液质联用技术在中药复方研究中的应用

王莹杜静

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液质联用技术在中药复方研究中的应用

王莹杜静

液质联用；中药复方；应用进展

中药复方包含中医药医理、思辨和配伍规律，是中医临床用药的精髓。中药复方临床疗效来源于其内在物质基础，研究中药复方的药效物质基础，可以进一步阐释中医药理论，明确中药复方的配伍规律和作用机制。液质联用技术不仅拥有液相色谱的优越分离能力和检测灵敏度，还拥有质谱的高选择性和强大的定性专属性，被广泛应用于中药复方成分的结构鉴定、含量测定及体内代谢等诸多方面。本文对液质联用技术在中药复方研究中的应用进行综述。

1 液质联用技术在中药复方结构鉴定中的应用

液质联用技术具有强大的分离能力和结构鉴定特点，通过对已知同类化合物的质谱裂解规律以及未知化合物质谱信息的分析，再参考未知成分的保留时间、紫外光谱等信息，可实现对未知化合物的结构进行合理推测[1-2]。汪祺等[3]采用LC-MS联用仪通过比较五味子中间体及8家企业生产的生脉注射液样品发现，五味子中间体的主要成分为木脂素类，并建立生脉注射液中木脂素类成分的分析方法。Wang等[4]运用LC-ESI-MSn根据相对分子量信息和多级质谱碎片信息从复方龙胆泻肝汤中分离鉴定了51个黄酮类化合物，并对主要成分的质谱裂解行为进行了研究。Zheng等[5]运用UPLC-ESI-QTOF-MS从中药复方温脾汤中鉴定出59个化合物，这些化合物主要为酚类、三萜皂苷、生物碱和黄酮苷四大类化合物。张靖等[6]采用UPLC-LTQ-MS定性分析方法比较了复方三芪口服液与黄芪及三七单味药质谱数据库，对组方质谱图中39个主要成分峰进行了快速鉴别，为该组方活性成分的体内外快速分析研究提供实验依据。

2 液质联用技术在中药复方含量测定分析中的应用

液质联用技术高灵敏度、高选择性的优点非常适合对中药复方中化学成分进行定量分析。中药复方的定量分析多采用液相与单重四级杆（LC/MS）或液相与三重四级杆（LC/MS/MS）联用技术，通过选择离子检测（SIM）、选择反应监测（SRM）或多反应监测（MRM）等模式同时定量测定多种化学成分[1-2]。Chang等[7]建立了一种能快速准确同时定量测定中药复方生脉散中包括人参中的皂苷及五味子中的木脂素成分的8个活性成分的HPLC-MS分析方法，该法简单、灵敏、准确、快速，有利于进一步完善复方生脉散质量控制研究。Wang等[8]对葛根芩连片中的葛根素、盐酸小檗碱和黄芩苷三种化学成分进行了含量测定，建立了一种简单快速、重复性好的UPLC-ESIMS（SIM）方法。张艺竹等[9]采用液相-质谱联用技术对中药复方制剂参甘冠心合剂中异甘草苷、毛蕊花糖苷、芍药苷、阿魏酸等11种有效成分同时定量测定，为该方剂疗效物质基础的确定提供了科学依据。

3 液质联用技术在中药复方药物代谢研究中的应用

中药复方有效成分复杂，真正产生药理作用的可能是单个组分，也可能是多个组分，或者是各组分相互作用产生的新物质，利用液质联用技术，不仅可以避免复杂、烦琐、耗时的分离纯化样品工作，而且能分离鉴定过去难以检测到的痕量药物代谢产物。由于药物的代谢产物往往保持着原药的母核结构，因此原药与其代谢产物具有相似的质谱碎裂过程和特征碎片离子，可以据此来推断代谢物的结构[10]。因此，液质联用技术在中药复方药物代谢研究方面具有广阔的前景。Deng等[11]研究大鼠灌服清火通窍片后血浆中的化学成分，并建立同时定量测定血浆中三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及淫羊藿苷五种成分的分析方法；Wang等[12]建立了一种UPLC/Q-TOF-MS/MS方法，大鼠在灌服茵陈蒿汤后，血浆中检测到21个色谱峰，经过鉴定推测其中2个为代谢产物；左冉等[13]采用LC-ICR-MS法深入研究黄连解毒汤体内发挥药效的作用的物质基础，通过与黄连解毒汤提取物和混合对照品的保留时间和高分辨质谱信号比较分析，在血浆样品中共发现38个入血成分，包括22个原形成分和16个代谢产物，结果表明，黄连解毒汤主要成分的代谢产物在大鼠体内多以硫酸化和葡糖醛酸等二相代谢产物形式存在。Xu等[14]通过LC-ESI-MS方法，验证该法能应用于大鼠灌服大承气汤后大鼠血浆中5种化学成分的药代动力学研究；辛杨等[15]利用超高效液相色谱-高分辨质谱联用技术法，定性分析大鼠灌服“甘草附子汤”和“术附汤”后血浆中的次乌头碱，结果表明，“甘草附子汤”和“术附汤”中次乌头碱体内吸收程度不同，两复方功效差异可能来源于次乌头碱在体内吸收程度的不同。王佩瑶等[16]利用LCTOF-MS测定双龙方（人参、丹参）中10种原形成分和一种代谢物在大鼠体内的药代动力学参数，结果表明丹酚酸与人参皂苷有协同作用，临床上使用双龙方时，每隔8h服用1次即可维持所需药效浓度。

4 小结

液质联用技术将高效液相超强的分离能力和质谱的高灵敏度和专属特异性强的优点融合在一起，有效解决了中药及复方成分复杂、内源性杂质较多、且活性成分及代谢物在生物样品中浓度较低等问题，已成为中药各类成分分析的重要手段，为中药及中药复方的体内过程研究和代谢产物的分析奠定了基础。

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（收稿：2015-01-23 修回：2015-03-10）

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