酶联免疫斑点试验与抗结核抗体平行检测菌阴性结核比较

酶联免疫斑点试验与抗结核抗体平行检测菌阴性结核比较

袁海波竭晶赵丹李丹

(吉林大学第一医院呼吸内科，吉林长春130021)

摘要〔〕目的比较结核感染T斑点试验(T SPOT.TB)和结核抗体试验在菌阴性结核诊断中的敏感性和特异性以及应用价值。方法对疑患菌阴性结核的290例患者进行前瞻性研究。收集患者临床资料，采用T SPOT.TB和结核抗体试验进行结核病的诊断，比较二者对结核病诊断的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果290例疑患结核病患者最终确诊结核119例。T SPOT.TB试验在敏感性、特异性、NPV、PPV等方面显著优于抗结核抗体试验(P<0.05)。结论T SOPT.TB较结核抗体有更高的灵敏性和特异性，更适于作为结核病的筛检试验。

关键词〔〕酶联免疫斑点试验；抗结核抗体试验；结核；诊断

中图分类号〔〕R446.61〔文献标识码〕A〔

基金项目：国家自然科学基金资助课题(81300062)

通讯作者：李丹(1978-)，女，副教授，主要从事呼吸系统疾病研究。

第一作者：袁海波(1976-)，女，主治医师，主要从事睡眠呼吸疾病方面的研究。

快速诊断和治疗是控制结核病的关键。结核病诊断的金标准是在胸水、痰或其他临床标本中找到结核分枝杆菌。但由于抗酸染色的敏感性和特异性差、结核菌培养时间长，限制了其在临床上的广泛应用。酶联免疫斑点试验(ELISPOT)采用的结核分枝杆菌特异性抗原为早期分泌原靶蛋白6(ESAT-6)或培养滤液蛋白10(CFP)-10，其编码基因RDI为卡介苗(BCG)和绝大多数非结核分枝杆菌所缺失，避免了结核菌素试验(PPD)出现的交叉反应，这种方法无论在敏感性还是特异性发面均得到了极大的认可〔2〕。本研究比较ELISPOT与抗结核抗体试验对菌阴肺结核的诊断价值。

1对象与方法

1.1对象2011年7月至2012年8月吉林大学第一医院呼吸科疑诊或待排除结核患者290例，年龄55～76〔平均(62.78)〕岁。所有患者均有反复咳嗽、咳痰伴发热等临床症状，有肺部感染的影像学表现，3次痰涂片未找到抗酸杆菌且二次痰培养均阴性。在其他详尽检查基础上同时进行酶联免疫斑点试验与抗结核抗体试验。根据检测结果综合判断分析，对疑为菌阴患者给予实验性抗结核治疗。根据最终治疗和随访结果，进行最终确诊。诊断标准： (1)典型肺结核临床症状和胸部X线表现；(2)抗结核治疗有效；(3)临床可排除其他非结核性肺疾病；(4)PPD强阳性，血清抗结核抗体阳性；(5)肺外组织病理证实结核病变；(6)BALF检出抗酸分枝杆菌；(7)支气管或肺组织病理证实结核病变；符合(1)～(5)的三项或(6)、(7)任意一项即可确诊。

1.2方法采集疑为菌阴肺结核的290例患者既往结合病史和结核病接触史的资料；进行肺部CT检查、PPD实验、抗结核抗体实验、痰涂片、痰培养等检查。结核感染T斑点试验(T SPOT.TB)，使用肝素抗凝管采集受检者静脉血6 ml，加入Ficoll 淋巴细胞分离液后离心分离单核淋巴细胞，制备的淋巴细胞经过计数后使用T SPOT.TB诊断试剂盒(试剂盒来自英国Oxford Immunotec Limited公司)进行检测，检测方法与结果判读严格按照试剂盒说明书进行。

1.3统计学方法应用SPSS17.0软件行χ2检验。

2结果

2.1一般情况依据分组标准，综合患者临床表现、实验室检查及随访结果最终诊断肺结核患者119例，其中经病理学证实伴有其他部位结核感染者5例，无细菌学或结核分枝杆菌感染证据但最终通过诊断性抗结核治疗痊愈的患者114例。最终诊断为非结核呼吸道疾病171例，其中有其他病理学诊断证据者15例；无其他细菌学或病理学证据，但通过抗结核治疗以外的其他方法获得痊愈患者156例，其中慢性支气管扩张37例，间质性肺炎4例，慢性阻塞性肺疾病4例，肺炎111例。

2.2T SPOT TB试验与最终诊断结果的比较最终诊断为结核的119例患者T SPOT TB试验的灵敏度为93.28%(111/119)，特异度为83.04%(142/171)，假阳性率为20.71%(29/140)，假阴性率为5.33%(8/150)。

2.3抗结核抗体试验与最终诊断结果的比较血清结核抗体试验的灵敏度为23.53%(28/119)，特异度为91.2%(151/171)，假阳性率为34.89%(15/43)，假阴性率为36.84%(91/247)。

2.4评价二种检测方法在结核病中的诊断价值T SPOT TB试验的阳性预测值为79.28%(111/140),阴性预测值为94.67%(142/150)；血清结核抗体试验的阳性预测值为65.12%(15/43),阴性预测值为63.16%(156/247)。T SPOT TB试验阳性预测值和阴性预测值与抗结核抗体检测方法比较差异显著(P<0.05)。

3讨论

许多结核病患者没有特异的临床表现和影像学特征，因此，早期的实验室诊断和早期治疗是改善结核病患者预后的关键，也是控制结核病传播的重要环节。细菌学检查是诊断结核的金标准，但是由于该技术的敏感性限制，临床患者中细菌学阳性不超过40%〔2〕，难以满足结核病临床诊断的要求。目前临床上应用比较广泛的实验室诊断方法有结核IgG抗体血清检测、PPD试验、ELISHOT。由于PPD试验对曾经感染过结核现已痊愈的人群和接种过BCG的人群仍有阳性表现，中国有近一半的人口曾感染过结核，故可导致大量人群PPD试验出现假阳性〔3,4〕。因此，成年疑似结核病患者临床上主要还是采用结核抗体检测试验和ELISPOT。

本实验T SPOT TB假阳性的出现、特异性及阳性预测值相对较低，与其不能区分活动性、陈旧性结核及结核潜伏感染相关〔5〕，本研究中的29例T SPOT TB假阳性患者，其中有5例曾经感染过结核，2例有结核病接触史，考虑与此相关。

对痰菌阴性的肺结核患者研究发现〔5〕，这类患者运用PPD试验以及血清结核抗体诊断其阳性率较低，容易出现实验室检查的漏诊，其阳性率低的主要原因与患者抗体抗原反应相对延缓以及结核分枝杆菌的抗原具有较为广泛的交叉反应有关。而且免疫功能较弱或者服用免疫抑制剂的患者抗体含量的水平较低，容易出现漏诊。本实验的研究结果同样显示结核抗体试验的灵敏度极低，分析其原因：(1)就诊于我院患者平均年龄比较大，老年人免疫系统功能退化，免疫应答能力下降；(2)免疫抑制剂广泛使用，糖尿病、HIV等免疫抑制性疾病的人群数量不断增长。但是ELISPOT的灵敏度显著高于结核抗体检测试验，表明对于自身免疫功能退化的中老年人和合并一些自身免疫系统疾病的结核病患者，ELISPOT的灵敏度明显优于血清结核抗体实验。

综上所述，ELISPOT的阴性预测值和阳性预测值均显著高于结核抗体检测试验，与现有的临床上常用的诊断方法比较具有明显的优势，在结核病的诊断中有重要的价值。

4参考文献

1Wang L,Zhang H,Ruan Y,etal.Tuberculosis prevalence in china,1990～2010;a Longitudinal analysis of national survey data〔J〕.Lancet,2014;383(9934):2057-64.

2Dinnes J，Decks J，Kunst H，etal.A systematic review of rapid diagnostic tests for the detection of tuberculosis infection〔J〕.Health Technol Assess，2007;11(3)：191-6.

3Long Q，Li Y，Wang Y，etal.Barriers to accessing TB diagnosis for rural-to-urban migrants with chronic cough in Chongqing，China：a mixed methods study〔J〕.BMC Health Serv Res，2008;2(8)：202-3.

4Kim HJ,Yoon HI,Park KU,etal.The impact of previous tuberculosis history on T-SPOT.TB(R) interferon-gamma release assay results〔J〕.Int J Tuberc Lung Dis,2011;15(4):510-6.

〔2014-10-11修回〕

(编辑袁左鸣)