背部推拿疗法对机体不同组织免疫网络介质β-内啡肽含量的影响

尚　坤　伍颖慧　农云凤　申　静　张　野　于馨博　包楠楠　杨寄渝　吴　萌　李　亚　张　欣

(长春中医药大学，吉林　长春　130117)



背部推拿疗法对机体不同组织免疫网络介质β-内啡肽含量的影响

尚坤伍颖慧农云凤申静张野于馨博包楠楠杨寄渝吴萌李亚张欣

(长春中医药大学，吉林长春130117)

摘要〔〕目的观察在免疫抑制家兔背部开展推拿疗法对机体不同组织免疫网络介质β-内啡肽(EP)含量的影响。方法将21只家兔随机平均分为空白组、模型组和推拿组，采用腹腔注射环磷酰胺的方法造模，观察各组动物下丘脑、血浆、淋巴组织β-EP含量的变化。结果模型组、推拿组下丘脑组织β-EP的含量增加，与空白组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)；与模型组比较，推拿组下丘脑组织β-EP的含量增加(P<0.05)。模型组、推拿组血浆β-EP的含量降低，与空白组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)；推拿组与模型组比较，血浆β-EP的含量降低(P<0.05)。模型组、推拿组淋巴组织β-EP的含量降低，与空白组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)；推拿组与模型组比较，淋巴组织β-EP的含量增加(P<0.01)。结论背部推拿疗法提高机体免疫功能的可能机制之一是能够有效促进机体免疫网络介导物质β-EP的合成、分泌与分布，从而发挥其预防疾病、保健身体的作用。

关键词〔〕推拿；免疫介质；β-EP

第一作者：尚坤(1978-)，女，副教授，硕士生导师，主要从事中医药治疗心脑血管疾病的临床与机制研究。

本课题组前期的实验研究表明，背部推拿疗法对免疫抑制家兔的局部免疫功能具有良好的调节作用，能够有效提高实验动物的胸腺指数、脾脏指数和局部MHC-Ⅱ、白介素(IL)-12含量〔1〕。然而，背部推拿疗法改善机体免疫功能的作用途径与调控机制尚不明确。本课题组从神经肽β-内啡肽(β-EP)在免疫应答中的功能入手，立足于“β-EP是机体神经-内分泌-免疫网络介质”的理论，提出了“推拿疗法能够增强机体合成β-EP并促进其分布至外周免疫组织从而发挥免疫功能”的假说，并以免疫力低下的亚急性衰老家兔模型为实验对象，以推拿手法刺激背部足太阳膀胱经等为主要干预手段，观察家兔下丘脑组织、血浆以及外周淋巴组织β-EP含量的变化情况，对此假说进行初步的论证。

1材料与方法

1.1动物、实验药品与仪器由长春中医药大学实验动物中心提供纯种新西兰大耳家兔21只，兔龄4个月，体重(1 948±230)g。按随机数字表法分为空白组、模型组、推拿组，每组7只。环磷酰胺注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司)、推拿手法测定仪(TAP-Ⅱ型，上海益联医学发展有限公司)、超净工作台(苏州净化设备厂)、电热恒温水浴箱(北京市医疗设备厂)以及低温离心机(北京时代北利离心机有限公司)。

1.2方法

1.2.1实验动物的处理模型组、推拿组的动物采用腹腔注射环磷酰胺的方法造模。以29.6 mg·kg-1·d-1的标准计算每日的注射量，连续腹腔注射4次，隔日1次。空白组动物腹腔注射等量生理盐水，连续开展腹腔注射4次，隔日1次。推拿组动物造模结束后第二天开始每天进行推拿手法刺激，推拿时家兔不做固定处理。空白组动物每天抓取1次，不做其他处理。

1.2.2推拿方法(1)操作部位：实验动物背部脊柱两侧足太阳膀胱经的循行路线，从肺俞穴至肾俞穴之间段(穴位选取按《实验针灸学》〔2〕定位)。(2)操作方法：①按揉法：以拇指指腹为着力点，在家兔相应操作部位上由头颈部至尾部施以按揉法，手法力量经推拿手法测试仪测定约为0.5 kg，操作时间5 min；②推法：以拇指指腹为着力点，在家兔相应操作部位由头颈部至尾部施以推法，手法力量经推拿手法测试仪测定约为0.5 kg，操作时间5 min；③捏脊法：以双手拇指、食指指端夹持家兔背部相应操作部位的皮毛及皮下组织，由尾部至头颈部施以捏脊法，反复操作10遍。上述推拿方法每天操作1次，每次15 min，连续操作21 d。

1.2.3样本处理及检测指标最后一次推拿结束后第二天，于超净工作台处置实验动物。将各组动物固定后，抽取静脉血，注入加有抗凝剂、抑肽酶的试管中，离心低温保存备用；然后将实验动物断头，迅速开颅，无菌摘取实验动物颅内下丘脑组织；同时摘取实验动物外周淋巴组织，迅速用锡纸包裹投入液氮罐保存备用。检测各组实验动物下丘脑、血浆及外周淋巴组织β-EP含量。

1.3统计学处理采用SPSS15.0统计软件包进行单因素方差分析(OneWay-ANOVA)、Q检验(Newan-keuls法)。

2结果

模型组〔(25.96±2.38)pg/mg〕、推拿组〔(29.54±6.13)pg/ml〕与空白组〔(22.32±4.15)pg/mg〕比较，实验动物下丘脑组织β-EP的含量增加(P<0.05，P<0.01)；推拿组与模型组比较，实验动物下丘脑组织β-EP的含量增加(P<0.05)。模型组〔(92.46±26.47)pg/ml〕、推拿组〔(66.88±16.37)pg/ml〕与空白组〔(154.54±41.28)pg/ml〕比较，实验动物血浆β-EP的含量降低(P<0.05，P<0.01)；推拿组与模型组比较，实验动物血浆β-EP的含量降低(P<0.05)。模型组〔(6.36±3.65)pg/ml〕、推拿组〔(17.61±7.7)pg/ml〕与空白组〔(23.80±8.11)pg/ml〕比较，实验动物淋巴组织β-EP的含量降低(P<0.05，P<0.01)；推拿组与模型组比较，实验动物淋巴组织β-EP的含量增加(P<0.01)。

3讨论

大量的临床与实验研究均表明，推拿疗法能够有效调整机体的免疫功能〔3～5〕。足太阳膀胱经在人体十二经脉中分布最长最广，是人体的藩篱。中医理论认为，太阳为诸阳之首，在三阳经中阳气最盛；同时，足太阳膀胱经背部循行路线上分布着肺俞、心俞、肝俞、脾俞、肾俞等背俞穴，是五脏六腑之气输注于体表的位置，具有良好的调节五脏功能、改善正气盛衰的作用。

β-EP是机体免疫网络共同的介导物质之一，是已被公认为具有较强免疫调节作用的活性肽之一，参与机体的细胞免疫，在免疫学学研究中是一个有价值的指标〔6〕。β-EP主要在机体的下丘脑弓状核和脑垂体中叶合成分泌，并通过血液循环系统运输〔7〕。本研究采用腹腔注射环磷酰胺的方法制造免疫功能低下的动物模型，对于实验动物而言属于一种劣性应激，在使实验动物免疫功能低下的同时，也会激活其交感神经系统和下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴，导致其下丘脑组织中β-EP含量有所增加，这正解释了模型组动物下丘脑组织β-EP含量反而高于空白组的原因。背部推拿疗法能够有效刺激实验动物下丘脑组织合成β-EP，使其含量增加，并分泌进入血液循环系统。但本研究模型组、推拿组实验动物血浆β-EP含量反而降低，而空白组和推拿组实验动物淋巴组织中β-EP含量增加，这说明背部推拿疗法不但能够促进机体β-EP的合成，还能够有效调节机体β-EP的分布，促进血浆中β-EP进入机体淋巴组织尽快发挥免疫作用，这与部分报道的实验研究结果相吻合〔8〕。

本研究结果表明，背部推拿疗法提高机体免疫功能的可能机制之一是能够有效促进机体免疫网络介导物质β-EP的合成、分泌与分布，从而发挥其预防疾病、保健身体的作用。

参考文献4

1张欣,刘明军,尚坤,等.基于“皮部”理论的推拿疗法对家兔免疫功能调节作用的研究〔J〕.中华中医药杂志,2014；29(5)：1421-3.

2余曙光,郭义.实验针灸学〔M〕.上海：上海科技出版社,2014：563.

3于娟.推拿肾俞穴治疗老年肾虚腰痛免疫机制研究〔J〕.山东中医杂志,2004;23(4)：214-6.

4詹强.足部反射区推拿对白细胞介素-1β水平的影响〔J〕.浙江中西医结合杂志,2004;14(3)：138-42.

5连宝领,陈斌,朱鼎成,等.背腰部保健推拿对老年人免疫功能的影响〔J〕.按摩与导引,2002;18(6)：8-11.

6李焰,杨小燕,黄其春,等.银杏叶复方对脾虚证小鼠细胞因子、免疫球蛋白和血浆内几种神经肽含量的影响〔J〕.东北农业大学学报,2012;43(6)：82-5.

7张缨.β-内啡肽的免疫调节作用与运动〔J〕.中国运动医学杂志,2003;22(6)：597-9.

8王霞,周江睿,蒋春雷.神经肽的免疫调节作用〔J〕.现代生物医学进展,2012;26(12)：5189-91.

〔2014-11-19修回〕

(编辑李相军)

The influence of Tuina therapy on the content of β-EP in different body tissues

SHANG Kun, WU Ying-Hui, NONG Yun-Feng,etal.

Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117, Jilin, China

【Abstract】ObjectiveTo observe the influence of Tuina therapy on the back to the content ofβ-EP in different body tissues of immune suppression rabbits.Methods21 rabbits were randomly divided into blank, model and tuina groups. The peritoneal injection of cyclophosphamide was used to prepare the immunosuppressive rabbit．The contents of β-EP in the hypothalamus, plasma and lymphoid tissue were observed．ResultsThe contents ofβ-EP in the hypothalamus of model and tuina groups were higher than those of control group(P<0.05，P<0.01). The content ofβ-EP in the hypothalamus of tuina group was higher than that of model group(P<0.05); The contents of β-EP in plasma of model and tuina groups were lower than those of control group(P<0.05，P<0.01),the content of β-EP in plasma of tuina group was lower than that of model group(P<0.05); The contents of β-EP in lymphoid tissue of model and tuina groups were lower than those of control group(P<0.05，P<0.01),the content of β-EP in lymphoid tissue of tuina group was higher than that of model group(P<0.05).ConclusionsTuina therapy could promote the synthesis, secretion and distribution of β-EP to play the role of physical health and disease prevention.

【Key words】Tuina; Immune medium; β-EP

通讯作者：张欣(1976-)，男，副教授，博士，在站博士后，硕士生导师，主要从事中医手法治未病的临床与机制研究。

基金项目：国家自然科学基金项目(No.81273867);吉林省科技厅基金项目(No.20130101137JC);长春中医药大学SRT计划项目(No.2013-14)

中图分类号〔〕R2〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)23-6683-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.017