系统性红斑狼疮患者血清干扰素α2表达水平及其相关性分析＊

苏江 朱静 周彬

（四川省医学科学院·四川省人民医院风湿免疫科，四川 成都 610072）

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种自身免疫介导引起全身多器官受累的慢性炎症性疾病。其确切的病因尚不清楚，目前认为SLE的发病与多种遗传因素、性激素等内源性因素与外源性因素如感染、紫外线等复杂的多层次的相互作用的结果。本病的发病机制极为复杂，远未阐明，包括免疫耐受缺陷、淋巴细胞凋亡障碍、T、B 淋巴细胞以及NK 细胞等功能调节障碍、补体缺陷、免疫复合物清除障碍、细胞因子分泌调节障碍等。研究发现，凋亡细胞和免疫复合物清除缺陷可以活化免疫细胞表面和内部的Fc受体或T 细胞受体（T cell receptor，TCR），激活以Ⅰ型干扰素（Interferon type I，IFN－I）为代表的先天免疫系统导致免疫调节的异常，参与SLE发病。无论在SLE 患者还是动物模型都证实了IFN－α的高表达。许多的研究结果促成了目前的结论：IFN－I，特别是IFN－α 是一个重要的致病因子与SLE的很多免疫学特征和破坏机制有关［1，2］。IFN－α有10多种亚型，不同的IFN－α亚型可能在SLE 的发病中发挥不同的作用，由于酶联免疫吸附法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）敏感性较低，针对外周血IFN－α在SLE 发病中的作用的研究还十分有限，目前国内尚未见IFN－α2在与SLE 患者外周血表达以及与疾病活动性的相关研究。

1 对象和方法

1.1 研究对象 41例SLE 患者来自四川省医学科学院·四川省人民医院风湿免疫科住院患者，均为女性，年龄17～57岁，平均33.1岁。纳入标准：①符合美国风湿病学会（American College of Rheumatology，ACR）1997年修订的SLE诊断标准。②SLE 疾病活动指数（systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI）［3］大于等于6分。正常对照组39名女性，均为本院体检正常人群，年龄22～57岁，平均36.7岁。年龄在两组之间差异无统计学意义。

1.2 方法 在患者治疗前，完成SLEDAI评分以及血细胞分析、抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）、抗dsDNA 抗体、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、补体（C3、C4）、红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、c反应蛋白（c reactive protein，CRP）及24小时尿蛋白定量等实验室检查，并且留取空腹血清样本，－80°冰箱保存备用。IFN－α2的检测采用Luminex液相芯片技术，试剂盒购自美国Millipore公司，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学处理 非正态分布资料以中位数（P25，P75）表示，组间比较采用Mann－Whitney U 检验，相关分析采用Spearman 检验，所有统计均采用SPSS 17.0 统计软件包分析处理。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

41 例活动性SLE 患者血清中有36 例可测到IFN－α2［24.09（2.11，194.50）pg／ml］，39例健康对照血清中有15例可测到IFN－α2［0（0，1.12）pg／ml］，两组IFN－α2 检测值均不符合正态分布，采用Mann－Whitney U 检验结果显示，SLE 患者IFN－α2 表达水平显著高于健康对照（P ＜0.01）。SLE 患者血清IFN－α2水平分别与SLEDAI评分、抗dsDNA 抗体水平、ESR 水平呈正相关（r＝0.354，P ＝0.034；r＝0.325，P＝0.038；r＝0.415，P＝0.018），与C3、C4、外周血白细胞水平呈负相关（r＝－0.447，P＝0.003；r＝－0.470，P＝0.002；r＝－0.347，P＝0.045），而与ANA 滴度、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、CRP、淋巴细胞计数、血小板计数、24小时尿蛋白定量等无相关性，见表1。

表1 IFN－α2与SLE患者临床指标的相关性分析Table 1 Correlation of IFN－α2and clinical indexes of systemic lupus erythematosus

3 讨论

越来越多的证据表明IFN－α是参与SLE 发病的关键细胞因子，Ytterberg和Schnitzer首次报道了活动性SLE患者血清中存在高水平的IFN－α，且与狼疮活动指数和抗dsDNA 抗体滴度相关［4］。近年来，国内外的一些研究也相继报道了患者高水平的IFN－α（mRNA 基因表达水平或血清水平）和SLE 活动性相关。而采用ELISA 法直接检测外周血循环IFN－α水平的研究并不十分成功［5－8］，国内邓姗等采用ELISA法仅在48%患者的血清中检测到IFN－α［9］。且 在SLE患者IFN－α水平与疾病活动度的研究结果也存在差异。王涛等的研究没有发现外周血IFN－α水平与SLEDAI评分存在统计学意义的相关性［10］，可能与不同厂家ELISA 试剂盒灵敏度差异有关。

目前已经发现IFN－α家族有10 余个亚型，在蛋白水平上有78%～95%的相似性［11］。有研究显示，可能有其他IFN－α亚型水平的增高，也提示不同IFNα亚型可能在SLE 的发病中起不同的作用。目前针对IFN－α不同亚型与SLE关系的研究还鲜有报道，国外也仅见A Becker－Merok等报道了循环IFN－α2 水平在2／3的SLE患者的血清中表达增加，且与疾病活动和多种细胞因子的激活有关［12］。

本研究使用以敏感的磁珠为基础的液相芯片技术，发现87.8%的SLE 患者外周血清中可检测到可测到IFN－α2，显著高于正常对照。SLE 患者外周血IFN－α2水平与疾病活动度以及ESR、抗dsDNA 抗体水平、补体水平等相关，提示IFN－α2是IFN－α家族中参与SLE发病的重要亚型。与生物活性分析法相比，固相ELISA 法似乎不够灵敏度，早期在患者血清中直接检测IFN－α2水平的结果令人失望［13］。由于采用了更高的灵敏度液相磁珠分析法，A Becker－Merok等的研究数据已经与最早采用生物活性分析研究SLE 患者IFN－I活性的结果相当，在具有较高疾病活动度的SLE 患者中，约50% 的患者血清干扰素活性增加［12，14］。来自于狼疮小鼠模型和SLE 患者的临床和遗传学研究的数据提示IFN－I在SLE 的发病机制中起关键作用并且和临床特征相关。通过生物和／或基因表达研究发现高IFN－α活性与增高的SLE 疾病活动评分以及抗RO 抗体和抗dsDNA 抗体持续存在相关［15，16］。本研究尚存在一定的局限性，前述提及与IFN－α2存在微小结构差异的10多种亚型，它们均通过相同的IFN 受体发挥作用，目前还不能被检测。同时，细胞因子的检测还没有金标准（免疫或生物活性分析法）。由于本研究的横断面设计，我们不能获得细胞因子在SLE患者外周血表达的动态变化。并且受样本量大小的限制，我们也不能进行详细的亚组分析。

4 结论

循环IFN－α2 水平与循环抗dsDNA 抗体水平呈正相关，可能与循环免疫复合物能刺激浆细胞样树突状细胞生成干扰素有关［2］，但 在A Becker－Merok 等的研究没有观察到IFN－α2 水平与抗dsDNA 抗体水平有相关性，不排除与种族差异有关。

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