报道的数据基本一致，故化合物13 鉴定为松柏醛。

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