猪伪狂犬病病毒和猪副猪嗜血杆菌混合感染的诊断与防制

邵　军，张拥军（.新疆石河子大学实验动物中心，新疆石河子83000；.新疆生产建设兵团第七师畜牧兽医站，新疆奎屯83300）

猪伪狂犬病病毒和猪副猪嗜血杆菌混合感染的诊断与防制

邵军1，张拥军2
（1.新疆石河子大学实验动物中心，新疆石河子832000；2.新疆生产建设兵团第七师畜牧兽医站，新疆奎屯833200）

1　发病情况

2014年6月16日新疆奎屯市某猪场从石河子垦区某团猪场购进断奶仔猪180头，饲喂浓缩料，并在饲料中加入泔水，该猪群曾经做过猪瘟、圆环病毒灭活苗、链球菌蜂胶灭活苗和猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫，发病之前生长良好。8月25日该批猪发生咳嗽、呼吸困难、犬坐姿势、跛行、体温升高、流涎、呕吐，剖检：肺脏心叶、尖叶、膈叶均有大理石样的变化，肾脏表面有针尖大小的出血点，心包内有大量纤维素沉着物，呈现绒毛心，肝脏表面有针尖至拇指大小灰白色坏死灶、脑膜尤其是小脑呈现树枝状充血、岀血。畜主发现病情后应用华神联抗注射液（黄芪多糖）、头孢重病克注射液（头孢噻呋钠）、高热救牲（板蓝根）、青霉素、链霉素等药物进行治疗，均无疗效，8月30日前来我站就诊，经过流行病学、临床症状、实验室检验等综合确诊为猪伪狂犬病病毒和猪副猪嗜血杆菌混合感染，诊疗过程报告如下。

2　临床症状

患猪精神沉郁，食欲减退或废绝，体温在40.5℃～41.5℃之间，病猪喜欢扎堆，眼屎分泌物较多；呼吸困难，咳嗽，喘气，口吐白色泡沫，呈腹式呼吸，初期鼻孔流少量的黏性分泌物，后期鼻孔流脓性鼻液；严重的患猪出现呕吐，张口呼吸，犬坐姿势，肌肉震颤，四肢运动不协调，卧倒时呈游泳状；前肢腕关节或后肢跗关节发生肿胀，走路跛行,站立不稳;耳朵、颈部、腹部等处皮肤出现红紫色，尿液呈深黄色，拉羊粪蛋样的粪便。最后患猪因衰竭而死。发病数为108头，发病率为60%，死亡数为36头，死亡率为20%，病程为3～5 d。

3　病理剖检

共计剖检病死猪6头，肺脏水肿，肺脏心叶、尖叶、膈叶均有大理石样的变化，支气管内积有大量泡沫样的分泌物；心肌冠状沟附着米黄色胶冻样沉积物，心包内积有淡黄色的积液，心包内有大量纤维素沉着物，呈现绒毛心；肝脏表面有针尖至拇指大小灰白色坏死，胸膜表面有干酪样渗出物附着，肠系膜、腹膜等部位表面沉积大量的纤维素渗出物，盲肠和结肠粘连成团；脾脏肿大呈紫黑色；脑膜尤其是小脑呈现树枝状充血、岀血；肾脏肿大，色苍白，表面有针尖大小的出血点；关节腔内有少量的积液；其他脏器均有不同程度的败血症变化。

4　实验室检验

4.1涂片镜检无菌操作取心包膜渗出物、关节腔渗出物、肺、脾脏进行涂片，革兰染色，镜检可见到少量革兰阴性短小杆菌、短丝状细菌。

4.2细菌分离培养取病猪的心包膜渗出物、肺、关节腔渗出物分别接种于血液琼脂平板,经37℃培养48 h后，可见边缘整齐、圆形、扁平、灰白色、半透明不溶血的小菌落，将此菌涂片镜检，形态及染色特征与直接涂片一致。

4.3生化试验将细菌纯化培养后，分别接种生化培养基，结果表明，该菌能发酵葡萄糖，不发酵乳糖和甘露醇，M.R.、V-P、醋酸铅试验阴性，硝酸盐还原试验阳性。证明是副猪嗜血杆菌。

4.4药敏试验将细菌纯培养物接种于高压巧克力琼脂平板，选用含有头孢噻呋钠、阿莫西林、丁胺卡那霉素、庆大霉素、林可霉素、青霉素、氟苯尼考等药物纸片进行体外药敏试验（药敏纸片由杭州天和微生物试剂有限公司生产，批号为20140202），37℃培养48 h结果，该菌对阿莫西林、氟苯尼考高敏；对丁胺卡那霉素、头孢噻呋钠中敏；对庆大霉素、林可霉素、青霉素低敏。

4.5血清学检测采集10头份病猪的血液，经3 000 r/min离心3 min，分离出血清，使用猪伪狂犬乳胶凝集试剂盒（由武汉科前动物生物制品有限公司生产，批号为20140108），结果为阳性8头，阳性率为80%（8/10）。

4.6动物试验采取乳胶凝集试验阳性的病猪脑在无菌条件下研磨成糊状，再加入青霉素80万IU/ mL、链霉素100万μg/mL及5倍量灭菌生理盐水，置4℃冰箱24 h。以4 000 r/min离心沉淀10 min，取其上清液，颈部皮下注射健康家兔5只，每只4 mL，注射15 h后，3只兔子开始啃咬注射部位，并出现兴奋不安的神经症状，最后均表现角弓反张，抽搐而死。

5　诊断

根据发病情况、临床症状、病例剖检、实验室检验，确诊该病为猪伪狂犬病病毒和猪副猪嗜血杆菌混合感染。

6　防制措施

6.1深埋死猪，隔离病猪，用2%全无敌﹙山东德州神牛动物药业生产，主要成分为戊二醛﹚按1∶500比例喷雾消毒，连用14 d，加强灭鼠工作，杜绝饲喂泔水。

6.2全群紧急注射猪伪狂犬活疫苗﹙武汉科前动物生物制品有限公司生产，批号为140425，含猪伪狂犬病病毒（HB-98株）双基因缺失株，每头2 mL。间隔一周全群注射副猪嗜血杆菌灭活疫苗﹙武汉科前动物生物制品有限公司生产，批号为140218﹚，每头猪2 mL。

6.3注射猪伪狂犬活疫苗24 h后，饲料中加入10%氟苯尼考、10%黄芪多糖粉和多种维生素，连用7 d。6.4注苗24 h后，对患病猪应用毒喘至尊注射液（阿莫西林）和神奇注射液（氟苯尼考），分别肌肉注射，每日1次。连用5 d。采取以上措施，经过5 d，全群恢复正常。

7　讨论

7.1病因分析饲喂的泔水未加消毒，直接与饲料混在一起,病原有可能由此带入猪场，另一方面猪场内老鼠较多，也有可能携带病原传入猪场。该场未严格消毒，外来人员自由出入，也有可能携带病原传入。副猪嗜血杆菌是猪的常在菌，各种应激因素均可诱发和促进本病的发生和流行。猪伪狂犬病病毒可能造成该批育肥猪机体抵抗力下降给副猪嗜血杆菌病提供发病的条件，该猪场饲养密度大，空气流动性差，两种病原均是通过咳嗽、喷嚏等主要方式传播该病，造成发病率较高，临床症状较为严重。

7.2猪伪狂犬病的推荐免疫程序猪伪狂犬病抗体阴性仔猪，在出生后1周内滴鼻或肌肉注射免疫；具有猪伪狂犬病母源抗体的仔猪在45日龄左右肌肉注射，每头份2 mL，每6个月注苗1次。经产母猪，每4个月免疫1次。后备母猪6月龄左右肌肉注射1次，间隔1个月后加强免疫1次，产前1个月左右再免疫1次。种公猪每年春、秋两季各免疫1次。

猪副猪嗜血杆菌病的推荐免疫程序：种公猪每半年接种1次，后备母猪在产前8～9周龄首免，3周后二免，以后每胎产前4～5周龄免疫1次。仔猪在14日龄首免，3周后二免，每次肌肉注射1头份，免疫剂量为2 mL/头份，不论猪只大小。