聚烯烃滴眼剂瓶中4种抗氧剂含量测定及迁移研究

朱海燕，张广湘，郑 杰

（广东省医疗器械质量监督检验所，广东广州510663）

聚烯烃滴眼剂瓶中4种抗氧剂含量测定及迁移研究

朱海燕，张广湘，郑 杰

（广东省医疗器械质量监督检验所，广东广州510663）

目的：建立测定聚烯烃滴眼剂瓶中抗氧化剂1010、330、168、1076的高效液相色谱法（HPLC），并研究这4种抗氧剂向玻璃酸钠滴眼液中的迁移情况。方法：色谱柱为Inertsil®ODS-SP，（5μm，4.6mm×250mm），流动相为乙腈-四氢呋喃-水（体积比6∶3∶1），柱温为25℃，流速为1.0ml／min，检测波长为276nm和266nm，柱温为25℃。结果：抗氧剂1010、330、168、1076分别在0.9996～79.97μg／ml，0.5049～80.78μg／ml，1.531～40.11μg／ml，2.035～81.42μg／ml范围内线性关系良好，加标回收率在82.17%～120.39%内，相应RSD均小于5%。结论：本文所建方法准确、灵敏、简便，适用于聚烯烃滴眼剂瓶及玻璃酸钠滴眼液中四种抗氧剂的含量检测。

抗氧剂；聚烯烃滴眼剂瓶；HPLC

聚烯烃作为塑料包装产品的主流，常用于滴眼剂的包装中，聚烯烃加工工艺时常加入酚类、亚磷酸酯类、硫酯类抗氧剂，抗氧剂与药液接触时发生相互作用或直接迁移至药液时，影响药效的发挥甚至危及人体健康［1］。因而，严格控制滴眼剂瓶中抗氧剂含量及其迁移量是必要的。国内YBB药包材标准［2］收录的滴眼剂瓶有聚丙烯型及低密度聚乙烯型，但并未对抗氧剂作出相关规定。玻璃酸钠滴眼液临床上主要用于各种内外因疾患所致的角结膜上皮损伤，尤其适用于干燥综合征和斯-约综合征等需长期用药的患者，玻璃酸钠滴眼液按进口西药标准进行质量控制，暂未查阅到其对抗氧剂的限量要求。《欧洲药典》7.0［3］版对非肠道制剂及眼科制剂用聚丙烯包装容器规定配方中单个抗氧剂含量不得超过0.3%，总量不得超过0.3%。本研究参照《欧洲药典》及相关文献［5-6］，建立高效液相色谱法测定聚丙烯型及低密度聚乙烯单剂量滴眼剂瓶中抗氧剂含量及其在玻璃酸钠滴眼液中的迁移量，所建方法简便，结果准确，专属性强，可有效控制产品的质量。

1 实验部分

1.1 试验仪器：LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司），色谱柱Inertsil®ODS-SP，（5 μm，4.6 mm×250 mm）；Synergy超纯水系统（Merck MILLIPORE）；电子天平（BS210S，startorius公司）；手动固相萃取仪（AES-12，天津奥特赛恩斯有限公司）；固相萃取小柱：Wondasep®C18。

1.2 试剂与样品：抗氧剂168：亚磷酸三（2，4-二叔丁基苯基）酯，C42H63O3P，CAS：31570-04-4，批号：MKBF0813V，98%；抗氧剂330对照品：1，3，5-三甲基2，4，6-三（3，5-二叔丁基-4-羟基苄基）苯，C54H78O3，CAS：1709-70-2，批号：MKBF6188V，99%；抗氧剂1010对照品：四-［β-（3，5-二叔丁基-4-羟基苯基）丙酸］季戊四醇酯，C73H108O12，CAS：6683-19-8，批号：MKBF3728V，98%；抗氧剂1076对照品：β-（3，5-二叔丁基-4-羟基苯基）丙酸正十八碳醇酯，C35H62O3，CAS：2082-79-3，批号：MKBB8963V，99%；以上抗氧剂均购自SIGMA-ALDRICH公司。抗氧剂168氧化物（168’）：三（2，4-二-叔丁基苯基）磷酸酯，C42H63O4P，CAS：95906-11-9，购自TORONTORESEARCH CHEMICALS INS，批号：7-T-YKZ-65-2，100%。

甲醇、乙腈、四氢呋喃均为色谱纯，二氯甲烷为分析纯；实验用水为Synergy超纯水。

低密度聚乙烯单剂量滴眼剂瓶，批号：B-140901、B-140902、B-140903，Equistar公司产品；

玻璃酸钠滴眼液原料，批号：140901、140902、140903，ZY公司产品；

聚丙烯滴眼剂瓶，批号：140501，140502，140503，FQ公司产品。

1.3 色谱条件：采用Inertsil®ODS-SP，（5 μm，4.6 mm×250 mm）为色谱柱，乙腈-四氢呋喃-水（体积比6∶3∶1）为流动相，流速为1.0ml／min，波长：276 nm用于抗氧剂1010、1076和330的定量和266 nm用于抗氧剂168和168氧化物的定量，进样量：20μl，柱温为25℃。

1.4 溶液制备：抗氧剂对照液：称取抗氧剂168氧化产物，抗氧剂168、330、1010、1076标准品各约60.0mg分别溶于10.0 ml乙腈与四氢呋喃等体积混合的溶液中。分别吸取上述溶液2ml用混合液（乙腈与四氢呋喃等体积混合液）稀释至50ml，得对照液A、对照液B。

供试液S1：精密称定2 g滴眼剂瓶，剪碎，置于圆底烧瓶中，加80 ml甲苯煮沸回流2 h，冷却至60℃，边搅拌边加入120 ml甲醇，用4号砂芯漏斗过滤。用25 ml甲苯-甲醇（40∶60）冲洗烧瓶和漏斗，将洗液并入滤液中，用同样溶液稀释至250 ml。取50 ml挥干，用适量四氢呋喃-乙腈（1∶1）溶解残留物，定容至5ml，0.45μm滤膜过滤。

供试液S2：取滴眼剂瓶，剪成2cm×0.5cm的长条，置烧杯中，加水150ml洗涤，室温干燥后，移至锥形瓶中，按照6cm2／ml比例加入玻璃酸钠滴眼液原料150ml，置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃保持30min，冷却至室温，移出，得样品液。取100ml样品液上C18SPE小柱（预先用3 ml甲醇和3ml水依次活化），控制流速为1.5～2ml／min。用5ml甲醇与3ml二氯甲烷依次洗脱，洗脱液用甲醇定容至10 ml，0.45μm滤膜过滤。

2 方法学验证

2.1 线性实验：将对照液A、对照液B稀释至不同浓度溶液，按“1.3”色谱条件测定，每个浓度测3次，取平均值。抗氧剂168结构为亚磷酸盐，易被氧化成168氧化物。因此抗氧剂168以抗氧剂168与抗氧剂168氧化物测得浓度之和表示。峰面积为横坐标（A），浓度为纵坐标（C），进行线性回归，得抗氧剂的线性方程。

2.2 最低检测限和定量限试验：分别称取抗氧剂168、330、1010、1076、168’适量，用乙腈与四氢呋喃等体积混合液溶解稀释，定容，稀释至信噪比为3，即样品的检测限，稀释至信噪比为10，即样品的定量限。

2.3 精密度试验：将对照储备液稀释成三个浓度，分别进样20 μl，注入液相色谱仪，每个浓度连续进样3针，记录色谱图，抗氧剂1010的RSD在0.17%～3.58%，抗氧剂1076的RSD在0.12%～3.10%，抗氧剂330的RSD在0.11%～5.87%，抗氧剂168的RSD在1.78%～2.89%，可见本方法的精密度良好。

2.4 回收率试验：取滴眼剂瓶（批号分别为B-140901、140501）4份，精密加入不同浓度的4种抗氧剂，按“1.4”项下方法制备供试品S1，“1.3”方法测定各抗氧剂含量，计算回收率。

取玻璃酸钠滴眼液（批号140901）4份，精密加入不同浓度的4种抗氧剂，按“1.4”项下方法制备供试品S2，“1.3”方法测定各抗氧剂含量，计算回收率。

3 实验结果与评价

取滴眼剂瓶及玻璃酸钠滴眼液，按“1.4”项下处理样品，“1.3”项下色谱条件进行分析，记录图谱，外标法定量，结果表明聚丙烯滴眼剂瓶抗氧剂检出量小于0.02%，而低密度聚乙烯单剂量滴眼剂瓶抗氧剂检出量小于等于0.0005%，而相应的迁移液中均未检出抗氧剂。

4 讨论

本研究对《欧洲药典》7.0版中抗氧剂检测色谱条件进行改进，4种抗氧剂紫外吸收数据表明，抗氧剂1010、1076、330最大吸收波长为276 nm，抗氧剂168及其氧化产物最大吸收波长为266 nm，本研究采用同一流动相双波长同时检测4种抗氧剂，所建方法准确、快速、分离度能满足要求，可为聚烯烃类滴眼剂瓶抗氧剂含量及在玻璃酸钠滴眼液中迁移量提供实验参考。

［1］曹承敬，张书珍，张铣.四种受阻酚类抗氧剂的毒理研究［J］.北京医学院学报，1982，14（2）：105-109.

［2］国家食品药品监督管理局.直接接触药品的包装材料和容器标准汇编［S］.2006，第一辑，5-15.

［3］欧洲药典［S］.7.0版：338-341.

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1002－2376（2015）11－0024－02

2015－09－06