参附注射液对小鼠抗缺氧抗疲劳作用的实验研究*

陈立艺 李玉新 黄倍源 吴俊霖 曾星华 卢慧玲陈 健

（桂林医学院，广西 桂林 541000）

·研究报告·

参附注射液对小鼠抗缺氧抗疲劳作用的实验研究*

陈立艺 李玉新 黄倍源 吴俊霖 曾星华 卢慧玲△陈 健

（桂林医学院，广西 桂林 541000）

目的研究参附注射液抗缺氧抗疲劳的作用机制。方法选用单一雄性健康昆明种小鼠60只，体质量（22±2）g，随机分成6组，每组10只，分别注射等量的高剂量参附注射液0.2 mg/kg、低剂量参附注射液（原液稀释一半）0.2 mg/kg以及0.9%氯化钠注射液0.2 mg/kg。1周后，测量缺氧状态下以及疲劳状态下小鼠生存的时间，同时取肝组织测定组织中的MDA（丙二醛）、SOD（超氧化物歧化酶）含量。结果耐缺氧和负重游泳状态下，参附注射液高剂量组比生理盐水组存活时间长（P＜0.05）；负重游泳状态下，SOD含量高剂量组比生理盐水组显著增高（P＜0.01）。结论参附注射液具有抗缺氧抗疲劳的作用。

参附注射液 抗缺氧 抗疲劳

参附注射液含人参皂苷、乌头生物碱等生物活性成分，应用于冠心病及心力衰竭治疗以及心血管疾病。人参在参附注射液中起重要的作用［1］，常用于肢冷脉微、体虚欲脱、崩漏下血和气不摄血，以及心力衰竭和心源性休克等，为扶正补虚第一要药。附子属于温里药，用于胃寒、肢冷、脉微欲绝之虚脱，有“回阳救逆第一品药”之称，配伍红参有较强的回阳救逆、益气固脱之功效，主要用于阳气暴脱的厥脱证［2］。现代药理学研究表明参附注射液药效强，能显著对抗丙二醛（MDA）活性的增高以及超氧化物歧化酶（SOD）的降低［3］。在近年小鼠抗缺氧抗疲劳试验研究中，发现红景天纳米粉比普通粉在使用量和作用强度上具有明显优势［4］，西藏人参果能显著提高小鼠抗疲劳抗缺氧能力［5］。本研究深入探讨参附注射液与小鼠抗缺氧抗疲劳之间的关系。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级单一雄性昆明种小鼠60只（来自桂林医学院动物中心），体质量（22±2）g，每天12 h日光、12 h黑暗，控制室温在23～26℃，相对湿度49%～51%，自由饮水，基础饲料喂养。

1.2 药物与试剂 参附注射液（规格10 mL/支，批号Z20043117，雅安三九药业有限公司），超氧化物歧化酶 （SOD）试剂盒 （艾美捷科技有限公司）和丙二醛（MDA）试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）。

1.3 分组与给药 选用单一雄性昆明种小鼠60只，游泳负重实验和常压耐缺氧实验各设生理盐水组、参附低剂量组、参附高剂量组，共6组，每组10只。参附低剂量组腹腔注射稀释1倍的参附注射液原液0.2 mg/kg、参附高剂量组腹腔注射参附注射液原液0.2 mg/kg，生理盐水组每天腹腔注射0.9%氯化钠注射液0.2 mg/kg，每日1次，连续7 d，基础饲料自由摄食，2 d换水1次。

1.4 游泳负重试验 每组小鼠于末次腹腔注射前禁食12 h，在末次给药1 h后将小鼠放入游泳箱内做力竭游泳试验。小鼠尾部负重为体质量5%的铁丝，放入自制玻璃游泳缸游泳，水深约为35 cm，水温25℃，计取游泳开始到小鼠游泳疲劳而沉入水中8 s不能浮起为止的时间为游泳时间。处死后并立即取出肝脏，制作肝脏匀浆，离心机分离取上清备用。

1.5 常压耐缺氧试验 每组小鼠于末次腹腔注射前禁食12 h，在末次给药1 h后将小鼠放进250 mL的密封性好的磨口玻璃瓶内，将用纱布包好的15 g钠石灰装入瓶内，将小鼠放入瓶内后立即用凡士林密封盖紧，当小鼠开始出现全身性痉挛症状时，立即开启瓶盖，将动物取出。记录从密封至小鼠发生全身性痉挛的时间为耐缺氧时间。处死后并立即取出肝脏，制作肝脏匀浆，离心机分离取上清备用。

1.6 标本检测 1）MDA检测方法。依照MDA试剂盒，取小鼠肝脏匀浆上清夜2 mL（对照组取2 mL蒸馏水），再加2 mL 0.6%TBA（2-硫代巴比妥酸）混匀，在试管上加棉塞，置沸水中加热15 min，迅速拿出水浴锅冷却，以4000 r/min离心15 min，于波长450 nm下测定OD值，并计算MDA值。2）SOD检测方法。依照SOD试剂盒，取1.5 mL缓冲液，在25℃水浴中保温15 min，加入3 mL小鼠肝脏匀浆上清夜，加入10 μL连苯三酚液，迅速摇匀（对照组取2 mL蒸馏水），计算加酶后连苯三酚自氧化速率，并计算SOD值。

1.7 统计学处理 采用SPSS12.0统计软件。计量资料以（±s）表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组小鼠抗缺氧作用时间、SOD、MDA水平比较见表1。结果示耐缺氧状态下，参附注射液高剂量组比生理盐水组存活时间长（P＜0.05）。SOD和MDA测定未见统计学差异。

表1 各组小鼠常压耐缺氧实验结果比较（±s）

表1 各组小鼠常压耐缺氧实验结果比较（±s）

与生理盐水组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组别 n M D A含量（n m o l / m L）耐缺氧时间（s）S O D含量（U / m g）生理盐水组 1 0 6 . 2 9 ± 2 . 4 3参附低剂量组1 0 5 . 6 3 ± 1 . 1 3 9 8 6 . 7 5 ± 1 1 3 . 5 5 2 5 7 . 5 0 ± 1 2 . 2 4 1 0 9 5 . 2 5 ± 9 4 . 3 2 2 6 2 . 2 0 ± 5 . 4 7参附高剂量组1 0 4 . 9 6 ± 0 . 7 2 1 1 7 6 . 6 2 ± 1 4 3 . 5 6△2 6 6 . 6 3 ± 7 . 0 7

2.2 各组小鼠抗疲劳作用的时间、SOD、MDA水平比较 见表2。负重游泳状态下，参附注射液高剂量组比生理盐水组存活时间长（P＜0.05），低剂量组比生理盐水组存活时间长（P＜0.05），测定SOD含量低浓度组比生理盐水组高（P＜0.05），高剂量组比生理盐水组显著增高（P＜0.01）。MDA测定未见统计学差异。

表2 各组小鼠游泳负重结果比较（±s）

表2 各组小鼠游泳负重结果比较（±s）

组别 n M D A含量（n m o l / m L）抗疲劳时间（s）S O D含量（U / m g）生理盐水组 1 0 5 . 7 8 ± 1 . 6 1参附低剂量组1 0 5 . 4 4 ± 0 . 7 7 4 3 3 . 1 3 ± 1 6 8 . 1 5 2 1 4 . 5 0 ± 1 2 . 0 6 5 1 8 . 3 8 ± 2 5 5 . 4 0△2 5 5 . 4 2 ± 3 8 . 2 9△参附高剂量组1 0 5 . 1 2 ± 0 . 6 0 6 4 5 . 0 0 ± 1 8 1 . 9 1△2 4 7 . 0 8 ± 2 5 . 7 3△△

3 讨 论

抗缺氧、抗疲劳的存活时间是机体生理活力的综合反映，可以表征机体组织、脏器的健康状况和疲劳程度。由表1及表2时间部分可以看出，参附注射液可有效提高小鼠的抗缺氧抗疲劳能力。参附注射液能改善小鼠体内血流动力学，稳定血压，增加心肌收缩力，扩张冠脉［6-7］，有效保护大脑、心脏、肝、肺等重要器官，具有较好的抗缺氧、抗疲劳的作用。之前的临床实验表明参附注射液能够调节血压，维持血压正常水平［8-9］，参附注射液促进机体产生冠脉舒血管活性物质，增加冠脉血流量，减少冠脉阻力。参附注射液组成中乌头碱在保护心肌细胞、心率、心律、血压等方面有积极的作用［10］，其代谢中间产物去乌头碱能增强心肌收缩力、改善心肌循环及缓解急性心肌缺血损伤，其显著功能在于变力性和变时性，同时降低主动脉压［11-12］。参附注射液抗缺氧疲劳的能力可能与上述因素有关，也可能与应急状态下机体产生SOD，增加抗氧化作用减轻自由基损伤的机制有关。

小鼠注射参附注射液后，测量肝组织中SOD含量，表明参附注射液能提高机体SOD含量，清除体内氧自由基，尤其是重要器官，如大脑、心脏、肝等的自由基，有效保护脏器。小鼠在抗缺氧和抗疲劳环境下，剧烈运动，乳酸堆积，肌肉pH值下降，氧自由基增多，损害机体组织，从而产生疲劳。参附注射液介导的SOD水平提高有助于减少缺血再灌注后产生的氧自由基，减轻肾脏缺血再灌注引起的氧化应激，减轻器官的损伤。参附注射液可以显著提高SOD的活性，使得体内氧自由基减少，减少了氧自由基引发的脂质过氧化损伤［13］。

MDA是脂质过氧化反应的稳定代谢物，测定MDA含量可反映肾组织中自由基的含量及其引发的脂质过氧化反应程度，间接反映细胞受自由基氧化损伤的程度。有资料表明SFI可减轻缺血再灌注对肾脏组织的脂质过氧化损伤［14］，降低MDA水平［15］。黄琼等［16］发现SFI处理可提高心肌组织ATP含量和SOD活性，减少MDA生成，保护缺血再灌注后的大鼠心脏。本次实验小鼠耐缺氧抗疲劳实验数据未获得统计学差异，可能和实验动物数量不足有关。

参附注射液作为一种中药制剂，具有临床应用剂量安全范围宽、毒副作用小的优良特性，具有广阔的应用前景。参附注射液含人参皂苷、乌头生物碱等生物活性成分，能够增强体力、防止衰老和增加活力，具有较好的抗缺氧、抗疲劳作用，其药理特性被广泛应用于临床治疗，尤其是心脏病的治疗，有效提高患者预后质量。

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Experimental Study on Anti-hypoxic and Anti-fatigue Effect of Shenfu Injection on Mice

CHEN liyi，LI Yuxin，HUANG Beiyuan，et al. Guilin Medical University，Guangxi，Guilin 541004，China

Objective：To study the anti-hypoxic and anti-fatigue effect of Shenfu injection.Methods：60 single healthy male Kunming mice，weighing（22±2）g，were chosen，randomly divided into 6 groups，10 in each group，respectively injected with the same amount of the reagent.The high concentration of the group was attached to the injection of 0.2 mg/kg，while the low concentration（the half of concentrate）was 0.2 mg/kg and normal saline 0.2 mg/kg.A week later，the survival time of mice was measured under the state of hypoxia and fatigue.At the same time，the content of MDA（malondialdehyde）and SOD（superoxide dismutase）in liver tissues were measured，too.Results：The survival time of mice injected with high concentration of shenfu injection was longer than that of mice injected with physiological saline under the condition of anti-hypoxia and loaded-swimming（P＜0.05）.Content of SOD in high concentration of shenfu injection was significantly more than that of physiological saline group（P＜0.01）.Conclusion：Shenfu injection has an anti-hypoxic and anti-fatigue effect.

Shenfu injection；Anti-hypoxic；Anti-fatigue

R285.5

A

1004-745X（2015）06-0960-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.06.008

2015-02-18）

广西教育科学“十二五”规划课题（2013C047）

△通信作者（电子邮箱：626382529@qq.com）