腹可安片的质量标准研究

刘 艳 ，薛非凡(1.襄阳市食品药品检验所药化室，湖北襄阳 44101;.襄阳市食品药品监督管理局药品化妆品生产流通监管科，湖北 襄阳 44101)

腹可安片可清热利湿，收敛止痛，用于急性胃肠炎，消化不良引起的腹痛、腹泻、呕吐，原标准只有理化鉴别，无含量测定［1］。经研究，现增加了扭肚藤、车前草、石榴皮、火炭母的薄层鉴别。相关文献报道，腹可安片的含量测定方法有高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)法测定救必应及紫丁香苷的含量［2-4］。由于救必应在药理作用中发挥作用较小，现改选用腹可安片中的君药扭肚藤中的主要成分东莨菪内酯和石榴皮、火炭母中的主要成分没食子酸的含量作为药效成分为检测指标，建立分析方法。经试验选择HPLC 法主峰与杂质峰达到基线分离，峰形较好，阴性无干扰，能更有效地控制本品质量，现报告如下。

1 仪器与试药

岛津LC-10A 高效液相色谱仪;SPD-10AVP 紫外检测器，CBM-102 工作站;熊果酸对照品:中国药品生物制品检定所，批号:110742-200516;东莨菪内酯对照品:中国药品生物制品检定所，批号:110753-2000413;没食子酸对照品:中国药品生物制品检定所，批号:110831-2003025。腹可安片，珠海正太制药有限公司，批号20121101、20121102、20121103。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 扭肚藤、车前草:取腹可安片10 片，除去糖衣，研细，加乙醇30 ml，超声处理使其充分溶解，滤过，滤液挥至1 ml 作为供试品溶液。按处方称取缺扭肚藤、车前草的其他药材制成阴性样品。另取东莨菪内酯对照品、熊果酸对照品加甲醇制成含1 mg/ml 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μl，对照品溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-甲酸乙酯(V∶V=2∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与东莨菪内酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，见图1。喷以10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，供试品色谱中在与熊果酸对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，见图2。

2.1.2 石榴皮、火炭母:取本品10 片，除去糖衣，研细，加50%甲醇50 ml，加热回流30 min，滤过，滤液挥干，残渣加水10 ml 使其溶解，用乙酸乙酯提取40 ml 提取，滤液挥至1 ml做为供试品溶液。按处方称取缺石榴皮、火炭母的其他药材制备阴性对照溶液。另取没食子酸对照品加乙酸乙酯制成每1 ml 含1 mg 的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验［5］，吸取供试品溶液和对照品溶液各6 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(V∶V∶V =7∶4∶1)为展开剂，展开，晾干，喷以2%的三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中在与没食子酸对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，见图3。

图1 扭肚藤、车前草紫外光灯下检视图Fig 1 Detection diagram of J. elongatum，P.asiatica L. under ultraviolet lamp

图2 扭肚藤、车前草喷硫酸乙醇加热显色图Fig 2 Coloration diagram of J. elongatum，P.asiatica L. with heating spray of ethanol sulfate

2.2 含量测定方法

图3 石榴皮、火炭母薄层色谱图Fig 3 TLC of P． granati and Chinese knotweed herb

2.2.1 东莨菪内酯含量测定方法:(1)色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水-冰醋酸(V∶V∶V=13∶87∶1)为流动相;检测波长为345 nm，进样量10 μl［6-9］。(2)对照品溶液的制备:取东莨菪内酯对照品加甲醇制成每1 ml 含20 μg 的溶液。(3)阴性对照溶液:按处方称取缺扭肚藤的其他药材，按制备工艺制成缺扭肚藤的阴性对照溶液。(4)供试品溶液的制备:取本品除去糖衣的粉末2 g，精密称定，加80%乙醇100 ml，滤过，置水浴上蒸至无醇味，用二氯甲烷提取3 次，每次20 ml，合并二氯甲烷液，在80 ℃水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度。(5)准确度:取本品除去糖衣的粉末0.5 g(9 份)，精密称定，置50 ml 容量瓶中，加80%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液25 ml 至蒸发皿中，在水浴上蒸至约5 ml，用二氯甲烷提取3 次，每次20 ml，合并二氯甲烷液，在80 ℃水浴上蒸干，加甲醇溶解并转移至10 ml 量瓶中，每份分别加入东莨菪内酯对照品溶液(34.4 μg/ml)2.00、3.00、4.00 ml 各3 份，用甲醇稀释至刻度，即得。照含量测定项下操作，测定东莨菪内酯的含量，计算回收率，结果见表1。表1 显示，加样回收试验的回收率为(100.64 ±1.07)%，符合定量要求。(6)专属性:取缺扭肚藤阴性样品1 g，照含量测定项下操作，在与主峰保留时间处无吸收峰，在上述条件下，对照品保留时间与峰形均理想，样品中主峰能与其他峰很好分离，见图4，说明阴性无干扰。(7)线性与范围:精密称取东莨菪内酯对照品适量，用甲醇制成每1 ml 含东莨菪内酯172 μg/ml 的溶液，取此溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 ml，东莨菪内酯的量分别为3.44、6.88、13.76、27.52、41.28 μg/ml，测定峰面积(A)分别为190 238.3、355 845.2、706 084.0、1 407 506.0、2 096 181.0，以东莨菪内酯的量与峰面积进行线性回归，得方程Y=50 518.74X+12 734.72;r=0.999 9(n=5)，结果显示，本品在3.44 ～41.28 μg/ml 浓度范围内呈线性。

表1 东莨菪内酯的加样回收试验结果Tab 1 Test results of recovery of scopoletin

图4 东莨菪内酯的高效液相色谱图Fig 4 HPLC chromatogram of scopoletin

2.2.2 没食子酸含量测定方法:(1)色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.5%冰醋酸(V∶V =7∶93)为流动相;检测波长为270 nm，进样量10 μl［10-14］。(2)对照品溶液的制备:取没食子酸对照品加50% 甲醇制成每1 ml 含45 μg 的溶液。(3)阴性对照溶液:按处方称取缺石榴皮、火炭母的其他药材，按制备工艺制成阴性对照溶液。(4)供试品溶液的制备:取本品除去糖衣，研细，取粉末0.25 g，精密称定，置50 ml 量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度。(5)准确度:取本品除去糖衣，研细，取粉末0.125 g(9 份)，精密称定，置50 ml量瓶中，每份分别加入没食子酸对照品溶液(458.2 μg/ml)2.00、3.00、5.00 ml 各3 份，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。照含量测定项下操作，测定没食子酸的含量，计算回收率，结果见表2。表2 显示，加样回收试验的回收率为(99.73 ±0.52)%，符合定量要求。(6)专属性:取缺石榴皮、火炭母阴性样品0.25 g，照含量测定项下操作，在与主峰保留时间处无吸收峰，在上述条件下，对照品保留时间与峰形均理想，样品中主峰能与其他峰很好分离，见图5，说明阴性无干扰。(7)线性与范围:精密称取没食子酸对照品适量，用50%甲醇制成每1 ml 含没食子酸0.526 mg/ml 的溶液，取此溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml 分别置25 ml 量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，没食子酸量分别为10.52、21.04、31.56、42.08、52.60、63.12 μg/ml，测定峰面积(A)分别为392 255.3、769 573.3、1 169 866.1、1 569 496.7、1 964 646.0、2 361 502.1，以没食子酸量与峰面积进行线性回归，得方程Y=375 64.0X-118 85，r=0.999 93(n=6)，结果表明，本品在10.52 ～63.12 μg/ml 浓度范围内呈线性。

表2 没食子酸的加样回收试验结果Tab 2 Test results of recovery of scopoletin

图5 没食子酸的高效液相色谱图Fig 5 HPLC chromatogram of gallic acid

3 讨论

贾强［15］用现代药效学评价模型对腹可安片进行了现代药效学再评价研究，结果发现石榴皮对治疗细菌性腹泻起着较重要的作用，其它药材起协同或拮抗作用。用均匀设计对腹可安进行整体研究出火炭母在药效中作用最明显，具有君药的地位，扭肚藤药效在镇痛方面，也起着君药的作用，而救必应在各个药效模型中均没有明显的作用。石榴皮在各个药效中起着相对重要的作用，应该是臣药的地位。本研究采用君、臣药扭肚藤药材中东莨菪内酯和火炭母、石榴皮药材中没食子酸为含量测定指标，符合药效学为含量测定指标的要求，能充分体现腹可安片的功效。

综上所述，高效液相色谱法简便、准确、可靠、专属性强、重现性好，可作为腹可安片的质量标准。

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