SATB1 基因在肝癌细胞中的表达及其临床意义*

司马学琴，杨春荣

(1.湖北科技学院基础医学院，湖北 咸宁 437100;2.宜昌市中心人民医院病理科)

肝癌是临床上一种常见的消化系统恶性肿瘤，具有发病隐匿、进展快、恶性程度高、预后差、复发率高、死亡率高等特点，为世界十大恶性肿瘤之一。目前，临床治疗肝癌采用以手术治疗为主的综合治疗方案，但患者复发率及死亡率仍然较高。因此，对患者治疗及预后有重要价值的观察指标成为肝癌临床研究的热点。研究发现特异富含AT 序列结合蛋白1(SATB1)与多种肿瘤的发生、发展、转移等生物学行为具有一定相关性［1，2］。本文旨在研究SATB1 在肝癌细胞中的表达及其临床意义。

1 材料与方法

1.1 实验材料 选取2010 年1 月至2012 年1 月于宜昌市中心人民医院手术治疗的肝癌患者78例，术前没有放疗和化疗。男42例，女36例;年龄38～76岁。HbsAg(+)69例;肿瘤数目1～6 个;直径2～9cm，直径＜5cm 33例，5cm 及以上45例;包膜完整65例，伴肝硬化70例，癌栓9例。分化程度:高分化32例，中分化27例，低分化19例。TNM 分级:Ⅰ级18例，Ⅱ级43例，Ⅲ级17例。复发时间＜6 个月9例，6个月至2 年14例，无复发55例。所有患者在手术过程中均经病理检查确诊，留取癌组织标本及部分癌旁组织标本各1 份。另取20 份正常肝脏组织标本，所有患者均经病理检查确诊。

1.2 试剂与仪器 Trizol RNA 抽提试剂盒，MBI Fermentas 公司逆转录cDNA 第一链合成试剂盒。美国ABI 公司系列产品:ABI7500PCR 仪、DU800 紫外分光光度计;上海仕博公司H6-1 微型电泳仪。

1.3 实验方法 按RNA 抽提试剂盒及逆转录试剂盒实验流程提取组织样本SATB1 mRNA 合成样本相应cDNA。引物由上海基康生物技术有限公司合成:SATB1 上游引物5＇-AGGAAAACCGACAGAAGAC-3＇，下游引物为5＇-ACTGAACCTGACCGTACACCCACGTCT TGTATGAAACT-3＇，片段长度256bp;内参GAPDH 上游引物为5＇-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 ＇，下游引物为 5 ＇-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3＇，片段长度138bp。反应体系如下:cDNA 2μl、0.6μmol/L 上游引物0.4μl、0.6μmol/L 下游引物0.4μl、SYBR Green I 10μl、ROX Reference Dye Ⅱ0.4μl、DEPC 水6.8μl，总反应体积为20μl。扩增条件如下:95℃预变性3min、95℃变性30s、64℃退火34s，40 循环。每次试验均设置1 个阳性、阴性、空白对照。

1.4 SATB1 表达相对定量分析 实时荧光定量PCR 检测样本中SATB1 和GAPDH 的mRNA 表达水平，根据公式CTSATB1=CtSATB1/CtGAPDH，计算出癌组织和正常组织中SATB1 相对于GAPDH 的相对值。并分析不同组织中SATB1 表达差异;根据SATB1 表达水平将肝癌患者分为高表达组和低表达组，相对表达量≥0.105 视为高表达，相对表达量＜0.105 视为低表达，比较两组患者复发率及生存率，分析其危险因素。

1.5 统计学方法 采用SPSS 18.0 统计学软件进行数据处理，计量资料采用t 检验，SATB1 与临床病理学参数的相关性用卡方检验。P ＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肝癌组织和正常肝组织中SATB1 mRNA 相对表达量比较 在肝癌组织及正常肝组织中均可检测到SATB1 mRNA 的表达。癌组织中SATB1 mRNA 表达水平(0.196±0.045)明显高于正常肝组织(0.052±0.035)，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

2.2 SATB1 表达水平与肝癌临床病理学参数的关系 结果显示，肿瘤大小、癌栓、分化程度、TNM分级与SATB1 相关，SATB1 表达水平与复发无相关性。详见表1。

表1 SATB1 相对表达量与临床病理学参数的关系

3 讨论

SATB1 是一种核基质结合区结合蛋白，可以独特模式识别与核基质结合区结合，可参与组织特异性基因表达调控及染色质高级结构形成过程，并可通过多种途径调控全基因组基因的表达。SATB1 可促进T 细胞凋亡，下调中性粒细胞吞噬功能及免疫功能，促进肿瘤复发，诱导肿瘤出现侵袭性表型，进而促进肿瘤的生长及转移［3］。

彭正奎等［4］研究认为SATB1 蛋白表达可参与肝细胞癌的复发转移过程。有研究［5］表明运用生物学技术方法RNA 干扰敲除SATB1 基因，可以抑制肝癌细胞增值及其远处转移能力，证明SATB1 能作为肝癌早期诊断指标之一，在肝癌细胞转移和侵袭中发挥重要作用。在本研究中，SATB1 mRNA 相对表达水平在癌组织中明显高于正常肝细胞组织(P ＜0.05)，说明SATB1 在癌组织中表达水平明显升高;卡方检验分析表明SATB1mRNA 相对表达水平与患者肿瘤大小、病理分化程度、TNM 分级等参数呈正相关性，与患者复发没有明显相关性。鉴于本次研究的局限，需要更多的标本做样本研究，以及后续细胞生物学行为及动物实验的深入研究，确立SATB1 基因与肝癌发生发展的相关性。

目前对于SATB1 研究较多，但其对基因表达调控、对细胞凋亡影响及其与肿瘤间相关性仍不是很明确，许多问题及机理仍需进一步研究证明［6～8］。随着肿瘤分子靶向治疗的不断发展与完善，SATB1 表达对肝癌治疗及预后判断将成为未来研究热点［9］。综上所述，SATB1 在肝癌组织中表达水平高，与患者肿瘤大小、癌栓、病理分化程度、TNM 分级有关，可能参与肝癌发展进程，对患者预后及转归具有重要提示价值，亦可能为肝癌治疗提供新的治疗靶点。

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