PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌鉴别诊断中的应用

李雅萍

PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌鉴别诊断中的应用

李雅萍

目的 探讨垂体肿瘤转化基因（PTTG）mRNA和囊性纤维跨膜转运调节因子（CFTR）mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌疾病中的变化及临床意义。方法 选择慢性胰腺炎患者20例，胰腺癌患者30例；采用实时逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测两组组织中PTTG mRNA和CFTR mRNA表达状况，比较分析两标志物的变化。结果 慢性胰腺炎组织中CFTR mRNA的表达水平明显高于胰腺癌（P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎组织中的表达水平明显低于胰腺癌（P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌组织中的表达量具有相关性（r=-0.526、-0.539，P＜0.01）。结论 检测PTTG mRNA表达水平可用于胰腺癌诊断，检测CFTR mRNA表达水平可用于慢性胰腺炎诊断，且均具有较强的灵敏性。

垂体肿瘤转化基因 囊性纤维跨膜转运调节因子 慢性胰腺炎 胰腺癌

慢性胰腺炎及胰腺癌早期均会有腹痛黄疸等临床症状，二者鉴别有一定难度。囊性纤维跨膜转运调节因子（CFTR）是一种与慢性胰腺炎及胰腺癌相关的蛋白，国外研究发现，CFTR基因突变及多态性与慢性胰腺炎密切相关［1］。垂体肿瘤转化基因（PTTG）是来源于垂体瘤组织中的原癌基因，PTTG的高表达能促进细胞增殖转化，在肿瘤形成过程中起重要作用［2～4］。本文采用实时逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测胰腺癌和慢性胰腺炎组织中PTTG mRNA和CFTR mRNA的表达水平，探讨其相互关系及临床意义。

1 临床资料

1.1 一般资料 回顾性分析2005年9月至2014年9月本院收治的胰腺癌患者手术切除标本30例，男19例，女11例；年龄38～72岁，平均（53±15）岁。均为胰腺导管癌。其中高分化腺癌12例、中分化腺癌7例、低分化腺癌11例。经临床和（或）病理证实发生胰腺外转移者20例。另选取同期慢性胰腺炎患者手术切除标本20例，男13例，女7例；年龄35～73岁，平均（50±13）岁。怀疑胰腺癌而行手术切除的慢性胰腺炎患者16例，癌旁慢性胰腺炎组织者4例。其中伴有发热者3例，伴有不同程度黄疸者8例，伴有脂肪肝者8例，合并门静脉高压者1例。各组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本项目经本院伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。

1.2 方法 （1）mRNA表达水平检测：RT-PCR技术检测胰腺癌和慢性胰腺炎组织中PTTG mRNA和CFTR mRNA表达状况。（2）仪器、试剂和引物：RNA提取试剂盒由美国Invitrogen公司提供。德国Roche公司light Cycler荧光PCR仪。PCR试剂盒由上海久盛医疗用品有限公司提供。（3）细胞分离和总RNA提取：Trizol法提取组织中总RNA，通过分光光度计检测A260/280比值以验证RNA纯度。（4）PCR扩增：引物设计采用Primer5软件，PTTG引物序列为：正义链5'-CAGGCACCCGTGTGGTTGCT-3'，反义链 5'-AGGCTGGTGGGGCATCGAAC-3'，产物长度116 bp。CFTR引物序列为：正义链5'-CGGAAAAGATGAGGTTCTTCCAG-3'，反义链 5'-TCTTGAACTTCTTCTTCTGTCTC-3'，产物长度116bp。内参基因为β-actin，引物序列为：正义链5‘-ACCATGGATGATGATATCGCC-3'，反义链5'-GCCTTGCACATGCCGG-3'。反应条件：95℃，10min→95℃，30 s→52℃，30 s→72℃，30 s，40个循环→72℃，10 min→4℃保存。（5）基因序列分析：采用BLAST应用软件及Gen Bank对比分析基因序列同源性。对扩增的目的片断进行凝胶电泳，通过紫外光凝胶成像系统进行扫描并记录，用四维成像处理系统测定各组cDNA特异性，RNA表达量与内参基因的比值表示mRNA的相对表达量。

1.3 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料组间比较采用χ2检验及Fishers精确概率法检验，相关性分析采用Pearson 法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组织PTTG mRNA和CFTR mRNA表达率比较 CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌组织中的表达率分别为50.0%（10例）和3.3%（1例）；PTTG mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌组织中的表达率分别为10.0%（2例）和63.0%（19例）。CFTR mRNA在慢性胰腺炎组织中的表达率明显高于胰腺癌（χ2=10.15，P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎组织中的表达率明显低于胰腺癌（χ2=14.01，P＜0.01）。

2.2 组织PTTG mRNA和CFTR mRNA表达量比较 CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌组织中的表达量分别为（0.73±0.08）和（0.13±0.02）；PTTG mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌组织中的表达量分别为（0.17±0.03）和（0.80±0.11）。CFTR mRNA在慢性胰腺炎组织中的表达量明显高于胰腺癌（χ2=30.27，P＜0.01），PTTG mRNA在慢性胰腺炎组织中的表达量明显低于胰腺癌（χ2=31.57，P＜0.01）。

2.3 相关性及灵敏度分析 PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌组织中的表达量均具有相关性（r=-0.526、-0.539，P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA鉴别慢性胰腺炎的灵敏度分别为10%和50%，二者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。PTTG mRNA和CFTR mRNA鉴别胰腺癌的灵敏度分别为63%和3.3%，二者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。

3 讨论

PTTG为原癌基因，在垂体肿瘤及其他恶性肿瘤组织中呈高表达［2～4］。有研究认为，PTTG 可通过不同的途径促进肿瘤的发生和发展，可能与细胞转化及调控肿瘤血管生成等机制密切相关［5］。更有研究发现，PTTG mRNA高表达者的癌细胞增殖活性及肿瘤血管生成密度高，易转移复发［6，7］。本文结果显示，PTTG mRNA在胰腺癌组织中的表达率及相对表达量均明显高于慢性胰腺炎组织（P＜0.01）。

CFTR是分布于胰腺、肠道等部位上皮细胞膜上的一种氯离子通道，在盐类转运、水分流动和离子浓度调节中有重要作用［8～10］。异常 CFTR 表达可导致上皮细胞的液体转运发生改变，引起局部组织阻塞和感染［1，11］。本研究结果显示，CFTR mRNA在慢性胰腺炎组织中的表达率和表达量均高于胰腺癌组织（P＜0.01）。同时，PTTG mRNA和CFTR mRNA在慢性胰腺炎和胰腺癌组织中的表达量均具有负相关性（P＜0.01），提示两标志物与慢性胰腺炎和胰腺癌疾病的发生、发展密切相关，有助于胰腺癌和慢性胰腺炎疾病的早期鉴别诊断，降低漏检率。

1 张敏,王银萍,倪劲松,等．CFTR及SPINK1蛋白在慢性胰腺炎及胰腺癌中的表达及其意义．中国实验诊断学,2011,15(10):1625～1628．

2 Wiericnkx A,Auger C,Devauchelle P,et al．A diagnostic marker set for invasion,proliferation and aggressiveness of prolactin pituitary tumors．Eendocr Relat Cancer,2007,14(3):887～900．

3 Genkai N,Homma J,Sano M,et al．Increased expression of pituitary tumor transforming gene PTTG is correlated with poor prognosis in gliom a patients ．On Rep,2006,15(6):1569～1574．

4 Rehfeld N,Geddert H,Atamna A,et al．The influence the pituitary tumor transforming gene-1(PTTG-1)survival of patients with small cell lung cancer and no small cell lung cancer． J Carcinog,2006,20(5):4．

5 张耀明,周臻涛,邓国明,等．PTTG和血管生成与结直肠癌的相关性研究．临床和实验医学杂志,2014,13(12):985～988．

6 Shibata Y,Haruki N,Kuwabara Y,et al．Expression of PTTG(pituitary tumor I ransforming gene)in esophageal cancer．Jpn J of Clinical Oncology,2002,32(7):233～237．

7 SoJbach C,Roiler M,Fel Jbaum,et al．PTTG mRNA expression in primary breast cancer:a prognostic marker for lymph node invasion and tumor recurrence．Breast,2004,13(1):80～81．

8 Ignáth I,Hegyi P,Venglovecz V,et al．CFTR Expression but not cl-/invoved in the stimulatory effect of bile acids on apical cl～/exchange activity in human pancreatic duct cells．Pancreas, 2009, 38(8),921～929．

9 Myerburg MM,King JD Jr,Oyster NM,et al． AMPK Agonists Ameliorate Sodium and Fluid Transport and inflammation in CFA airway Epithelial Cells ． AM J of Respiratory cell molecular biology,2010,42(6):676～684．

10 Mornon JP,Lehn P,Callebaut I． Molecular models of the open and closed states of the whole human CFTR protein． Cellular and Molcular Life Science,2009,66(21):3469～3486

11 Keiles S．Kammesheidt A identification of CFTR,PRSS and SPINK1 mutations in 381 patients with pancreatitis．Pancreas,2006,33(30): 221～227．

Objective To explore the application of PTTG mRNA and CFTR mRNA in the differential diagnosis of chronic pancreatitis and pancreatic cancer. Method 20 cases of patients with chronic pancreatitis and 30 cases of patients with pancreatic cancer were selected. The expression of organize PTTG mRNA and CFTRmRNA in the two groups was detected，real-time reverse transcription-polymerase chain reaction（RT - PCR）technology was applied. The changes of the two markers were comparetively analysed. Results The expression rate of CFTRmRNA in chronic pancreatitis group and PTTGmRNA in pancreatic cancer group was respectively obviously higher（P＜0.01）. The expression quantity of PTTGmRNA and CFTRmRNA in chronic pancreatitis and pancreatic cancer were in the correlation（r=-0.526，-0.539，P＜0.01）. Conclution PTTGmRNA has higher sensitivity in diagnosis of pancreatic cancer，so does CFTRmRNA in diagnosis of chronic pancreatitis. Testing organization PTTGmRNA and CFTRmRNA can be used in the differential diagnosis of chronic pancreatitis and pancreatic cancer disease.

PTTGmRNA CFTRmRNA Chronic pancreatitis Pancreatic cancer

712000 陕西省咸阳市核工业二一五医院消化内科