不同水平白藜芦醇对乌克兰鳞鲤部分生化指标的影响

■高 妍 方珍珍 朱国霞 孙金辉 乔秀亭 白东清 周李君 刘 波

（天津农学院水产学院天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384）

近年来，中草药作为饲料添加剂，在增产防病方面作用明显，正成为一种新的发展趋势[1]。虎杖是一种临床常用的中药材，为蓼科植物虎杖的干燥茎和根，在我国大部分地区均有种植[2]。白藜芦醇是一种天然植物抗毒素，存在于近70种植物中，是中药大黄和虎杖的主要活性成分[3]。白藜芦醇对小鼠机体有抗炎、抗氧化和抗癌等多种药理作用[4]，还可降低急性运动后小鼠血清、肝脏、心肌、脑组织中的丙二醛含量，提高超氧化物歧化酶活性[5-6]。

乌克兰鳞鲤(Cyprinus carpio)，又名俄罗斯鲤，是一种引进的养殖品种[7]。与普通鲤鱼相比具有生长快、个体大、抗病力强、易驯化、出肉率高等优点[8]。白藜芦醇在水产养殖动物上的应用还未见报道。基于此，本试验通过在饲料中添加不同水平的白藜芦醇，投喂乌克兰鳞鲤，旨在探讨白藜芦醇对乌克兰鳞鲤消化和体内生化指标的影响，寻求对乌克兰鳞鲤适宜的添加水平，为水产动物健康养殖提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验鱼

试验用健康乌克兰鳞鲤幼鱼购自天津市西青区畜牧水产业发展服务中心，运至天津农学院实验室。进行消毒处理后，置于水箱中暂养。鱼平均体重为(4.94±0.04)g，平均体长为(6.44±1.02)cm。

1.1.2 试验饲料

乌克兰鳞鲤基础饲料为鲤鱼鱼种配合饲料，购自天津海大饲料有限公司，其主要营养成分为粗蛋白质 32%、粗脂肪≥10%、粗灰分15.0%、钙0.5%～1.5%、总磷0.7%、食盐0.3%～1.5%、赖氨酸≥1.45%、水分≤12.5%，置干燥阴凉处保存。

白藜芦醇：纯度≥98%（西安汇林生物科技有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 试验设计与饲养管理

将白藜芦醇按40、80、120、160、200 mg/kg比例均匀拌入饲料中，以不添加中草药组作为对照，共6组，分别投喂6组乌克兰鳞鲤。

经过暂养、测量外部指标后，选取规格一致、体质健壮、无病无伤的乌克兰鳞鲤540尾，随机分为6组，每组3个重复，每个重复30尾鱼，分别饲养于18个67 cm×50 cm×36 cm水族箱内，试验鱼经2周暂养后开始正式试验。投饲率为3%～4%，试验水为自来水，pH值为7.2～7.5，水温控制在(28.5±1)℃，溶氧大于5 mg/l，氨氮控制在0.05 mg/l以下。每天换水1/3～1/2，每天投喂两次。

1.2.2 样品收集

养殖试验结束后，对试验鱼饥饿24 h后取样。每个重复随机抽取10尾鱼，采用尾部静脉抽血方法，用1 ml一次性无菌注射器采血。在针管中加入少量肝素，每10尾鱼的血为一个样本，注入2 ml的离心管中，4℃、4 500 r/min离心15 min，取血浆备用。将鱼置于冰盘上进行解剖取出肝胰脏和肠道，剔除肠道附属物，将肠道分为前肠、中肠和后肠，保存于-80℃冰箱备用。

1.2.3 样品的测定

样品分析前于4℃冰箱中解冻，用预冷的0.86%的生理盐水洗2次，再用滤纸吸去表面水分，称重，切碎后用移液器加入9倍于组织块质量的预冷的0.86%的生理盐水，在匀浆器中进行匀浆，4℃、4 500 r/min离心15 min，取上清液备用。

蛋白酶测定采用福林酚法[9]。SOD、CAT、MDA、AMS、LPS、AKP、ACP、ALT及各组织中蛋白含量均采用南京建成生物工程技术研究所提供的试剂盒进行测定。

1.2.4 数据处理与统计分析

试验数据采用SPSS18.0统计软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），若差异达到显著水平（P＜0.05），则进行Duncan's法多重比较。所有数据均以“平均值±标准差”表示。

2 结果

2.1 白藜芦醇对乌克兰鳞鲤抗氧化指标的影响(见表1)

表1 白藜芦醇水平对乌克兰鳞鲤抗氧化指标的影响

肝胰脏SOD活性除40 mg/kg组低于对照组外(P＜0.05)，其余各组均有所升高，其中120 mg/kg组SOD活性最高(P＜0.05)。80～160 mg/kg组乌克兰鳞鲤肝胰脏中MDA含量均低于对照组，其中120 mg/kg、160 mg/kg组MDA含量显著降低（P＜0.05）。血浆中MDA含量虽有降低但各组间变化不大（P＞0.05）。40 mg/kg组肝胰脏CAT活性显著高于对照组（P＜0.05），80～160 mg/kg组肝胰脏CAT活性均极显著低于对照组（P＜0.05）。80、160、200 mg/kg组血浆CAT活性显著高于对照组（P＜0.05）。

根据以上结果可以看出，与对照组相比，饲料中添加 80～160 mg/kg白藜芦醇，能够提高乌克兰鳞鲤肝胰脏SOD活性，降低肝胰脏MDA含量，提高血浆中CAT活性。

2.2 白藜芦醇对乌克兰鳞鲤消化酶活性的影响（见表2）

表2 白藜芦醇水平对乌克兰鳞鲤消化酶活性的影响（U/mg prot.）

由表2可知,与对照组相比,饲料中添加40 mg/kg白藜芦醇能显著提高肝胰脏三种消化酶活性（P＜0.05），前肠和中肠蛋白酶以及中肠脂肪酶活性也显著提高（P＜0.05）。添加80 mg/kg白藜芦醇对中肠三种消化酶、肝胰脏蛋白酶和前肠脂肪酶活性有显著提高作用（P＜0.05）。添加120～200 mg/kg白藜芦醇后，鲤鱼后肠淀粉酶活性和肝胰脏蛋白酶活性显著高于对照组（P＜0.05），添加160 mg/kg白藜芦醇组前肠蛋白酶、中肠脂肪酶活性显著高于对照组（P＜0.05）。

由此可见，与对照组相比，饲料中添加40～160 mg/kg白藜芦醇，能提高乌克兰鳞鲤肝胰脏、前肠和中肠的消化能力。

2.3 白藜芦醇对乌克兰鳞鲤部分免疫指标的影响（见表3）

由表3可知，40～160 mg/kg组肝胰脏ACP活性均显著高于对照组(P＜0.05)；40～200 mg/kg添加组血浆ACP活性均显著高于对照组(P＜0.05)。40 mg/kg和160 mg/kg组肝胰脏AKP活性显著高于对照组；除80 mg/kg组血浆AKP活性显著低于对照组（P＜0.05），其余各添加组均显著高于对照组（P＜0.05）。白藜芦醇对乌克兰鳞鲤的血浆和肝胰脏ALT活性的影响不显著（P＞0.05）。

表3 白藜芦醇对乌克兰鳞鲤部分免疫指标的影响

3 讨论

3.1 白藜芦醇对乌克兰鳞鲤抗氧化能力的影响

机体内的氧化与还原反应在正常情况下处于一种动态平衡，维持这一平衡依赖于体内的氧化与抗氧化系统的正常工作[10]。SOD是体内清除超氧自由基的第一道防线[11]，CAT保护细胞免受过氧化氢及氧自由基毒性[12-13]，二者是生物体抗氧化系统的重要组成酶类，对活性氧自由基的清除起着关键的作用；MDA则是脂质过氧化物反应中的最终产物，可导致机体细胞的损伤[14]。

本试验中，在饲料中添加80～200 mg/kg RES，能够提高乌克兰鳞鲤肝胰脏SOD活性，降低肝胰脏MDA含量，提高血浆中CAT活性。卓杰先等[15]发现，RES可显著提高运动小鼠血清SOD活性（P＜0.05），降低MDA水平（P＜0.05）。莫志贤等[14]得出，白藜芦醇甙在0.05～2.00 mmol/l剂量范围，受损伤的肝细胞悬液中SOD活性升高及MDA量下降均呈明显的剂量依赖性。段胜红[16]研究RES对大鼠非酒精性脂肪肝的保护作用时，发现RES能明显降低模型组大鼠肝组织MDA含量，并且能显著提高其SOD活力，说明RES能抑制脂质过氧化反应，从而提高抗氧化能力。这些与本试验所得出的RES能提高乌克兰鳞鲤肝胰脏抗氧化能力的结论相符。

3.2 白藜芦醇对乌克兰鳞鲤消化酶活性的影响

消化酶活性直接关系到鱼类对营养物质的吸收和利用[17]，适宜的中草药添加剂可以提高鱼类的消化酶活性[18]。试验探讨饲料中添加白藜芦醇乌克兰鳞鲤体内淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性的变化情况。

陈苏维等[19]在泥鳅的饲料中添加不同水平中草药，2%添加量能显著提高泥鳅肝胰脏的AMS活性（P＜0.05）。中草药山楂、麦芽等按一定比例粉碎混合后对异育银鲫肝胰脏AMS活性有显著提高作用（P＜0.05）[20]。本试验中，饲喂添加白藜芦醇饲料，对乌克兰鳞鲤肝胰脏AMS也有一定的提高作用。白藜芦醇对乌克兰鳞鲤肠道LPS和蛋白酶活性也存在不同程度的影响，前肠LPS活性和中肠蛋白酶活性在80 mg/kg组达到最高并显著高于对照组（P＜0.05）。杨维维等[21]报道，添加大黄素对克氏螯虾肠道LPS无显著影响（P＞0.05），但对肠道蛋白酶有显著提高作用。饲料中添加二苯乙烯苷能显著降低鸡小肠LPS活性，但胰蛋白酶活性有显著提高[22]。以上报道与本试验结果存在一定差异，可能原因是不同动物的主要消化器官不同，导致中草药对消化酶的影响不同。

3.3 白藜芦醇对乌克兰鳞鲤部分免疫指标的影响

磷酸酶又称磷酸单酯水解酶，是可以催化各种含磷化合物水解的酶类，根据它们催化作用的最适pH值特性，可分为碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）[23]。碱性磷酸酶主要存在于鱼类前肠上皮细胞的浅部和纹状缘上，与脂类等物质的吸收有一定的相关关系[24]。ALT则是机体中最重要的转氨酶。

本试验中综合AKP和ACP数据分析可得，160 mg/kg组脂质过氧化程度较低，机体处于较健康状态，不同水平白藜芦醇对乌克兰鳞鲤ACP和AKP活性有不同程度的升高。马维波对香鱼投喂大黄、金银花与当归等中草药，证实中草药能提高机体内ACP与AKP活性[25]。添加大黄素可使团头鲂血清AKP活性较对照组提高20.47%（P＜0.05）[26]。李素莹等[27]报道饲料中添加1.0～5.0 g/kg大黄对凡纳滨对虾血清ACP有显著提高作用（P＜0.05）。以上报道与本试验结果基本相符，说明白藜芦醇能够提高机体AKP和ACP活性，对机体解毒有积极作用，还可能促进机体对脂类的吸收作用。白藜芦醇对乌克兰鳞鲤的血浆和肝胰脏ALT活性的影响不显著，说明在试验范围内，白藜芦醇未对乌克兰鳞鲤造成肝损伤。

4 结论

① 饲料中添加80～160 mg/kg白藜芦醇，能够提高乌克兰鳞鲤抗氧化和免疫能力。

② 饲料中添加40～160 mg/kg白藜芦醇，能够提高乌克兰鳞鲤的消化功能。

③综合来看，试验设置范围内，在乌克兰鳞鲤饲料中添加80～160 mg/kg白藜芦醇较为适宜。