CCNB2在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

【摘要】 目的 统计结直肠癌中CCNB2的表达情况，分析结直肠癌中CCNB2阳性表达的临床意义。方法 随机选取2010年6月～2013年11月份我院在手术治疗中留取的结直肠癌病标本57例和癌旁正常组织标本49例，用免疫组化法检测CCNB2蛋白表达，用实时定量PCR法检测CCNB2 mRNA表达。结果 CCNB2蛋白阳性表达主要在细胞质，偶见于细胞核。结直肠癌组织中CCNB2 mRNA相对表达量（36.52±8.82）和CCNB2蛋白阳性表达率（86.21％）均显著高于癌旁正常组织，P<0.05，差异具有显著性。结论 CCNB2在结直肠癌组织呈高表达，有望作为诊断和预后的参考指标。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.04.005

工作单位：014000包头医学院第一附属医院普外二科

The Expressions of CCNB2 in Colorectal Cancer Tissue and Its Clinical Significance

WANG Xinghong General Surgery Department Ⅱ，The First Affiliated Hospital of Baotou Medical College in Inner Mongolia，Baotou 014000，China

【Abstract】

Objective To sum up the expressions of CCNB2 in colorectal cancer and to analyze its clinical significance of positive expression. Methods From June 2010 to November 2013，57 specimens of colorectal cancer were taken during the surgery and 49 specimens of adjacent normal tissue were taken. They were randomly selected as the objects in our hospital. CCNB2 protein expression was detected by immunohistochemical method CCNB2mRNA expression was detected by real-time quantitative PCR method. Results The positive expression of CCNB2 protein was mainly in the cytoplasm and occasionally in the nucleus. The relative expression value of CCNB2mRNA in colorectal cancer tissues was （36.52±8.82） and CCNB2 protein positive expression rate was （86.21％）. They were both significantly higher than that of adjacent normal tissues，P<0.05，the difference was significant. Conclusion In colorectal cancer tissues，CCNB2 showed high expressions，it is expected to become the early evaluation index of prognosis.

【Key words】Colorectal cancer，CCNB2，Immunohistochemistry

CCNB2 （Cyclin B2，细胞周期蛋白B2）作为细胞周期蛋白家族之一，不仅在恶性肿瘤组织中呈高水平阳性表达，并且与患者的病理特征、预后具有显著相关性 ［1］。为了给结直肠癌的诊断和预后评估提供借鉴，笔者对检测并分析了结直肠癌组织中CCNB2的阳性表达情况，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 组织来源

随机选择2010年6月～2013年11月份期间我院经手术切除治疗的57例结直肠癌患者共为研究对象，其中男性32例，女性25例，年龄27～70岁，平均年龄（57.59±6.41）岁，22例为结肠癌，35例为直肠癌，组织学分级结果为40例Ⅰ～Ⅱ级，17例Ⅲ级。在手术中共切取57例结直肠癌组织标本以及49例癌旁正常组织标本。病例入选标准：（1）临床相关资料完整，无缺漏；（2）患者知情同意；（3）术前均未采取放疗、化疗等其他干预措施。

1.2 研究方法

1.2.1 CCNB2 mRNA检测 组织置于研磨钵中马上加入液氮，迅速研成粉末状，应用TRIZOL依据说明书提取组织总RNA，利用酶标仪检测浓度和OD 值，再按将RNA 进行逆转录获得cDNA，行PCR反应。内参为GAPDH 和CCNB2引物。反应体系为10 μl，反应条件参数：95℃预变性30 s后，再95 ℃ 作用5 s，60℃作用30 s，共40个循环。检测CT 值并行2- ΔΔCT 法计算。

1.2.2 CCNB2蛋白免检测 标本在经过固定（中性甲醛溶液）、包埋（石蜡）处理后行常规切片，室温下添加3％ H2O2孵育20 min，封闭SOD，微波修复抗原，添加山羊血清和抗CCNB2抗体，放置在4℃中孵育24 h，滴加生物素标记羊抗鼠二抗，37℃下孵育60 min，辣根酶标记后37℃下再孵育30 min后进行DAB显色反应，再经苏木精复染、脱水以及透明处理后，用中性树胶进行封片，用显微镜进行观察和拍照。

1.3 结果判定

参照文献报道进行阳性结果评价 ［2］。细胞内见棕黄色颗粒为CCNB2阳性表达，无阳性颗粒表达为阴性。

1.4 统计学处理

实验数据统计学分析采用SPSS.14.0，计量资料用t检验分析，计数资料用χ 2检验分析，P<0.05，差异具有统计学意义。

2 结果

结直肠癌组织中CCNB2蛋白阳性表达共50例，阳性表达率为86.21％，CCNB2 mRNA相对表达量为36.52±8.82，癌旁正常组织中未见CCNB2蛋白阳性表达，CCNB2 mRNA相对表达量为11.42±3.21，两种检测结果比较，P<0.05，差异具有统计学意义。

3 讨论

CCNB2是B型细胞周期蛋白之一，在结直肠癌中，可与位于CNNB2启动子的DNA片断能够与NF-Y 亚基结合，调控激活CCNB2启动子活性。CCNB2表达水平上调能够加快细胞周期进程，从而促进肿瘤细胞异常增殖。相关研究证实 ［2］也CCNB2能够结合CDC2激酶，降低CCNB2表达能够促使细胞周期停滞，进而抑制肿瘤进展。本实验中，结直肠组织中可见CCNB2异常高表达，其CCNB2蛋白阳性表达率以及mRNA相对表达量均显著高于正常组织。综上所述，结直肠癌中CCNB2呈高表达，其对诊断和判断预后具有重要作用。