慢性心力衰竭患者外周血Vδ1T细胞数量及功能变化

慢性心力衰竭患者外周血Vδ1 T细胞数量及功能变化

郭文安陈津瀚易志刚

(厦门大学附属第一医院干部病房，福建厦门361001)

摘要〔〕目的观察慢性心力衰竭(CHF)患者外周血Vδ1 T细胞数量和功能的改变，探讨Vδ1 T细胞在CHF发病中的作用。方法选取2012年3月至2013年12月在该院入住的CHF患者50例及同期入院进行健康体检者50例，抽取CHF患者及健康对照(HC)者外周静脉血10 ml。采用流式细胞术测定其外周血Vδ1 T细胞比例及Vδ1 T细胞表面Foxp3表达情况。采用CFSE染色方法检测Vδ1 T细胞对CD4 T细胞增殖能力的影响。采用流式细胞术测定Vδ1 T细胞与CD4 T细胞共孵育后对CD4 T细胞分泌IFN-γ及TNF-α能力的影响。结果CHF患者外周血Vδ1 T细胞数量〔(1.59±0.77)%〕与HC〔(1.41±0.344)%〕相比无统计学差异(P>0.05)。与HC外周血Vδ1 T细胞表面Foxp3表达水平〔(19.82±2.46)%〕相比，CHF组Foxp3表达水平〔(1.23±0.86)%〕显著降低(P<0.05)。HC外周血Vδ1 T细胞可显著抑制CD4 T细胞增殖和IFN-γ及TNF-α分泌能力，而CHF患者外周血Vδ1 T细胞不具有此功能。结论CHF患者外周血Vδ1 T细胞功能丧失，致使外周血CD4 T细胞增殖和分泌IFN-γ及TNF-α能力增强，CHF患者免疫功能的这种改变可能与CHF的发生相关。

关键词〔〕慢性心衰；Vδ1 T细胞；细胞因子

中图分类号〔〕R54〔文献标识码〕A〔

第一作者：郭文安(1978-)，男，主治医师，硕士，主要从事心血管内科研究。

慢性心衰(CHF)发病机制目前存在多种学说，而越来越多的研究表明免疫系统过度激活在CHF的发病中具有重要作用〔1，2〕。调节性T细胞(Treg)目前研究较多的是CD4 Treg，已有文献证实CD4 Treg数量和功能异常与CHF发病密切相关〔3，4〕。然而，除外CD4 Treg，外周血中还存在多种具有免疫抑制功能的调节性细胞，例如调节性B细胞、调节性DC细胞和Vδ1 T细胞等〔5～7〕。Vδ1 T细胞是近年来被证实具有免疫抑制功能的一种T细胞〔7〕。目前关于Vδ1 T细胞在CHF中的作用还未见报道。本研究观察CHF患者外周血Vδ1 T细胞数量和功能的改变。

1材料与方法

1.1临床资料收集2012年3月至2013年12月在我院干部病房入住的CHF患者50例及同期入院进行健康体检者50例。CHF患者中，男26例，女24例；平均年龄(66.27±9.26)岁；50例患者中缺血性心脏病(IHD)25例，非缺血性心脏病(NIHD)25例。健康对照(HC)组中，男25例，女25例；平均年龄(65.94±9.59)岁。

1.2外周血单个核细胞(PBMC)分离方法无菌采集的抗凝血按1∶1的比例缓缓加入已预加淋巴细胞分离液的15 ml离心管中，800 r/min离心18 min；滴管吸取白膜层，加入装有10 ml无血清RPMI1640培养基的15 ml离心管中，600 r/min离心15 min；细胞沉淀以10 ml无血清RPMI 1640培养基重悬，400 r/min离心8 min；再用1 ml含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基将细胞沉淀重悬，台盼蓝染色计数后制备成浓度为2×106个/ml的细胞悬液。

1.3外周血Vδ1 T细胞比例测定无菌分选获取的PBMC以含1%BSA 的PBS洗涤2次后，加入相应荧光抗体(CD3、TCR Vδ1)，4℃避光孵育30 min；以含1%BSA 的PBS洗涤2次后，细胞重悬于0.1 ml 1%多聚甲醛固定液中待流式细胞仪检测。

1.4Vδ1 T细胞表面Foxp3表达检测无菌分选获取的PBMC以含1%BSA 的PBS洗涤2次后，加入相应荧光抗体(CD3、TCR Vδ1)，4℃避光孵育30 min；以含1%BSA的PBS洗涤2次后加入0.5 ml细胞膜固定透化液重悬细胞，室温避光30 min；以透化液洗涤细胞2次后加入相应荧光抗体(Foxp3)，室温避光30 min；以透化液洗涤细胞2次，细胞重悬于0.2 ml 1%多聚甲醛固定液中待流式细胞仪检测。

1.5统计学处理采用SPSS16.0软件行t检验。

2结果

2.1CHF患者和HC组外周血Vδ1 T细胞比例变化情况HC组外周血Vδ1 T细胞比例为(1.41±0.344)%，与CHF组患者〔(1.59±0.77)%〕比较无统计学差异(P>0.05)。

2.2CHF患者和HC组外周血Vδ1 T细胞表面Foxp3表达水平检测HC组外周血Foxp3阳性Vδ1 T细胞比例为(19.82±2.46)%比较与CHF〔(1.23±0.86)%〕，差异无统计学意义(P<0.01)。

2.3Vδ1 T细胞抑制CD4+T细胞增殖能力检测HC组外周血Vδ1 T细胞可显著抑制自体来源的CD4+T细胞的增殖能力(25.8%vs94.4%)，而CHF外周血Vδ1 T细胞对自体来源的CD4+T细胞增殖能力无显著抑制作用(93.2%vs94.9%)。

2.4Vδ1 T细胞抑制CD4+T细胞因子分泌能力检测CHF患者外周血IFN-γ+ CD4+T细胞比例(34.1%)及TNF-α+ CD4 T细胞比例(33.7%)在与自体来源外周血Vδ1 T细胞共孵育后无明显变化(31.1%，32.9%)(P>0.05)；HC组患者外周血IFN-γ+ CD4+T细胞比例(20.1%)在与自体来源外周血Vδ1 T细胞共孵育后显著降低(5.5%)(P<0.01)。

3讨论

CHF发病机制目前主要有神经内分泌紊乱机制、氧化应激机制和心肌细胞凋亡机制等。然而，近年来研究发现免疫系统过度激活在CHF的发病中具有重要的作用〔2〕。Treg是具有免疫抑制功能的一群细胞，在维持机体免疫功能平衡中具有重要的作用。焦海春等〔1〕研究显示，在CHF患者中，CD4+Treg功能存在明显的异常，从而导致CD4+Treg对CD4效应T细胞失去抑制作用，致使机体Th1细胞介导的细胞免疫应答增强，从而导致CHF发生。

本研究结果显示，HC外周血Vδ1 T细胞可显著抑制CD4 T细胞增殖和IFN-γ及TNF-α分泌能力，而CHF患者外周血Vδ1 T细胞不具有此功能。提示CHF患者外周血Vδ1 T细胞免疫抑制功能是显著降低的。

4参考文献

1焦海春，张俊威，崔彦芬.慢性心衰患者Th1与Th2型细胞及Treg细胞的表达〔J〕.西部医学，2014;26(3)：347-9.

2Torre-Amione G，Anker SD，Bourge RC，etal.Results of a non-specific immunomodulation therapy in chronic heart failure(ACCLAIM trial)：a placebo-controlled randomized trial〔J〕.Lancet，2008;371(9608)：228-36.

3Zhang Q，Hu LQ，Yin CS，etal.Catechin ameliorates cardiac dysfunction in rats with chronic heart failure by regulating the balance between Th17 and Treg cells〔J〕.Inflamm Res，2014;63(8)：619-28.

4Li N，Bian H，Zhang J，etal.The Th17/Treg imbalance exists in patients with heart failure with normal ejection fraction and heart failure with reduced ejection fraction〔J〕.Clin Chim Acta，2010;411(23-24)：1963-8.

5Wei Y，Zheng D，Li X，etal.Infusion of dendritic cells carrying donor lymphocytes treated with 8-methoxypsoralen and ultraviolet a light induces CD19(+)IL-10(+) regulatory B cells and promotes skin allograft Survival〔J〕.Transplant Proc，2014;46(10)：3641-6.

6Li Q，Guo Z，Xu X，etal.Pulmonary stromal cells induce the generation of regulatory DC attenuating T-cell-mediated lung inflammation〔J〕.Eur J Immunol，2008;38(10)：2751-61.

7Peng G，Wang HY，Peng W，etal.Tumor-infiltrating gammadelta T cells suppress T and dendritic cell function via mechanisms controlled by a unique toll-like receptor signaling pathway〔J〕.Immunity，2007;27(2)：334-48.

〔2014-09-11修回〕

(编辑徐杰)