喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的HPLC分析

李连强　权红　兰小中

摘要：建立HPLC测定喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]药材中Boeravinone C含量的方法。色谱柱为Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（70∶30，V/V），流速为0.8 mL/min，检测波长294 nm。结果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范围内，线性关系良好（R2=0.999 9）；精确度和准确度良好，平均回收率为97.2%。该方法快速、简单，可用于喜马拉雅紫茉莉药材的质量评价。

关键词：喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色谱

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5536-03

喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]为紫茉莉科植物，其根的藏药名为“阿夏尕那哈”，是传统藏药的五根之一[1]。藏医名著《蓝琉璃》中记载“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒气病、浮肿、黄水病，破结石、肿瘤”。Wang等[2]首先从紫茉莉（M. jalapa L.）根中分离得到了一种鱼藤酮类化合物——Boeravinone C，其结构如图1所示。范海霞[3]也从喜马拉雅紫茉莉根中分离得到了Boeravinone C，并证实Boeravinone C对肺癌细胞株A549、肝癌细胞株Hep G-2、宫颈癌细胞株Hela有较强的抑制作用。本课题组从2007年开始研究喜马拉雅紫茉莉的人工种植，经过近6年探索，已系统掌握了喜马拉雅紫茉莉的人工种植、水肥管理、病虫害防治等关键技术，提高了喜马拉雅紫茉莉的产量，改善了野生喜马拉雅紫茉莉资源匮乏的现状。Boeravinone C有较强的抗肿瘤作用，是喜马拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是测定药用植物有效成分的常用方法[4-7]，本试验建立了喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC测定方法，以期为喜马拉雅紫茉莉的人工种植和药材的质量评价提供方法[8]，为相关的藏药开发和利用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

喜马拉雅紫茉莉药材于2012年9月10日采自西藏林芝地区八一镇章麦村藏药材人工种植与示范基地，经西藏大学农牧学院罗建副研究员鉴定为紫茉莉科植物喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。样品保存于西藏大学农牧学院分子生物学实验室内。

Boeravinone C对照品由西南大学药学院陈敏教授实验室自制（纯度>98%）。甲醇（色谱纯）购于国药集团化学试剂有限公司，去离子水购于杭州娃哈哈集团有限公司

1.2 仪器

岛津LC-20高效液相色谱仪（LC-20AD、DGU-20A3R在线脱气、SIL-20A自动进样器、柱温箱、SPD-20A紫外检测器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋转蒸发器、KQ5200型超声波清洗仪、高速多功能粉碎机BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；检测波长294 nm，柱温25 ℃。

1.3.2 对照品溶液的配制 称取烘干至恒重的对照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制对照品母液；取对照品母液1 mL，用色谱纯甲醇定容至5 mL，得浓度为0.032 4 mg/mL的对照品工作液。

1.3.3 样品前处理 取样品粉碎，过100目筛，烘干至恒重，称取1.000 g左右样品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡数分钟，超声提取2次，每次30 min，过滤，合并滤液，滤液用旋转蒸发仪蒸干后用甲醇定容至2 mL，经0.45 μm滤膜过滤，待测。

2 结果与分析

2.1 方法学分析

取上述对照品溶液，分别进样1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量为横坐标、峰面积为纵坐标，其线性回归方程为Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，线性范围为0.032 4～0.486 0 μg。

取对照品溶液，重复进样6次，每次5 μL，以峰面积计算，其RSD为1.09%，表明精密度良好；取同一批样品5份，按“1.3.3”制备样品溶液并测定含量，其RSD为0.80%，表明重复性良好；取对照品溶液，分别于0～48 h进样5 μL，计算峰面积的RSD为1.95%，表明样品溶液在48 h内稳定。

称取已知含量的喜马拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入对照品母液2.45 mL，按“1.3.3”处理，结果见表1。

2.2 样品测定

喜马拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本试验采集的喜马拉雅紫茉莉为一年生人工种植幼苗，采收时间为2012年9月10日。按“1.3.3”制备样品，并进样分析，对照品溶液及样品溶液的HPLC图见图2。采用外标峰面积法，根据线性回归方程计算，得样品中Boeravinone C含量为0.397 mg/g。

3 小结与讨论

喜马拉雅紫茉莉产于西藏东部和四川西北部，基本呈零星分布，严重制约以喜马拉雅紫茉莉为主要原料的藏药的研究与开发利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法测定了野生和人工种植的喜马拉雅紫茉莉中的黄酮含量，但黄酮类化合物广泛存在于植物中，以总黄酮含量拟定喜马拉雅紫茉莉质量标准略显粗糙。本文建立了喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC测定方法。经方法学考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范围内，与峰面积呈良好线性关系，具有较高的精确度和准确度，平均回收率为97.2%，样品溶液在48 h内稳定。该方法样品制备方法简单，分析时间较短（约20 min），可用于喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的检测。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜马拉雅紫茉莉抗肿瘤的主要活性成分。该方法的建立，可为喜马拉雅紫茉莉的人工种植和药材的质量准确评价提供科学依据。

参考文献：

[1] 陈广迪，冯慎远.藏药五根散对脑外伤后综合征患者智能、记忆力影响的临床观察[J].中国中药杂志，2003，28（1）：90-91.

[2] WANG Y F， CHEN J J， YANG Y Z， et al. New Rotenoids from Roots of Mirabilis jalapa[J]. Helvetica Chimica Acta， 2002， 85（8）： 2342-2348.

[3] 范海霞.喜马拉雅紫茉莉抗肿瘤活性成分研究[D].重庆：西南大学，2012.

[4] 王治平，李卫民，高 英，等.HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量[J].中国实验方剂学杂志，2013， 19（8）：125-128.

[5] 翟 瑶，钟 文，林鹏程.UV法和HPLC法测定藏药多腺悬钩子中总黄酮及芦丁的含量[J].湖北农业科学，2013，52（9）：2144-2145.

[6] 黄秋洁，叶 勇，欧贤红，等.HPLC法测定瑶族藤茶中没食子酸的含量[J].湖北农业科学，2012，52（24）：5764-5765.

[7] 李耀利，尚明英，耿长安，等.云南产青叶胆及其习用品药材中5种成分的HPLC含量测定[J].中国中药杂志，2013，38（9）： 1394-1400.

[8] 王 丹，张秋燕，杨兴鑫，等.基于HPLC指纹图谱的黄芩道地药材与非道地药材的鉴别研究[J].中国中药杂志，2013，38（12）： 1951-1960.

[9] 索朗其美，达瓦潘多，刘 青，等.紫外分光光度法测定西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮含量[J].中国民族医药杂志，2012（4）：60-62.

（责任编辑 周有祥）endprint

摘要：建立HPLC测定喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]药材中Boeravinone C含量的方法。色谱柱为Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（70∶30，V/V），流速为0.8 mL/min，检测波长294 nm。结果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范围内，线性关系良好（R2=0.999 9）；精确度和准确度良好，平均回收率为97.2%。该方法快速、简单，可用于喜马拉雅紫茉莉药材的质量评价。

关键词：喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色谱

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5536-03

喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]为紫茉莉科植物，其根的藏药名为“阿夏尕那哈”，是传统藏药的五根之一[1]。藏医名著《蓝琉璃》中记载“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒气病、浮肿、黄水病，破结石、肿瘤”。Wang等[2]首先从紫茉莉（M. jalapa L.）根中分离得到了一种鱼藤酮类化合物——Boeravinone C，其结构如图1所示。范海霞[3]也从喜马拉雅紫茉莉根中分离得到了Boeravinone C，并证实Boeravinone C对肺癌细胞株A549、肝癌细胞株Hep G-2、宫颈癌细胞株Hela有较强的抑制作用。本课题组从2007年开始研究喜马拉雅紫茉莉的人工种植，经过近6年探索，已系统掌握了喜马拉雅紫茉莉的人工种植、水肥管理、病虫害防治等关键技术，提高了喜马拉雅紫茉莉的产量，改善了野生喜马拉雅紫茉莉资源匮乏的现状。Boeravinone C有较强的抗肿瘤作用，是喜马拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是测定药用植物有效成分的常用方法[4-7]，本试验建立了喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC测定方法，以期为喜马拉雅紫茉莉的人工种植和药材的质量评价提供方法[8]，为相关的藏药开发和利用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

喜马拉雅紫茉莉药材于2012年9月10日采自西藏林芝地区八一镇章麦村藏药材人工种植与示范基地，经西藏大学农牧学院罗建副研究员鉴定为紫茉莉科植物喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。样品保存于西藏大学农牧学院分子生物学实验室内。

Boeravinone C对照品由西南大学药学院陈敏教授实验室自制（纯度>98%）。甲醇（色谱纯）购于国药集团化学试剂有限公司，去离子水购于杭州娃哈哈集团有限公司

1.2 仪器

岛津LC-20高效液相色谱仪（LC-20AD、DGU-20A3R在线脱气、SIL-20A自动进样器、柱温箱、SPD-20A紫外检测器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋转蒸发器、KQ5200型超声波清洗仪、高速多功能粉碎机BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；检测波长294 nm，柱温25 ℃。

1.3.2 对照品溶液的配制 称取烘干至恒重的对照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制对照品母液；取对照品母液1 mL，用色谱纯甲醇定容至5 mL，得浓度为0.032 4 mg/mL的对照品工作液。

1.3.3 样品前处理 取样品粉碎，过100目筛，烘干至恒重，称取1.000 g左右样品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡数分钟，超声提取2次，每次30 min，过滤，合并滤液，滤液用旋转蒸发仪蒸干后用甲醇定容至2 mL，经0.45 μm滤膜过滤，待测。

2 结果与分析

2.1 方法学分析

取上述对照品溶液，分别进样1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量为横坐标、峰面积为纵坐标，其线性回归方程为Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，线性范围为0.032 4～0.486 0 μg。

取对照品溶液，重复进样6次，每次5 μL，以峰面积计算，其RSD为1.09%，表明精密度良好；取同一批样品5份，按“1.3.3”制备样品溶液并测定含量，其RSD为0.80%，表明重复性良好；取对照品溶液，分别于0～48 h进样5 μL，计算峰面积的RSD为1.95%，表明样品溶液在48 h内稳定。

称取已知含量的喜马拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入对照品母液2.45 mL，按“1.3.3”处理，结果见表1。

2.2 样品测定

喜马拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本试验采集的喜马拉雅紫茉莉为一年生人工种植幼苗，采收时间为2012年9月10日。按“1.3.3”制备样品，并进样分析，对照品溶液及样品溶液的HPLC图见图2。采用外标峰面积法，根据线性回归方程计算，得样品中Boeravinone C含量为0.397 mg/g。

3 小结与讨论

喜马拉雅紫茉莉产于西藏东部和四川西北部，基本呈零星分布，严重制约以喜马拉雅紫茉莉为主要原料的藏药的研究与开发利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法测定了野生和人工种植的喜马拉雅紫茉莉中的黄酮含量，但黄酮类化合物广泛存在于植物中，以总黄酮含量拟定喜马拉雅紫茉莉质量标准略显粗糙。本文建立了喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC测定方法。经方法学考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范围内，与峰面积呈良好线性关系，具有较高的精确度和准确度，平均回收率为97.2%，样品溶液在48 h内稳定。该方法样品制备方法简单，分析时间较短（约20 min），可用于喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的检测。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜马拉雅紫茉莉抗肿瘤的主要活性成分。该方法的建立，可为喜马拉雅紫茉莉的人工种植和药材的质量准确评价提供科学依据。

参考文献：

[1] 陈广迪，冯慎远.藏药五根散对脑外伤后综合征患者智能、记忆力影响的临床观察[J].中国中药杂志，2003，28（1）：90-91.

[2] WANG Y F， CHEN J J， YANG Y Z， et al. New Rotenoids from Roots of Mirabilis jalapa[J]. Helvetica Chimica Acta， 2002， 85（8）： 2342-2348.

[3] 范海霞.喜马拉雅紫茉莉抗肿瘤活性成分研究[D].重庆：西南大学，2012.

[4] 王治平，李卫民，高 英，等.HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量[J].中国实验方剂学杂志，2013， 19（8）：125-128.

[5] 翟 瑶，钟 文，林鹏程.UV法和HPLC法测定藏药多腺悬钩子中总黄酮及芦丁的含量[J].湖北农业科学，2013，52（9）：2144-2145.

[6] 黄秋洁，叶 勇，欧贤红，等.HPLC法测定瑶族藤茶中没食子酸的含量[J].湖北农业科学，2012，52（24）：5764-5765.

[7] 李耀利，尚明英，耿长安，等.云南产青叶胆及其习用品药材中5种成分的HPLC含量测定[J].中国中药杂志，2013，38（9）： 1394-1400.

[8] 王 丹，张秋燕，杨兴鑫，等.基于HPLC指纹图谱的黄芩道地药材与非道地药材的鉴别研究[J].中国中药杂志，2013，38（12）： 1951-1960.

[9] 索朗其美，达瓦潘多，刘 青，等.紫外分光光度法测定西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮含量[J].中国民族医药杂志，2012（4）：60-62.

（责任编辑 周有祥）endprint

摘要：建立HPLC测定喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]药材中Boeravinone C含量的方法。色谱柱为Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（70∶30，V/V），流速为0.8 mL/min，检测波长294 nm。结果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范围内，线性关系良好（R2=0.999 9）；精确度和准确度良好，平均回收率为97.2%。该方法快速、简单，可用于喜马拉雅紫茉莉药材的质量评价。

关键词：喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色谱

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5536-03

喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]为紫茉莉科植物，其根的藏药名为“阿夏尕那哈”，是传统藏药的五根之一[1]。藏医名著《蓝琉璃》中记载“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒气病、浮肿、黄水病，破结石、肿瘤”。Wang等[2]首先从紫茉莉（M. jalapa L.）根中分离得到了一种鱼藤酮类化合物——Boeravinone C，其结构如图1所示。范海霞[3]也从喜马拉雅紫茉莉根中分离得到了Boeravinone C，并证实Boeravinone C对肺癌细胞株A549、肝癌细胞株Hep G-2、宫颈癌细胞株Hela有较强的抑制作用。本课题组从2007年开始研究喜马拉雅紫茉莉的人工种植，经过近6年探索，已系统掌握了喜马拉雅紫茉莉的人工种植、水肥管理、病虫害防治等关键技术，提高了喜马拉雅紫茉莉的产量，改善了野生喜马拉雅紫茉莉资源匮乏的现状。Boeravinone C有较强的抗肿瘤作用，是喜马拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是测定药用植物有效成分的常用方法[4-7]，本试验建立了喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC测定方法，以期为喜马拉雅紫茉莉的人工种植和药材的质量评价提供方法[8]，为相关的藏药开发和利用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

喜马拉雅紫茉莉药材于2012年9月10日采自西藏林芝地区八一镇章麦村藏药材人工种植与示范基地，经西藏大学农牧学院罗建副研究员鉴定为紫茉莉科植物喜马拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。样品保存于西藏大学农牧学院分子生物学实验室内。

Boeravinone C对照品由西南大学药学院陈敏教授实验室自制（纯度>98%）。甲醇（色谱纯）购于国药集团化学试剂有限公司，去离子水购于杭州娃哈哈集团有限公司

1.2 仪器

岛津LC-20高效液相色谱仪（LC-20AD、DGU-20A3R在线脱气、SIL-20A自动进样器、柱温箱、SPD-20A紫外检测器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋转蒸发器、KQ5200型超声波清洗仪、高速多功能粉碎机BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；检测波长294 nm，柱温25 ℃。

1.3.2 对照品溶液的配制 称取烘干至恒重的对照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制对照品母液；取对照品母液1 mL，用色谱纯甲醇定容至5 mL，得浓度为0.032 4 mg/mL的对照品工作液。

1.3.3 样品前处理 取样品粉碎，过100目筛，烘干至恒重，称取1.000 g左右样品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡数分钟，超声提取2次，每次30 min，过滤，合并滤液，滤液用旋转蒸发仪蒸干后用甲醇定容至2 mL，经0.45 μm滤膜过滤，待测。

2 结果与分析

2.1 方法学分析

取上述对照品溶液，分别进样1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量为横坐标、峰面积为纵坐标，其线性回归方程为Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，线性范围为0.032 4～0.486 0 μg。

取对照品溶液，重复进样6次，每次5 μL，以峰面积计算，其RSD为1.09%，表明精密度良好；取同一批样品5份，按“1.3.3”制备样品溶液并测定含量，其RSD为0.80%，表明重复性良好；取对照品溶液，分别于0～48 h进样5 μL，计算峰面积的RSD为1.95%，表明样品溶液在48 h内稳定。

称取已知含量的喜马拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入对照品母液2.45 mL，按“1.3.3”处理，结果见表1。

2.2 样品测定

喜马拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本试验采集的喜马拉雅紫茉莉为一年生人工种植幼苗，采收时间为2012年9月10日。按“1.3.3”制备样品，并进样分析，对照品溶液及样品溶液的HPLC图见图2。采用外标峰面积法，根据线性回归方程计算，得样品中Boeravinone C含量为0.397 mg/g。

3 小结与讨论

喜马拉雅紫茉莉产于西藏东部和四川西北部，基本呈零星分布，严重制约以喜马拉雅紫茉莉为主要原料的藏药的研究与开发利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法测定了野生和人工种植的喜马拉雅紫茉莉中的黄酮含量，但黄酮类化合物广泛存在于植物中，以总黄酮含量拟定喜马拉雅紫茉莉质量标准略显粗糙。本文建立了喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC测定方法。经方法学考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范围内，与峰面积呈良好线性关系，具有较高的精确度和准确度，平均回收率为97.2%，样品溶液在48 h内稳定。该方法样品制备方法简单，分析时间较短（约20 min），可用于喜马拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的检测。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜马拉雅紫茉莉抗肿瘤的主要活性成分。该方法的建立，可为喜马拉雅紫茉莉的人工种植和药材的质量准确评价提供科学依据。

参考文献：

[1] 陈广迪，冯慎远.藏药五根散对脑外伤后综合征患者智能、记忆力影响的临床观察[J].中国中药杂志，2003，28（1）：90-91.

[2] WANG Y F， CHEN J J， YANG Y Z， et al. New Rotenoids from Roots of Mirabilis jalapa[J]. Helvetica Chimica Acta， 2002， 85（8）： 2342-2348.

[3] 范海霞.喜马拉雅紫茉莉抗肿瘤活性成分研究[D].重庆：西南大学，2012.

[4] 王治平，李卫民，高 英，等.HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量[J].中国实验方剂学杂志，2013， 19（8）：125-128.

[5] 翟 瑶，钟 文，林鹏程.UV法和HPLC法测定藏药多腺悬钩子中总黄酮及芦丁的含量[J].湖北农业科学，2013，52（9）：2144-2145.

[6] 黄秋洁，叶 勇，欧贤红，等.HPLC法测定瑶族藤茶中没食子酸的含量[J].湖北农业科学，2012，52（24）：5764-5765.

[7] 李耀利，尚明英，耿长安，等.云南产青叶胆及其习用品药材中5种成分的HPLC含量测定[J].中国中药杂志，2013，38（9）： 1394-1400.

[8] 王 丹，张秋燕，杨兴鑫，等.基于HPLC指纹图谱的黄芩道地药材与非道地药材的鉴别研究[J].中国中药杂志，2013，38（12）： 1951-1960.

[9] 索朗其美，达瓦潘多，刘 青，等.紫外分光光度法测定西藏野生和人工种植喜马拉雅紫茉莉中总黄酮含量[J].中国民族医药杂志，2012（4）：60-62.

（责任编辑 周有祥）endprint