田水中戊唑醇和苯醚甲环唑的测定

胡西洲+彭西甜+王小飞+等

摘要：建立了一种新型固相支撑液液萃取-气相色谱/质谱联用检测田水中戊唑醇和苯醚甲环唑农药残留的方法。样品溶液经硅藻土固相支撑液液萃取柱（SLE）吸附后，采用乙酸乙酯洗脱，收集的洗脱液经浓缩后用气相色谱/质谱仪进行测定。戊唑醇和苯醚甲环唑的质量浓度与其峰面积在0.05～5.00 mg/L内线性关系良好，最小检出量分别为8.26×10-12 g、4.38×10-11 g（S/N=5），样品溶液的添加回收率为80.0%～110.0%，相对标准偏差为5.17%～13.97%。该方法具有操作简便、快速、高效、试剂用量少、灵敏度高等特点。

关键词：支撑液液萃取；气相色谱-质谱；戊唑醇；苯醚甲环唑；农药残留

中图分类号：O657.7+1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5534-02

苯醚甲环唑属三唑类杀菌剂，具有高效、广谱、低毒、用量低等特点，其内吸性极强，作用机理独特，是三唑类杀菌剂的优良品种。随着国内原药厂家的增加和产能扩张，苯醚甲环唑逐渐成为国内主要杀菌剂之一。此外，其复配产品也呈多元化发展，多与嘧菌酯、丙环唑、醚菌酯等进行复配，根据农药工业网的消息，截至2013年8月底，新登记苯醚甲环唑产品的企业达68家，共计90个产品[1]。戊唑醇也属三唑类杀菌剂，其作用机制是抑制羊毛甾醇到麦角甾醇的生物合成，特点是强内吸性，兼有保护和治疗作用，具有持效期较长，高效等特点[2]。

由于此类农药的大量使用，对产地水体造成了不同程度的污染。GB 2763-2012中规定戊唑醇、苯醚甲环唑的每日允许摄入量（ADI）分别为0.03、0.01 mg/kg·bw[3]。因此，建立一种新型快速检测田水中戊唑醇和苯醚甲环唑农药残留的方法显得非常必要。

支撑液液萃取（Supported liquid-liquid extraction， SLE）于1997年由Johnson等在传统的液液萃取原理基础上提出的一种新型样品前处理技术[4]。它是以大比表面积、惰性、多孔填料为萃取介质，克服传统液液萃取过程中操作繁琐、溶剂消耗大、费时、易乳化等问题。溶液样品首先被多孔填料吸附，经过一段时间的静置，再用与溶液不互溶的有机溶剂把目标物洗脱下来，从而达到萃取目的。该方法现已逐渐用于食品及生物样品中药物和代谢物分析[5-9]。本研究采用固相支撑液液萃取技术对水稻产地的水体进行预处理，建立了气相色谱-质谱法测定田水中戊唑醇和苯醚甲环唑农药残留的新方法，结果表明该方法高效、快速、准确、适用性强。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

乙酸乙酯、丙酮（HPLC级，Tedia公司）；去离子水由Barnstead超纯水机制备。

Cleanert SLE硅藻土萃取柱（14.5 g/60 mL，博纳艾杰尔科技有限公司）；戊唑醇、苯醚甲环唑标准溶液（1 000 mg/L，农业部天津环保所）。

1.2 样品制备

量取已过滤的田水20 mL，倒入SLE萃取柱中，平衡15 min，再用20 mL乙酸乙酯进行洗脱，重复3次，收集所有萃取液于鸡心瓶中，在40 ℃水浴中旋转浓缩至干，再用2 mL丙酮溶解，用于气相色谱-质谱仪测定。

1.3 仪器工作条件

气相色谱-质谱联用仪（Agilent公司）： 6890N型气相色谱仪，配5973i型质量选择检测器，以及7683型自动进样器。DB-5MS型毛细管气相色谱柱（5%苯基-95%甲基聚硅氧烷，30 m×0.25 mm ID×0.25 μm膜厚）。载气，氦气（武汉钢铁公司，纯度为99.999%）；柱流速，1 mL/min；进样口温度，250 ℃；柱温程序：初始温度150 ℃，保持2 min，以6 ℃/min的速率，升温至290 ℃，保持8 min；进样量，1 μL（不分流进样）；

离子化方式，EI；电子能量，70 eV；接口温度，290 ℃；离子源温度，230 ℃；四极杆温度，150 ℃；质谱检测方式：选择离子监测（SIM）。戊唑醇：250*、252、163；苯醚甲环唑：323*、325、202。

2 结果与分析

2.1 固相支撑液液萃取条件的优化

固相支撑液液萃取作为一种新前处理技术，样品溶液在柱中的平衡时间是影响其回收率的重要参数，本试验分别测定样品溶液在不同平衡时间下对萃取效率的影响。结果表明，平衡15 min溶液能与填料形成牢固的支撑体，有较好的萃取效率。另外，对样品溶液体积也进行了优化。结果表明，溶液体积过大导致填料吸附饱和，多余溶液滞留在填料上方，选择20 mL样品溶液保证溶液在填料上完全被吸附。优化了不同体积乙酸乙酯的解吸效率，每次用量为20 mL，分别考察1、2、3次时各药物的回收率，结果表明，当解吸3次时各药物均能完全被解吸。

2.2 工作曲线和方法检出限

在给定的色谱条件下，戊唑醇和苯醚甲环唑可达到基线分离。准确称取适量戊唑醇、苯醚甲环唑标准品，以丙酮配制成浓度为10 mg/L的标准储备液，再依次将其稀释成0.05、0.20、0.50、2.00、5.00 mg/L的标准工作液，取以上标准工作液各1 μL进样检测，以峰面积对质量浓度进行线性回归，得到回归方程为：y=1 374.49 + 47 988.64x，R2=0.999 1（苯醚甲环唑）；y=-7 530.10+108 122.00x，R2=0.999 8。戊唑醇和苯醚甲环唑的最小检出量为8.26×10-12 g、4.38×10-11 g（S/N=5）。戊唑醇和苯醚甲环唑的标准品的色谱图见图1。

2.3 添加回收试验

采用空白水样标准加入法进行回收率试验，添加2个水平，每个水平平行测定5次，回收率结果见表1，戊唑醇和苯醚甲环唑的添加回收率为80.0%～110.0%，相对标准偏差为5.17%～13.97%。表明该分析方法回收率高、重现性好。endprint

3 小结与讨论

固相支撑液液萃取柱填料是经过高度改良具有高比表面积的多孔硅藻土，当加入样品溶液后，样品溶液迅速在填料表面扩散并被吸收，形成特有的萃取支撑骨架，再将有机溶剂通过该柱时，分析物即被萃取。应用固相支撑液液萃取与气相色谱/质谱联用测定田水中戊唑醇和苯醚甲环唑农药残留的方法具有简单、分析时间短、溶剂消耗少、回收率高、结果重现性好等优点，适合实验室批量样品的检测。试验结果表明，戊唑醇和苯醚甲环唑的质量浓度与其峰面积在0.05～5.00 mg/L内线性关系良好，最小检出量分别为8.26×10-12 g、4.38×10-11 g（S/N=5），添加回收率为80.0%～110.0%，相对标准偏差为5.17%～13.97%。

参考文献：

[1] 中国农药网.今年新增90个苯醚甲环唑相关产品登记[OL]. http：//www.agrichem.cn/news/201382914282678885.shtml.2013-08-29

[2] 刘传德，王培松，王继秋，等.三唑类杀菌剂及其在小麦病害防治中的应用研究进展[J].山东农业大学学报（自然科学版）， 2005，36（1）：157-160.

[3] GB 2763-2012.食品安全国家标准食品中农药最大残留限量[S].

[4] BREITENBUCHER J G， ARIENTI K L， MCCLURE K J. Scope and limitations of solid-supported liquid-liquid extraction for the high-throughput purification of compound libraries[J]. J Comb Chem，2001，3（6）：528-533.

[5] 江玉明，苏元复.液-液萃取中界面乳化现象的研究[J].化工学报，1986（3）：323.

[6] ZHANG Y， CAO H C， JIANG H L. Supported liquid extraction versus liquid–liquid extraction for sample preparation in LC-MS/MS-based bioanalysis[J]. Bioanalysis， 2013， 5（30）： 285-288.

[7] 包建民，马直爽，孙 莹，等.一种以含硅藻土的复合材料为介质的支撑液液萃取柱的制备及其应用[J].色谱，2012，30（8）： 798-803.

[8] 祝伟霞，袁 萍，杨冀州，等.固相支撑液液萃取-平行蒸发前处理技术测定动物源性食品中4种硝基呋喃类代谢物[J].食品科技，2011，36（2）：300-303.

[9] 李晓飞，唐 磊，罗永此，等.固相支撑液液萃取-气相色谱串联质谱法测定血液中8种苯二氮卓类药物[J].刑事技术，2014（2）：27-29.

（责任编辑 周有祥）endprint

3 小结与讨论

固相支撑液液萃取柱填料是经过高度改良具有高比表面积的多孔硅藻土，当加入样品溶液后，样品溶液迅速在填料表面扩散并被吸收，形成特有的萃取支撑骨架，再将有机溶剂通过该柱时，分析物即被萃取。应用固相支撑液液萃取与气相色谱/质谱联用测定田水中戊唑醇和苯醚甲环唑农药残留的方法具有简单、分析时间短、溶剂消耗少、回收率高、结果重现性好等优点，适合实验室批量样品的检测。试验结果表明，戊唑醇和苯醚甲环唑的质量浓度与其峰面积在0.05～5.00 mg/L内线性关系良好，最小检出量分别为8.26×10-12 g、4.38×10-11 g（S/N=5），添加回收率为80.0%～110.0%，相对标准偏差为5.17%～13.97%。

参考文献：

[1] 中国农药网.今年新增90个苯醚甲环唑相关产品登记[OL]. http：//www.agrichem.cn/news/201382914282678885.shtml.2013-08-29

[2] 刘传德，王培松，王继秋，等.三唑类杀菌剂及其在小麦病害防治中的应用研究进展[J].山东农业大学学报（自然科学版）， 2005，36（1）：157-160.

[3] GB 2763-2012.食品安全国家标准食品中农药最大残留限量[S].

[4] BREITENBUCHER J G， ARIENTI K L， MCCLURE K J. Scope and limitations of solid-supported liquid-liquid extraction for the high-throughput purification of compound libraries[J]. J Comb Chem，2001，3（6）：528-533.

[5] 江玉明，苏元复.液-液萃取中界面乳化现象的研究[J].化工学报，1986（3）：323.

[6] ZHANG Y， CAO H C， JIANG H L. Supported liquid extraction versus liquid–liquid extraction for sample preparation in LC-MS/MS-based bioanalysis[J]. Bioanalysis， 2013， 5（30）： 285-288.

[7] 包建民，马直爽，孙 莹，等.一种以含硅藻土的复合材料为介质的支撑液液萃取柱的制备及其应用[J].色谱，2012，30（8）： 798-803.

[8] 祝伟霞，袁 萍，杨冀州，等.固相支撑液液萃取-平行蒸发前处理技术测定动物源性食品中4种硝基呋喃类代谢物[J].食品科技，2011，36（2）：300-303.

[9] 李晓飞，唐 磊，罗永此，等.固相支撑液液萃取-气相色谱串联质谱法测定血液中8种苯二氮卓类药物[J].刑事技术，2014（2）：27-29.

（责任编辑 周有祥）endprint

3 小结与讨论

固相支撑液液萃取柱填料是经过高度改良具有高比表面积的多孔硅藻土，当加入样品溶液后，样品溶液迅速在填料表面扩散并被吸收，形成特有的萃取支撑骨架，再将有机溶剂通过该柱时，分析物即被萃取。应用固相支撑液液萃取与气相色谱/质谱联用测定田水中戊唑醇和苯醚甲环唑农药残留的方法具有简单、分析时间短、溶剂消耗少、回收率高、结果重现性好等优点，适合实验室批量样品的检测。试验结果表明，戊唑醇和苯醚甲环唑的质量浓度与其峰面积在0.05～5.00 mg/L内线性关系良好，最小检出量分别为8.26×10-12 g、4.38×10-11 g（S/N=5），添加回收率为80.0%～110.0%，相对标准偏差为5.17%～13.97%。

参考文献：

[1] 中国农药网.今年新增90个苯醚甲环唑相关产品登记[OL]. http：//www.agrichem.cn/news/201382914282678885.shtml.2013-08-29

[2] 刘传德，王培松，王继秋，等.三唑类杀菌剂及其在小麦病害防治中的应用研究进展[J].山东农业大学学报（自然科学版）， 2005，36（1）：157-160.

[3] GB 2763-2012.食品安全国家标准食品中农药最大残留限量[S].

[4] BREITENBUCHER J G， ARIENTI K L， MCCLURE K J. Scope and limitations of solid-supported liquid-liquid extraction for the high-throughput purification of compound libraries[J]. J Comb Chem，2001，3（6）：528-533.

[5] 江玉明，苏元复.液-液萃取中界面乳化现象的研究[J].化工学报，1986（3）：323.

[6] ZHANG Y， CAO H C， JIANG H L. Supported liquid extraction versus liquid–liquid extraction for sample preparation in LC-MS/MS-based bioanalysis[J]. Bioanalysis， 2013， 5（30）： 285-288.

[7] 包建民，马直爽，孙 莹，等.一种以含硅藻土的复合材料为介质的支撑液液萃取柱的制备及其应用[J].色谱，2012，30（8）： 798-803.

[8] 祝伟霞，袁 萍，杨冀州，等.固相支撑液液萃取-平行蒸发前处理技术测定动物源性食品中4种硝基呋喃类代谢物[J].食品科技，2011，36（2）：300-303.

[9] 李晓飞，唐 磊，罗永此，等.固相支撑液液萃取-气相色谱串联质谱法测定血液中8种苯二氮卓类药物[J].刑事技术，2014（2）：27-29.

（责任编辑 周有祥）endprint