葛根素与阿片类药物联合应用对神经病理性痛的镇痛作用

段美婷，王 婧，余 婧，王军阳＊（.西安交通大学医学部免疫学与病原生物学系，西安 7006；2.陕西省妇幼保健院医学实验中心，西安 70003）

葛根素与阿片类药物联合应用对神经病理性痛的镇痛作用

段美婷1，2，王 婧1，余 婧1，王军阳1＊（1.西安交通大学医学部免疫学与病原生物学系，西安 710061；2.陕西省妇幼保健院医学实验中心，西安 710003）

目的 观察葛根素与阿片类药物联合应用对坐骨神经慢性压迫性损伤（chronic constriction injury，CCI）模型小鼠的镇痛作用，为慢性神经病理性痛的治疗及复方镇痛药的研发奠定基础。方法 采用铬肠线限制性环扎小鼠右侧坐骨神经建立CCI神经病理性痛模型，热板法测定葛根素（60mg·kg－1）、吗啡（10mg·kg－1）和曲马多（40mg·kg－1）单独或者小剂量联合腹腔注射对模型小鼠患侧脚掌缩足潜伏期的影响。结果 单独注射葛根素、吗啡或曲马多均可显著提高CCI模型小鼠患侧脚掌的缩足潜伏期，产生明显的镇痛作用。葛根素与吗啡或曲马多小剂量联合应用后，也可明显提高模型小鼠的缩足潜伏期，但不同组合的镇痛效应不同，其中30mg·kg－1葛根素与5mg·kg－1吗啡或20mg·kg－1曲马多联合应用的镇痛作用最强，其镇痛效应明显高于60mg·kg－1葛根素注射组，但与10mg·kg－1吗啡或40mg·kg－1曲马多所产生的镇痛效应比较，差异无统计学意义。结论 葛根素与吗啡或曲马多小剂量联合应用可用于慢性神经病理性痛的临床治疗。

葛根素；吗啡；曲马多；联合给药；神经病理性痛

神经病理性痛是外周或中枢神经系统损伤或疾病引起的疼痛综合征，以自发性疼痛、痛觉过敏和痛觉超敏为特征，严重影响着人类的健康和生存质量。由于神经病理性痛的发病机制目前尚不完全清楚，长期以来临床治疗疼痛主要依赖于阿片类药物，由于特异性不高，常引起毒性和不良反应，如药物依赖、呼吸抑制、恶心、呕吐、幻觉等。镇痛药物的联合应用不但能够增强镇痛作用，而且可以减少不良反应的发生，但目前镇痛药物联合应用的研究相对较少。因此，本研究拟在以往研究发现葛根素对神经病理性痛具有镇痛作用的基础上［1］，进一步探讨葛根素与吗啡或曲马多小剂量联合应用对坐骨神经慢性压迫性损伤（chronic constriction injury，CCI）模型小鼠的镇痛作用，为慢性神经病理性痛的临床治疗及复方镇痛药的研发奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 YLS－21A冷热板测痛仪（济南益延科技发展有限公司）。

1.2 试药 葛根素注射液（山东方明药业集团股份有限公司，批号1304127）；盐酸吗啡（沈阳第一制药厂，批号100903－2）；曲马多（通化兴华药业有限公司，批号13070795）；乌拉坦（上海山浦化工有限公司，批号20070820）。

1.3 动物 雌性昆明小鼠（18～20g），由西安交通大学实验动物中心提供。

2 方法

2.1 CCI模型的建立 参照文献报道的方法［2－3］。小鼠腹腔注射乌拉坦（1.4g·kg－1）麻醉后，切开右后肢上部皮肤，钝性分离股二头肌，暴露坐骨神经主干。用8－0铬制羊肠线在坐骨神经上轻轻结扎3个单结，结扎环间隔1mm，结扎扣的松紧程度以右后肢出现轻微收缩为宜。手术完成后，分层缝合肌肉和皮肤，腹腔注射青霉素预防感染。术后1周进行热板实验。

2.2 实验分组及给药方法 将CCI模型小鼠随机分为10组，每组8只，分别为生理盐水对照组，60 mg·kg－1葛根素组，10mg·kg－1吗啡组，40 mg·kg－1曲马多组，45mg·kg－1葛根素＋2.5 mg·kg－1吗啡组，30mg·kg－1葛根素＋5 mg·kg－1吗啡组，15mg·kg－1葛根素＋7.5 mg·kg－1吗啡组，45mg·kg－1葛根素＋10 mg·kg－1曲马多组，30mg·kg－1葛根素＋20 mg·kg－1曲马多组，15mg·kg－1葛根素＋30 mg·kg－1曲马多组。所有药物均通过腹腔注射。

2.3 热板实验 参照文献报道的方法［4－5］。将CCI模型小鼠放置在面板温度为55±0.3°C的冷热板测痛仪上，以抬足或舔足作为疼痛反应指标，动态测定小鼠给药前和给药后15，30，45，60，75和90min患侧脚掌的缩足潜伏期（s）。每个观察时间点测2次（间隔2min），取其平均值作为痛觉阈值。

3 实验结果

3.1 CCI诱导的热痛觉过敏 手术1周后，利用热板法测定CCI模型小鼠的平均缩足潜伏期为6.85± 0.40s，明显低于对照组小鼠的缩足潜伏期13.19± 0.50s，One－way ANOVA分析显示，差异具有统计学意义（P＜0.01），提示CCI神经病理性痛模型小鼠建立成功。

3.2 葛根素与吗啡联合应用对CCI模型小鼠的镇痛作用 见表1。表1结果显示，腹腔单独注射60 mg·kg－1葛根素或10mg·kg－1吗啡，均可显著提高CCI模型小鼠患侧脚掌的缩足潜伏期，产生明显的镇痛作用，与生理盐水对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。葛根素与吗啡小剂量联合应用同样可提高CCI模型小鼠的缩足潜伏期，产生明显的镇痛效应，但不同组合的镇痛效应不同，其中30 mg·kg－1葛根素与5mg·kg－1吗啡联合应用的镇痛效应最强，维持时间最长，达到75min，其镇痛效应明显高于60mg·kg－1葛根素注射组（P＜0.01），但与10mg·kg－1吗啡注射组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 葛根素与吗啡联合应用对CCI模型小鼠的镇痛作用Tab.1 Analgesic effect of combined administration of puerarin and morphine on CCI mice ±s，n＝8）

表1 葛根素与吗啡联合应用对CCI模型小鼠的镇痛作用Tab.1 Analgesic effect of combined administration of puerarin and morphine on CCI mice ±s，n＝8）

注：与生理盐水对照组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

药物 剂量／mg·kg－1给药前／s给药后不同时间（min）小鼠的缩足潜伏期／s15 30 45 60 75 90生理盐水 — 6.61±0.10 7.06±0.11 6.69±0.12 6.66±0.13 6.55±0.12 6.74±0.15 6.80±0.10葛根素 60 6.18±0.25 9.47±0.46＊＊10.34±0.29＊＊ 9.68±0.20＊＊ 9.17±0.18＊＊ 6.98±0.36 6.03±0.23吗啡 10 6.98±0.48 9.88±0.73＊＊11.69±0.57＊＊10.08±0.38＊＊10.12±0.29＊＊ 9.08±0.34＊＊8.02±0.61葛根素＋45＋2.5 6.63±0.14 9.52±0.59＊＊10.76±0.21＊＊ 9.73±0.48＊＊ 8.85±0.43＊＊ 7.63±0.39 6.89±0.15吗啡 30＋5.0 6.58±0.22 11.87±0.48＊＊12.79±0.80＊＊10.99±0.22＊＊10.66±0.52＊＊10.18±0.81＊＊8.78±0.78 15＋7.5 7.27±0.21 12.61±0.56＊＊12.19±0.28＊＊10.86±0.29＊＊10.44±0.23＊＊8.52±0.41 7.93±0.60

3.3 葛根素与曲马多小剂量联合应用对CCI模型小鼠的镇痛作用 见表2。表2结果显示，腹腔单独注射60mg·kg－1葛根素或40mg·kg－1曲马多，均可显著提高CCI模型小鼠患侧脚掌的缩足潜伏期，产生明显的镇痛作用，与生理盐水对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。葛根素与曲马多小剂量联合应用同样可提高CCI模型小鼠的缩足潜伏期，产生明显的镇痛效应，但不同组合的镇痛效应不同，其中30mg·kg－1葛根素与20mg·kg－1曲马多联合应用的镇痛作用最强，其镇痛效应明显高于60mg·kg－1葛根素注射组（P＜0.01），但与40mg·kg－1曲马多注射组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 葛根素与曲马多小剂量联合应用对CCI模型小鼠的镇痛作用Tab.2 Analgesic effect of combined administration of puerarin and small dose of tanmadol on CCI mice （±s，n＝8）

表2 葛根素与曲马多小剂量联合应用对CCI模型小鼠的镇痛作用Tab.2 Analgesic effect of combined administration of puerarin and small dose of tanmadol on CCI mice （±s，n＝8）

注：与生理盐水对照组比较＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

药物 剂量／mg·kg－1 给药前／s 给药后不同时间（min）小鼠的缩足潜伏期／s 15 30 45 60 75 90生理盐水 － 6.61±0.10 7.06±0.11 6.69±0.12 6.66±0.13 6.55±0.12 6.74±0.15 6.80±0.10葛根素 60 6.18±0.25 9.47±0.46＊＊10.34±0.29＊＊ 9.68±0.20＊＊ 9.17±0.18＊＊ 6.98±0.36 6.03±0.23曲马多 40 7.18±0.09 12.97±0.24＊＊11.26±0.43＊＊ 9.63±0.32＊＊ 8.75±0.41＊＊ 7.66±0.38 7.07±0.14葛根素＋ 45＋10 6.50±0.15 12.34±0.66＊＊12.81±0.39＊＊ 9.89±0.32＊＊ 8.78±0.30＊＊ 8.04±0.13 6.83±0.09曲马多 30＋20 7.05±0.11 13.12±0.73＊＊12.38±0.72＊＊10.48±0.50＊＊ 8.36±0.29＊ 7.71±0.34 7.49±0.20 15＋30 7.09±0.25 11.66±0.28＊＊11.65±0.45＊＊ 8.92±0.37＊＊ 8.30±0.06＊8.03±0.12 7.43±0.18

4 讨论

阿片类药物是临床治疗慢性神经病理性痛的首选药物，但由于其不良反应较常见，长期应用易发生耐受和成瘾等，因而极大地限制了此类药物在疼痛治疗中的应用。葛根素是从中药葛根中提取的一种异黄酮化合物，具有扩张冠状动脉、降血压、降血脂、保护心肌及抗氧化、抗血栓形成、改善微循环以及提高免疫功能等多种药理活性［6］，临床主要用于治疗心血管系统疾病。近年来研究表明，葛根素对烧伤引起的急性痛及慢性神经病理性痛模型大鼠具有明显的镇痛作用，其镇痛机制主要是通过抑制大鼠DRG神经元细胞以及外周血单核细胞的ATP受体（P2X3和P2X2／3）表达来实现的［1，7－9］。但长期大剂量使用葛根素容易引起发热、溶血、变态反应、肝肾功能损害和心衰等不良反应。因此，本研究观察了葛根素与阿片类镇痛药物小剂量联合应用对神经病理性痛的镇痛效果，以期为临床治疗病理性痛寻求镇痛效果好并且毒性和不良反应小的复方镇痛药物。

研究结果显示：葛根素、吗啡或曲马多单独使用均可对CCI模型小鼠产生明显的镇痛作用。葛根素与吗啡小剂量联合应用也可产生镇痛作用，但3种不同剂量的组合方案所产生的镇痛效应强弱不同，其中30mg·kg－1葛根素与5mg·kg－1吗啡联合应用的镇痛效应最强，与单独注射10mg·kg－1吗啡的镇痛效应比较，差异无统计学意义。同样，葛根素和曲马多小剂量联合应用也可产生明显的镇痛作用，3种不同组合方案中以30mg·kg－1葛根素与20mg·kg－1曲马多联合应用的镇痛效应最强。该研究结果提示，葛根素与吗啡或曲马多小剂量联合应用，既能利用效应的叠加或协同作用产生理想的镇痛效果，又能降低阿片类药物和葛根素的用量从而减少不良反应的发生。该研究不但为临床治疗慢性神经病理性痛提供了新的思路，也为新型复方镇痛药物的研发奠定了基础。参考文献：

［1］ 罗敬华，曾晓艳，范桂香，等.葛根素对神经病理性痛模型小鼠的镇痛作用［J］.西北药学杂志，2013，28（1）：48－50.

［2］ 张倩，曾晓艳，王婧，等.不同镇痛药物对坐骨神经压迫性损伤模型小鼠的镇痛作用［J］.西北药学杂志，2013，28（4）：385－388.

［3］ Bennett G J，Xie Y K.A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man［J］.Pain，1988，33（1）：87－107.

［4］ 张盼，梁建辉，叶向锋.L－型钙通道阻断剂对曲马多镇痛作用的影响［J］.中国药理学通报，2004，20（9）：976－980.

［5］ 赵铭，朱少非，刘静，等.乌藤镇痛胶囊的镇痛、抗炎作用及对血流变性的影响［J］.西北药学杂志，2007，22（3）：121－124.

［6］ 钟保恒.葛根素药理研究现状［J］.中国民族民间医药，2009，16（3）：16－18.

［7］ Li X，Zhang J，Gao Y，et al.Puerarin alleviates burnrelated procedural pain mediated by P2X3receptors［J］.Purinerg Signal，2011，7（4）：489－497.

［8］ Liang S，Xu C，Li G，et al.P2Xreceptors and modulation of pain transmission：focus on effects of drugs and compounds used in traditional Chinese medicine［J］.Neurochem Int，2010，57（7）：705－712.

［9］ Xu C，Li G，Gao Y，et al.Effect of puerarin on P2X3receptor involved in hyperalgesia after burn injury in the rat［J］.Brain Res Bull，2009，80（6）：341－346.

Analgesic effect of combined administration of puerarin and opioids on neuropathic pain

DUAN Meiting1，2，WANG Jing1，YU Jing1，WANG Junyang1＊（1.Department of Immunology and Pathogenic Biology，Health Science Center，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；2.Laboratory Center of Shaanxi Provincial Maternal and Child Health Hospital，Xi′an 710003，China）

Objective To investigate the analgesic effect of combined administration of puerarin and opioids on mice with chronic constriction injury（CCI）of the sciatic nerve，and lay a foundation for the treatment of chronic pathological pain and the development of compound analgesics.Methods After the establishment of CCI neuropathic pain mouse by restrictive ligation of right sciatic nerve with chromic catgut，hot plate test was used to measure the ipsilateral paw withdrawal latency of CCI mice before and after single or combined injection of puerarin（60mg·kg－1），morphine（10mg·kg－1）and tramadol（40mg·kg－1）.Results A single injection of puerarin，morphine or tramadol significantly improved the ipsilateral paw withdrawal latency of CCI mice and produced an obvious analgesic effect.Combined application of puerarin with morphine or tramadol at small doses also improved the paw withdrawal latency of CCI mice，but the analgesic effects produced by different combination groups were different.Combined application of 30mg·kg－1puerarin with 5mg·kg－1morphine or 20mg·kg－1tramadol showed the highest analgesic effect，which was higher than that of 60mg·kg－1puerarin but did not show statistical significance compared with that of 10mg·kg－1morphine or 40mg·kg－1tramadol.Conclusion Combined administration of puerarin with morphine or tramadol at small doses is workable for the clinical treatment of chronic neuropathic pain.

puerarin；morphine；tramadol；combined administration；neuropathic pain

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.018

R965

A

1004－2407（2015）02－0162－03

2014－09－06）

教育部留学回国人员启动基金（10回国基金15）

段美婷，女，在读硕士研究生

＊通信作者：王军阳，男，副教授，硕士生导师