真菌及幽门螺杆菌感染在胃癌检出中的病理研究

赵惠明

(淮南朝阳医院病理科，安徽 淮南 232007)

真菌及幽门螺杆菌感染在胃癌检出中的病理研究

赵惠明

(淮南朝阳医院病理科，安徽 淮南 232007)

胃癌已经成为世界上发病率和病死率较高的恶性肿瘤之一，研究指出，幽门螺杆菌和真菌与胃癌的发生、发展和预后相关[1]。1994年国家癌症研究中心也将幽门螺杆菌作为胃癌的Ⅰ类致癌因子，并认为真菌和胃癌的发生有密切关系[2]。但是到目前为止，真菌、幽门螺杆菌感染和胃癌的确切发病机制和确切的关系尚不明确，胃癌侵袭转移和影响预后的机制也不完全清楚。本研究通过观察真菌、幽门螺杆菌感染在胃癌中的检出率及与胃癌的相关性，以期为临床的诊治提供依据，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料回顾性分析2010年1月至2013年1月淮南朝阳医院诊治的45例胃癌患者(胃癌组)和45例慢性萎缩性胃炎患者(慢性萎缩性胃炎组)的临床资料，胃癌组中男31例、女14例，年龄34～78岁，平均(57±7)岁；病程6个月至5年，平均(2.5±1.6)年。慢性萎缩性胃炎组中男30例、女15例，年龄35～80岁，平均(56±6)岁；病程7个月至5.5年，平均(2.6±1.6)年。两组患者的一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。胃癌和慢性萎缩性胃炎的诊断标准均经过胃镜和病理检查确诊。

1.2方法患者均由同一名副主任医师进行胃镜检查，并由同一名病理高年资医师对病变组织进行病理切片，常规石蜡切片打包，选用深圳金桥有限公司提供的姬姆萨染色试剂盒(上海江莱生物科技有限公司生产，批号：09071354)进行常规苏木伊红染色。然后进行引物设计和合成，结合文献[2]报道，核糖体RNA基因扩增引物序列为5′-CTAGACTAACCCTCCA-3′，标签单抗序列为5′-ACCTACGCAGTTACGT-3′。而对于真菌则由同一名副主任医师进行，在孢子显微镜下发现真菌，然后进行特殊染色石蜡打包，在4 μm切片上染色，应用离心机(长沙维尔康湘鹰离心机有限公司生产，型号为DL4-TM)，以离心半径50 cm，1200 r/min离心3 s后添加 1 mL 二甲苯中脱蜡，再次离心5 min，弃去上清液，将沉淀物用1 mL无水乙醇进行洗涤后进行干燥处理，按照DNA试剂盒说明书进行规范操作。最后进行聚合酶链反应扩增，选择2 μm LDNA 模板，25 μL酶混合液和10 μL引物，初始变性5 min、 94 ℃下进行35个循环，30 s后退火，然后在58 ℃循环30 s，再在72 ℃下延长30 s后进行琼脂糖凝胶电泳试验得出结果。

1.3统计学方法应用SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析。计数资料比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

胃癌组中，真菌检出26例，检出率为57.8%，幽门螺杆菌检出34例，检出率为75.6%；慢性萎缩性胃炎组中，真菌检出0例，检出率为0，幽门螺杆菌检出12例，检出率为26.7%。胃癌组真菌检出率、幽门螺杆菌检出率高于慢性萎缩性胃炎组，差异均有统计学意义(χ2=36.562，21.522，P<0.05)。

3讨论

研究表明，在幽门螺杆菌感染时会出现基因的变异，而这些基因可以引起胃癌相关基因的变异，原癌基因Ras-21在肠化生、异型增生的上皮细胞上均有阳性表达，提示其与胃癌细胞的增长和增殖密切相关[3]。有研究[4-5]指出，H-ras基因和胃癌关系较为紧密，其所编码的蛋白质Ras、p21等有调节细胞生长和分化功能，其异常表达和恶性肿瘤的发生起重要作用，且该基因会持续性升高，与胃黏膜癌变的过程和发展密切相关，是胃癌发生早期基因之一，因为其对细胞有丝分裂能力起调节作用，其激活在癌症病变的早期阶段，所以，基因检出情况是确诊的理想方法之一。对于判断是否出现胃癌有重要的临床作用。虽然目前对于幽门螺杆菌诱发胃癌的确切发病机制不明确，但结合相关的报道[6-7]认为与以下几点有关。①幽门螺杆菌感染后胃黏膜处于增殖状态，DNA的合成和分裂活跃，DNA错误复制概率增加。②高度增殖时DNA修复能力下降，而增生活跃容易受各种致癌因子侵犯，反复损伤后造成染色体基因结构和功能异常变化，这为恶化提供了有利的条件。③幽门螺杆菌感染后胃黏膜屏障破坏，原因是腔内致癌物在接近胃上皮细胞不断繁殖、增生后逐渐累积，演变为慢性病变。在细胞释放的氧自由基的作用下，造成细胞DAN断裂、易位、清除，死亡，引起胞质核转导途径的异常，改变了抑制基因和抑制蛋白的活性。

本研究结果显示，幽门螺杆菌检出率为75.6%，比国外研究结果 61%的检出率[8]稍高，这原因可能与检查仪器情况、参数设置等有关，且国外群体的疾病和国内略有不同，但均表明在胃癌患者中幽门螺杆菌检出率高，这也提示在临床上对于幽门螺杆菌要及时清除，以免诱发癌变的可能。

有研究[9]指出，溃疡病是胃内某些真菌感染的基础病因之一，这是由于溃疡病时胃黏膜屏障功能损害，使真菌易于侵入消化道并寄生在溃疡病变处，且对于长期使用质子泵拮抗剂患者来说，胃内的pH值会发生很大的变化，而这些均会造成真菌在胃内的大量繁殖和定植，而本研究结果显示，真菌在胃癌的检出率为57.8%，而在慢性萎缩性胃炎患者中则为0。这也再次证实真菌在胃癌患者中的大量繁殖。

肿瘤发生浸润和转移的关键是微血管和淋巴管的生成。幽门螺杆菌作为一种对环境的抵抗力强，潜伏性佳，长期定居在组织中，不断对组织造成损失，引起慢性炎症，而慢性炎症有又会促使真菌的分解和增生，进一步刺激炎性介质刺激血管内皮细胞的增生，从而使组织中的微血管密度增加，而真菌是一种繁殖能力很强且多样的病原菌，主要依靠各种有性或无性孢子进行繁殖，这样就加剧炎性物质的增殖，加上肿瘤的病变挤压微血管，造成局部的缺氧和低氧，而低氧会造成血管通透性增加，促进血浆外渗[10]。进一步促使细胞衰落凋亡。而一个肿瘤细胞死亡意味新生血管生长的又一个信号[11]。如此循环后造成感染的进一步加重，真菌的大量繁殖，而胃癌则进一步演变甚至转移。所以在治疗上要从多个方面进行综合治疗。这与文献报道的双重感染对胃癌的病理性影响大有关[12]。有研究指出，真菌和幽门螺杆菌会相互作用，会由单一的感染逐渐变成混合感染，增加了胃癌的恶变病程[13]。在作用于胃癌上会由开始的单一的感染病原菌后合并成双重作用加剧胃癌的病理变化。

有研究通过对胃癌、胃溃疡中的真菌和幽门螺杆菌的比较后得出，胃溃疡中的检出率远远低于胃癌中的检出率[14]，本研究结果与之一致，但是其对结果进行了相关的染色处理且在结果中进行了有效的分析，限于本次研究病例数量少、设备有限等因素，未进行相关的分析，这就造成本研究的严谨性欠佳，这也是值得日后继续深入研究的内容之一，只有以循证医学角度进行分析才能对临床诊治提供依据。

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摘要：目的探讨真菌、幽门螺杆菌感染在胃癌检出中的病理情况。方法回顾性分析2010年1月至2013年1月淮南朝阳医院诊治的胃癌患者(胃癌组)和慢性萎缩性胃炎患者(慢性萎缩性胃炎组)的临床资料,各45例，均采用常规石蜡切片、苏木精-伊红染色、特殊染色，免疫组织化学染色和聚合酶链反应扩增方法对标本进行研究，观察真菌和幽门螺杆菌检出情况。结果胃癌组中，真菌检出26例，占57.8%，幽门螺杆菌检出34例，占75.6%；慢性萎缩性胃炎组中，真菌检出0例，幽门螺杆菌检出12例，占26.7%。两组幽门螺杆菌检出率和真菌检出率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论真菌、幽门螺杆菌感染均是诱发胃癌的致病菌。

关键词：胃癌；真菌；幽门螺杆菌感染；病理诊断

Pathological Studies in Gastric Cancer and Mould and Helicobacter Pylori Infection DetectionZHAOHui-ming.(DepartmentofPathology,ChaoyangHospitalofHuainan,Huainan232007,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the pathology of detection of the mould,Helicobacter pylori infection in gastric cancer.MethodsRetrospective analysis of clinical data of 45 cases of gastric cancer and 45 cases of chronic atrophic gastritis from Huainan Chaoyang Hospital during Jan.2010 and Jan.2013 was done,the specimen were all studied by paraffin sections,hematoxylin eosin staining,special staining,immunohistochemistry and polymerase chain reaction method,to observe the detection situation of the mould and Helicobacter pylori.ResuttsIn the gastric cancer group,the number of detected mould was 26 cases, the ratio was 57.8%,the number of detected Helicobacter pylori was 34 cases,the ratio was 75.6%;in chronic atrophic gastritis,the number of detected mould was 0,the number of detected Helicobacter pylori was 12 cases,the ratio was 26.7%.The Helicobacter pylori detection and mold detection rate of the two groups were statistically significantly different(P<0.05).ConclusionMould,Helicobacter pylori infection are both gastric cancer inducing pathogens.

Key words：Gastric cancer; Mould; Helicobacter pylori infection; Pathological diagnosis

收稿日期：2014-09-12修回日期：2014-12-19编辑：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.16.066

中图分类号：R447

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)16-3056-03