对照提取物的国内外发展研究概况

戴宇，邓赟，宋川霞，陈红梅，胡佳，康敏

对照提取物的国内外发展研究概况

戴宇，邓赟，宋川霞，陈红梅，胡佳，康敏

目的：对对照提取物的国内外发展研究进行综述。方法：就对照提取物在国内外的发展概况及应用现状进行了综述，结合对照提取物在《中国药典》( 2010 年版) 、欧洲药典（7.0）、美国药典（36）的应用现状，就对照提取物展开讨论并展望。结果：阐明了进一步推动对照提取物的发展对中药国际化进程的积极影响。结论：中药标准物质中的对照提取物在中药质量控制中意义重大，成为中药国际化的重要亮点。

对照提取物；发展；中国药典；美国药典；欧洲药典

中药标准物质主要分为中药化学对照品、对照提取物、对照药材等，在中药材和中成药的质量控制中被广泛应用。对照提取物系指经适当方法提取制备，含有多种主要有效成分或指标性成分，用于药材（含饮片）、提取物、中成药等鉴别或含量测定用的国家药品标准物质。它是一类非单体成分对照物，包括药材提取对照物和挥发油对照物，要求其主要成分比例相对固定[1]，并提供对照提取物的来源、原料的科名、拉丁学名、药用部位及有关的制备工艺、批号和提供单位，有颜色、气味、溶解度、相对密度、折光率、旋光度、凝点等详细描述，用于薄层色谱法或其他色谱鉴别以及高效液相色谱法的含量测定。中药标准物质对我国中药质量标准、检测水平的迅速提高，中药产业化、现代化进程的推进做出了重要贡献，但在近几年才提出的对照提取物方面，还有很多欠缺与不足。本文就对照提取物的概况及在国内外发展、应用现状进行综述并进行展望，希冀为中药标准物质研究科学化、完善化、标准化提供一定参考。

1 对照提取物在国内的发展概况

2005年版《中国药典》首次收载了对照提取物，共11种，分别为广藿香油、木香挥发油、乌灵菌粉、发酵虫草菌粉（CS-C-Q80）、穿龙薯蓣皂苷提取物、总银杏酸、黄山药皂苷提取物、银杏叶提取物、温莪术油、薄荷素油、檀香油[2]。2010年版《中国药典》增加了5种[3]，分别为云南白药提取物、八角茴香油、牡荆油、松节油、三七总皂苷，共计16种。但对照提取物占中药标准物质总数量的比例极少，仅为1.88%。随着2015年版《中国药典》修订工作进程的不断推进，预计将有更多的对照提取物被收载和应用。

目前，中国药品生物制品检定院已发放了20种对照提取物，分别为：银杏叶对照提取物、穿龙薯蓣皂苷提取物、三七总皂苷、三七茎叶皂苷、人参茎叶皂苷、黄山药皂苷提取物、金龙胆草提取物、荆芥油、生姜油、莪术油、八角茴香油、鱼腥草油、牡荆油、小茴香油、紫苏油、肉桂油、薄荷素油、烈香杜鹃油、月见草油、薏苡仁油。根据中药对照提取物应用现状，将其分为3类: ①药材或挥发油对照提取物以及一些成方制剂。主要用于原药材提取物或含原药材中成药的薄层鉴别，相当于同时采用多个化学对照品进行鉴别，与单一对照品相比，提高了鉴别的专属性，与对照药材相比，简化了制备过程。比如三七总皂苷、牡荆油、松节油、银杏叶对照提取物、薄荷素油分别用于它们对应提取物的鉴别；八味檀香散、八味清心沉香散用檀香油进行薄层鉴别；地奥心血康胶囊（片）用黄山药皂苷对照提取物进行薄层鉴别。②组分对照提取物，用于待测样品中某类组分鉴别或色谱峰定位，比如银杏叶提取物、银杏叶片、银杏叶胶囊质量标准中总银杏酸检查项下各色谱峰的定位; ③标示了多个待测成分含量的对照提取物用于定量分析，比如标示槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的银杏叶对照提取物用于银杏叶提取物、银杏叶片、银杏叶胶囊总黄酮苷的含量测定或者标示白果内酯，银杏内酯A，银杏内酯B 和银杏内酯C 含量的银杏叶对照提取物用于银杏叶提取物、银杏叶片、银杏叶胶囊萜类内酯的含量测定[4]。

近三年内先后有学者将对照提取物应用于中药的质量控制，如刘绍勇[5]等人利用对照提取物作为参考物质，对金银花药材进行多指标含量测定，效果满意，进一步证实了该方法用于中药材质量控制具有可行性。薛翠娟[6]等人采用对照提取物法测定葛根饮片中5种成分含量，结果显示葛根对照提取物可以用于葛根药材的质量控制，也初步验证了对照提取物在中药应用中的可行性。但是关于对照提取物的应用还在探索、推行、验证其可靠性和可行性的阶段，相关报道极少。

2 对照提取物在国内中药质量控制中的应用

2.1 在中药饮片质量控制方面的应用

经统计，2010版《中国药典》饮片质量控制中应用的中药化学对照品共400种，占饮片质量控制中对照物质总数的62.5%，但中药化学对照品存在分离难度大，单体不稳定，供应价格高，供应数目有限且所测成分单一等缺点，因此在中药材的多指标质量控制中应用对照提取物进行研究是一种新的趋势。中药饮片成分多样且复杂，以单体化学对照品控制饮片质量，所提供的信息远远达不到整体质量控制的目的，这与中医整体观的思想不相符。对照提取物相对于中药化学对照品和对照药材有专属性较强、配制操作简单、价格低等优势。对照提取物可以应用于薄层色谱法，弥补对照药材不能体现饮片炮制前后不同的缺点，还能应用于液相、气相色谱等的鉴别。同时，在含量测定中对照提取物可以标示多个单体成分含量，达到“一标多测”的目的。因此，推行以饮片对照提取物为对照品的质量评价体系，可以完善饮片质量标准，解决部分饮片标准缺失和炮制加工后成分改变而标准未相应改变等问题。目前，2010版药典收载的饮片质量标准中仅薏苡仁油1种对照提取物[7～8]。

2.2 在中成药质量控制方面的应用

中成药（包括现代中药制剂）是中医学的重要组成部分，其组成药味多，成分复杂，对其进行鉴别和质量控制比较困难。文献调研显示，每个中药制剂建立鉴别方法，采用最多的就是薄层色谱法，以对照品或对照药材为对照，同时设置阴性对照用于考察方法的可靠性。少数品种也使用试管反应、显微鉴别或HPLC法。质量控制方法多数采用测定其中一种药物的主要成分或有效成分的含量，但中成药是在中医药理论指导下形成的，是一个极其复杂的系统，含有多种化学成分。因此，仅用其中一味药的某个化学成分作用来说明整个制剂的药效是不充分、不合理的，是不符合中医药整体观念理论的。尽管从2005年《中国药典》已发布了对照提取物法主要用于成方制剂鉴别和质量控制，但是在实际运用中仅有几篇文献报道。由此可见，更多的对照提取物及其标准的建立已经成为刻不容缓的任务。

由于对照提取物是混合物，不稳定单体成分在混合物中稳定性得以提高。虽然2005 年版《中国药典》中已经提出了对照提取物的概念，但是对照提取物在《中国药典》中的收载从2005年到2010年仅增加了5种，且其在中药含量测定及质量控制中的规范化应用目前没有研究报道，可见其发展速度缓慢，但是对照提取物的应用必将是中医药行业的发展趋势，这将为我们提供一个很广阔的研究空间。同时，在以多成分质量控制为研究趋势的大环境下，对照提取物测定法将有更大的发展空间[9]。

3 对照提取物在国外的发展应用概况

通过对美国药典（US Pharmacopoeia，USP）和欧洲药典（European Pharmacopoeia，EP）的查阅和相关文献的分析，可知：在国外药典提出的对照提取物( 或对照制剂) 被定义为二级参考物质，必须要有一个和它相关的一级标准来约束它，并用一级标准对其进行定期或实时的校准。如要对对照提取物色谱进行定期校正并进行多成分的鉴别，则应提供其图谱。在对照提取物的说明中标明需检测的成分和相应的图谱，并进行系统适用性实验，调整实验参数确保分析方法与对照图谱的一致。随时校正测定条件，使用者可较简单地操作，得到与标准图谱一致的信息( 色谱峰大小，位置等) ，从而获得样品较全面的信息。

国外药典里许多天然药物各论已使用对照提取物进行定性鉴别，如EP7.0的圣约翰草提取物( St．John's Wort dry extract) 、越橘提取物（Bilberryextract）以及USP 34 中的猫爪草提取物( Cat's Clawextract) 、红车轴草提取物( Red Cloverextract) 、圣约翰草提取物( St. John's Wortextract)、黑升麻提取物与（Black Cohoshextract）等。

自2004以来，欧洲药品质量管理局（European Directorate for the Quality Control of Medicines，EDQM）为研究中药化学对照物质（chemical reference substances，CRS）已经做了相当大的努力，以前只有极少数是可用的，现在已经有20余种对照提取物[10]被用于中草药及其提取物的分析，如：番泻叶提取物目前运用薄层色谱法作为鉴定对照；银杏叶提取物用于对银杏萜类内酯峰的指认，包括银杏内酯A，B，C和白果内酯，此外，它作为一个含有0.35%的银杏酸对照提取物也用于银杏酸限量检测。奶蓟草（又名水飞蓟）干燥提取物用于计算总水飞蓟素含量（即水飞蓟宾A和B，异水飞蓟宾A和B，次水飞蓟素，水飞蓟宁含量之和），以及水飞蓟宾，异水飞蓟宾和水飞蓟亭、水飞蓟宁的百分含量；穗花牡荆果实干燥对照提取物可以帮助测定紫花牡荆素含量。圣约翰草对照提取物，用于测定总金丝桃素含量（即金丝桃素和伪金丝桃素含量之和）；越橘提取物用于测定总花青素含量等。表1为《欧洲药典》（EP 7.0）[11]收载的部分对照提取物的情况展示。

表1 欧洲药典中的部分对照提取物

USP与EP不同的是更注重某些形式方面的建立和资格相关程序。USP并未明显区分主次标准，两种标准都在使用。USP也十分重视对照提取物的原材料.当前发布的参考标准的批次都列在USP的网站上(www.usp.org)并附有相关批号。对于EP的参考标准，尽管其标签上提供了关于质量方面较全面的信息，但他们的用户并不会完全严格按照分析说明来控制对照提取物的质量。

目前美国药典中有28种对照提取物[12]在应用，其中大部分用于TLC鉴别实验。USP中的对照提取物主要用于检测分析，其一般不用于定量分析，而是专门用于鉴定测试，系统适用性试验或峰的识别。在美国药典中，当对照提取物作为一个快捷的方法用于鉴别测试时，它比起单一的纯物质，能够更全面的提供各种相关信息。比如在大豆的专论中，其提取物可以用来识别异黄酮乙酰和丙二酰衍生物，这是用纯物质不能做到的。然而，水飞蓟宾对照物质也可以进行可靠的定量分析，在蔓荆子、缬草和奶蓟草的各专论中分别对紫花牡荆素，缬草烯酸和水飞蓟宾进行了定量分析。表2为《美国药典》（USP36）收载的对照提取物的情况展示。

表2 美国药典中的部分对照提取物

奶蓟草提取物粉末 — √奶蓟草胶囊 — √奶蓟草片 — √红车轴草提取物 红车轴草 √（TLC、Peak ID） √红车轴草粉末 √（TLC、Peak ID） √红车轴草提取物粉末√（TLC、Peak ID） √红车轴片 √（Peak ID） √圣约翰草提取物 圣约翰草 — √圣约翰草粉末 — √圣约翰草提取物粉末√（TLC） √贞洁树提取物 贞洁树 √（TLC） —贞洁树粉末 √（TLC） —贞洁树提取物粉末 √（TLC） —臀果木提取物 臀果木 √（TLC） —臀果木提取物 √（TLC） —番茄提取物 含有番茄红素的番茄提取物 — √姜黄提取物 姜黄根 √（TLC、Peak ID） √姜黄根粉末 √（TLC、Peak ID） √姜黄根提取物粉末 √（TLC、Peak ID） √假马齿苋提取物 假马齿苋 √（TLC、Peak ID） √假马齿苋粉末 √（TLC、Peak ID） √假马齿苋提取物粉末√（TLC、Peak ID） √积雪草提取物 积雪草 √（TLC、Peak ID） √积雪草粉末 √（TLC、Peak ID） √积雪草提取物粉末 √（TLC、Peak ID） √积雪草总苷 √（TLC、Peak ID） √藤黄羟基柠檬酸提取物藤黄 — √藤黄果 — √藤黄果羟基柠檬酸提取物粉末 — √除虫菊提取物 除虫菊提取物 √（Peak ID） √乳香提取物 乳香 √（TLC、Peak ID） √乳香提取物 √（TLC、Peak ID） √叶下珠提取物 叶下珠 √（TLC、Peak ID） √(Peak ID)叶下珠粉末 √（TLC、Peak ID） √(Peak ID)穿心莲提取物 穿心莲 √（TLC、Peak ID） √

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4 展望

对照提取物的概念在国内外被提出，并在一定程度上已经应用于实际，欧美国家的相关药事法规在不断建立新的药品标准物质（尤其是植物药），如美国药典委员会在2013年5月出版的草药法典（HMC）。可见中草药已经更进一步地被世界接纳和认可。随着药品质量控制水平的提高，药典中将引入更多新的对照提取物，用于中药及其成方制剂质量控制，甚至是其他更多的方面。我们应顺应对照提取物的国际化，在与世界各国的交流和合作中制定出具有中国特色的对照提取物标准体系。

目前对照提取物品种和数量仍很少，国际上尚未建立完整的对照提取物标准及相关数据库，而中药质量控制的发展不能仅仅局限在对照提取物的开发上，我们应该积极探索，寻求更多科学、先进、快捷的方法（如一测多评或一标多测等）来代替对照提取物的作用。对照提取物在医药领域作为药品标准物质中一项战略性的资源，有着比以往化学对照品更为突出的优点，但其标准建立的困难，稳定性、均一性难以控制等不足，将成为中药质量控制中一项艰巨而意义重大的研究任务，这对于中药事业的发展既是机遇又是挑战[13]。随着天然产物化学分离分析技术飞速发展，中药质量标准水平不断地提高，这必将要求我们加强国内外技术合作，做到全行业信息共享，才能促进对照提取物的快速发展，从而推进中药国际化和现代化的进程。

[1] 李磊,戴金凤,黎先春,等.丹参提取物作为质控参照物的可行性研究[J].现代中药研究与实践,2004,18( 增刊) : 36．

[2] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005．

[3] 国家药典委员会,中国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010．

[4] 袁贤达,高慧敏,王智民,等.基于木通皂苷探讨中药质量评价用对照提取物研究[J].中国中药杂志,2012,37(16):2413.

[5] 刘绍勇,张文明,潘建超,等.对照提取物用于金银花药材的质量控制方法研究[J].中国中药杂志,2013,38(13):2147.

[6] 薛翠娟,章军,荆文光,等.对照提取物法测定葛根饮片中5种成分含量[J].中国中药杂志,2012,37(16):2388.

[7] 陆兔林,李伟东,毛春芹,等.中药对照物质在饮片质量研究中的应用[C].中华中医药学会中药炮制分会2011年学术年会论文集,2011:30.

[8] 陈勇,陆静娴,周建良,等.薏苡仁对照药材和薏苡仁油对照提取物稳定性考察[J].中国药品标准,2012,13(1):39.

[9] 马玲云,马双成.中药标准物质的发展现状与展望[J].中国药事,2010,24(12):1232.

[10] Schwarz M,Klier B,Sievers H.Herbal Reference Standards[J]. PlantaMed,2009,75(7): 689.

[11] The European Directorate for the Quality of Medicines. European Pharmacopoeia(7.0)[M].Europe: European Directorate for the Quality of Medicines,2011.

[12] The United States Pharmacopieial Convention. United States Pharmacopeia36[M].USA: United States Pharmacopeial Convention,2012.

[13] 王智民,肖诗鹰,钱忠直.加速中药标准提取物发展，推动中药现代化和国际化[J].中国中药杂志,2003,32(17) : 1830.

（责任编辑：陈思敏）

The review of development on reference extracts at home and abroad

DAI Yu, DENG Yun, SONG Chuan-xia, CHEN Hong-mei, HU Jia, KANG Min//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province—Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To summarize the development and application on reference extracts at home and abroad.Method:The development and application on reference extracts home and abroad were summarized. The discussion was carried out on the application status of reference extracts in Chinese Pharmacopoeia (2010 edition), European Pharmacopoeia (7.0) and US Pharmacopoeia (36).Result:It was illustrated that the further development of reference extracts would have a positive infuence on TCM internationalization.Conclusion:The reference extracts as one of the TCM reference standards is important to TCM quality control, which becomes the highlight of TCM internationalization.

reference extracts；development；Chinese Pharmacopoeia；US Pharmacopoeia；European Pharmacopoeia

R 284

A

1674-926X(2015)03-017-05

四川省杰出青年学术技术带头人资助计划项目(2010JQ0036)

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

戴宇（1988-），女(汉族)，在读硕士，从事中药有效成分分析应用研究Tel:13408478791 Email:414163617@qq.com

邓赟（1975-），男（汉族），研究员，博士，主要从事天然药物化学研究Tel:13208177492 Email:dengyun2000@hotmail.com

2014-09-19