上皮性卵巢癌患者 ERCC1 N118N基因型与铂类药物化疗敏感性关系的研究

夏婷 朱笕青 郑智国 杨悦

上皮性卵巢癌患者 ERCC1 N118N基因型与铂类药物化疗敏感性关系的研究

夏婷 朱笕青 郑智国 杨悦

目的 探讨不同核苷酸切除修复交叉互补基因组1（ERCC1）N118N基因型与接受铂类药物化疗的上皮性卵巢癌患者化疗敏感性的关系。方法 采用Taqman探针基因分型技术检测92例上皮性卵巢癌患者外周血ERCC1 N118N单核苷酸多态性。所有患者均接受以铂类药物为主的方案化疗（紫杉醇+顺铂或环磷酰胺+顺铂），比较不同基因型与患者化疗敏感性的关系。结果 92例患者中第118位密码子基因型的分布是CT+TT型为42.4%，CC型57.6%；CT+TT型者对铂类化疗药物的敏感性显著高于CC型者（P=0.029）。结论 ERCC1第118位密码子的基因多态性与卵巢癌患者铂类药物化疗敏感性有关。

卵巢癌 核苷酸切除修复交叉互补基因1 基因多态性 药物敏感性

【 Abstract】 Objective To investigate the association of ERCC1 N118 N gene polymorphism with chemotherapy sensitivity in epithelial ovarian cancer patients treated with platinum-based chemotherapy(taxol+cisplatin,cyclophosphamide+ cisplatin). Methods Ninety two patients with epithelial ovarian cancer treated with platinum-based chemotherapy were included in the study.Pre-treatment anticoagulated blood samples were collected for extraction of genomic DNA.The TaqMan method was used to genotype single nucleotide polymorphisms(SNPs)in ERCC1 N118N gene. Results The genotype distribution at codon 118 was 57.6%with C/C and 42.4%with C/T+TT.Platinum-resistance was less frequently in patients with the C/T+T/T genotype(P=0.029).Conclusion ERCC1 N118 N gene polymorphism may be associated with chemotherapy sensitivity in epithelial ovarian cancer patients treated with platinum-based chemotherapy.

【 Key words】 Ovarian cancer Excision repair cross-complementation gene 1 Polymorphism drug sensitivity Chemotherapy sensitivity

上皮性卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，由于早期症状不明显，往往确诊时已属晚期，其5年生存率仅10%～30%[1]。以铂类药物为基础的化疗是其重要治疗手段，但耐药的产生严重影响了化疗疗效和患者预后。因此如何克服耐药，提高患者生存率一直是卵巢癌研究的热点。众所周知，铂类药物主要作用靶点是DNA，药物在肿瘤细胞内形成链内加合物（Pt-DNA）及链间交联而损伤DNA，阻止DNA复制。因此，DNA修复能力增强是耐药产生的重要机制之一，其中核苷酸切除修复（nucleotide excision repair，NER）是哺乳动物细胞中一种主要的DNA修复系统，而核苷酸切除修复交叉互补基因组1（excision repair cross-complementation gene group 1，ERCC1）是NER途径的关键酶。近年来，ERCC1与肿瘤化疗耐药的相关性研究成为热点。据报道，在卵巢癌患者中，化疗耐药组的ERCC1表达率明显高于化疗敏感组[2]。在晚期头颈部鳞状细胞癌的患者中，ERCC1低表达组3年生存率明显高于高表达组，ERCC1低表达是预测预后的独立因素[3]。笔者通过Taqman探针基因分型技术检测上皮性卵巢癌患者的ERCC1 N118N单核苷酸多态性（第118位密码子上碱基C被T替代，导致精氨酸被色氨酸替代），旨在了解ERCC1多态性与上皮性卵巢癌患者铂类化疗敏感性的关系，现报道如下。后-80℃保存待用。WizardR基因组DNA纯化试剂盒（美国Promega公司）用于分离DNA，提取过程按试剂盒说明操作。ERCC1 N118N单核苷酸多态性检测采用Taqman探针基因分型技术，在ABI 7500荧光定量PCR扩增仪上完成（美国Applied Biosystems公司）。探针、引物和Taqman通用PCR混合液均购自美国ABI公司。PCR总反应体系为5μl，混合有0.25μl的引物和探针，2.5μl PCR反应液和5ng DNA。PCR反应条件如下：95℃预变性10min；92℃变性15s，60℃延伸1min，40个循环。每块板上加有2个无DNA空白标本，6个已知基因组DNA标本，2个随机重复的标本分别作为阴性对照，阳性对照和质量控制。7500扩增仪附带的随机软件SDS等位基因分型软件分析结果。

1 资料和方法

1.1 一般资料 2001年6月至2007年5月在本院治疗的上皮性卵巢癌患者92例，年龄22～67岁，中位年龄51岁。按FIGO分期法：Ⅰ期7例，Ⅱ期13例，Ⅲ期62例，Ⅳ期10例。按WHO组织学分类法：浆液性囊腺癌65例，黏液性囊腺癌5例，子宫内膜样腺癌10例，其他类型上皮性癌12例。

1.2 治疗方法 所有患者均接受首次卵巢肿瘤细胞减灭术，并术后予6～8个疗程的含铂类药物的联合化疗，具体方案为紫杉醇+顺铂（TP）或环磷酰胺+顺铂（CP）。TP：紫杉醇每次175mg/m2，顺铂每次60mg/m2；CP：环磷酰胺（CTX）每次1 000mg/m2，顺铂每次60mg/m2，3～4周后重复，至少化疗6个疗程。疾病进展或复发后退出试验组，进入生存随访。

1.3 检测方法 每例患者首次治疗前清晨空腹抽取外周血1ml，采用含有EDTA抗凝剂的真空管收集的比较采用χ2检验。

1.4 疗效观察 92例上皮性卵巢癌患者均随访，直至疾病复发退出试验组，进入生存随访。第3次化疗结束开始进行疗效评价，每个疗程化疗后行妇科检查以及影像学检查，测定CA125，评价化疗疗效。化疗反应的评定方法按1978年抗肿瘤疗效通用标准：（1）完全缓解（CR）：可见肿瘤完全消失超过1个月；（2）部分缓解（PR）：病灶最大直径及其最大直径乘积缩小达50%，其它病灶无增大，超过1个月；（3）稳定（SD）：病灶缩小不足50%，增大不超过25%，持续1个月；（4）进展（PD）：病灶乘积增加25%或出现新病灶。化疗后达到CR、PR的患者6个月内疾病进展或复发定义为耐药，即无进展生存期（PFS）≤6个月，PFS＞6个月的定义为化疗敏感[4]。

1.5 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件，计数资料

2 结果

2.1 92例卵巢癌患者ERCC1 N118N基因型检测结果 ERCC1 N118N基因型检测结果，CT+TT型39例（42.4%），CC型53例（57.6%）。38例患者对铂类为主的化疗方案不敏感（41.3%），54例患者敏感（58.7%）。

2.2 ERCC1 N118N基因多态性对化疗疗效的影响 39例CT+TT型携带者中对化疗敏感28例（占71.8%），53例CC型携带者中对化疗敏感26例（占49.1%），两者的差异有统计学意义（P=0.029），说明CC型携带者容易对铂类药物耐药。

3 讨论

首次化疗的成败对卵巢癌患者的预后至关重要，但不同个体的卵巢癌患者即使接受相同化疗方案、相同药物剂量治疗，治疗疗效和耐受性方面仍存在较大的个体差异。这种个体差异主要取决于DNA损伤修复、药物代谢和解毒等基因多态性影响。基因多态性主要是指在基因组水平上由单个碱基的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上，基因多态性在人类基因组中广泛存在。

ERCC1是NER修复途径中的关键酶之一，其编码基因位于染色体19q13.2－19q13.3，基因全长15kb，含10个外显子,它编码含297个氨基酸的蛋白质，分子量为32.5KDa[5]。目前，研究已发现ERCC1基因的3个外显子多态性，其中最常见的是C8092A和T19007位点的多态性。T19007多态性是第118位密码子上碱基的变异，即密码子AAC和AAT均编码天冬酰胺，这种突变可能影响了ERCC1 mRNA表达水平。在Sokbom等[4]研究中，对60例应用铂类+紫杉醇联合化疗的卵巢癌患者进行了ERCC1第118位密码子的多态性分析，发现CC基因型患者对化疗敏感性差于变异型CT和TT；多因素分析表明CT和TT基因表型是减少铂类耐药风险的独立预测因素。该结论与本研究发现CT+TT型携带者对铂类化疗药物的敏感性显著高于CC型携带者的结果相一致。

相反，Kim等[6]对118例卵巢癌患者的NER途径多个基因多态性进行了分析，发现患者对铂类药物的敏感性与ERCC1 N118N的基因多态性无关，而与ERCC1 8092C＞A有关；甚至还有些实验结果得出相反结论，认为CC型携带者对化疗反应更敏感[7]。这些研究结果与本研究结论相矛盾，可能与本研究对象使用的联合化疗方案相关，另外笔者认为本研究只考虑了ERCC1基因多态性单一一种因素，也影响了研究结果。因为在Smith等[8]研究中，对178例单一应用铂类化疗及75例应用铂类+紫杉醇联合化疗的患者进行了ERCC1第118位密码子的多态性分析，发现单一化疗方案组具有CC基因型患者肿瘤复发及死亡的风险明显高于变异型CC和TT；而在联合化疗组，CC基因并没有增加复发及死亡的风险。而本研究中所有患者术后均为联合化疗，且化疗方案不尽相同，是否是铂类以外的化疗药物改变了ERCC1引起的耐药，有待更进一步研究。

总之，ERCC1与卵巢癌疗效及预后方面相关研究结论，可能为攻克卵巢癌铂类耐药这一临床难题提供重要的理论基础。如何为临床治疗带来新的方法和途径还有待大样本及多因素的研究分析。

[1] Fehrmann R S,LiXY,van der Zee AG,et al.Profiling studies in ovarian cancer:a review[J].Oncologist,2007,12(8):960-966.

[2] 刘国燕,瞿全新,糜若然,等.核苷酸切除修复交叉互补基因1与卵巢癌顺铂耐药的关系[J].中华妇产科杂志,2008,30(3):184-187.

[3] Jun H J,Ahn M J,Kim H S,et al.ERCC1 expression as a predictive marker of squamous cell carcinoma of the head and neck treated with cisplatin-based concurrent chemoradiation[J]].Br J Cancer,2008,99(1):167-172.

[4] Sokbom K,Woong J,Jae WK,et al.Association between excision repair cross-complementation group 1 polymorphism and clinical outcome of platinum-based chemotherapy in patients with epithelialovarian cancer[J].Exp MolMed,2006,38(3):320-324.

[5] Park C H,Bessho T,Matsunaga T,et al.Purification and characterization of the XPF-ERCC1 complex of human DNA repair excision nuclease[J].J BiolChem,1995,270:22657-22660.

[6] Kim H S,Kim M K,Chung H H,et al.Genetic polymorphisms affecting clinical outcomes in epithelial ovarian cancer patients treated with taxanes and platinum compounds:AKorean population-based study[J].GynecolOncol,2009,113(2):264-269.

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[8] Smith S,Su D,Rigault de la Longrais I A,et al.ERCC1 genotype and phenotype in epithelial ovarian cancer identify patients likely to benefit from paclitaxel treatment in addition to platinum-based therapy[J].J Clin Oncol,2007,25(33):5172-5179.

Association of ERCC1 N118 N gene polymorphism with chemotherapy sensitivity in ovarian cancer patients with platinum-based chemotherapy

XIA Ting,ZHU Jianqing,ZHENG Zhiguo,et al.
Department of Gynecologic Oncology,Zhejiang Cancer Hospital, Hangzhou 310022,China

2014-11-26）

（本文编辑：严玮雯）

浙江省自然科学基金资助项目（Y2100593）

310022 杭州，浙江省肿瘤医院妇科（夏婷、朱笕青、杨悦），肿瘤研究所（郑智国）

杨悦，E-mail：yangyue85170208@163.com