雌激素受体、孕激素受体和细胞增殖核抗原在绝经前子宫内膜息肉中的表达及其临床意义

封意兰 谌小卫

临床研究论著

雌激素受体、孕激素受体和细胞增殖核抗原在绝经前子宫内膜息肉中的表达及其临床意义

封意兰 谌小卫

目的探讨雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）以及细胞增殖核抗原（Ki-67）在绝经前子宫内膜息肉组织及息肉旁内膜中的表达情况及其临床意义。方法收集36例经病理确诊的绝经前子宫内膜息肉患者的息肉组织及息肉旁内膜组织，采用免疫组织化学染色法检测ER、PR和Ki-67在两者腺体和间质的表达情况。结果增生期息肉腺体中ER、Ki-67的表达程度高于息肉旁内膜（P＜0.05）；分泌期息肉腺体中ER的表达程度高于息肉旁内膜（P＜0.05），而PR的表达程度低于息肉旁内膜（P＜0.05）；息肉腺体中ER和Ki-67表达程度呈正相关（P＜0.05），息肉腺体中PR 与ER、PR与Ki-67表达程度无关（P均＞0.05）。结论绝经前子宫内膜息肉腺体中ER处于高表达状态，而分泌期息肉腺体中PR处于低表达的状态，子宫内膜息肉腺体中Ki-67和ER的表达呈正相关。ER可能通过增强细胞增殖活性，在子宫内膜息肉发生、发展的调控方面起一定作用。

雌激素受体；孕激素受体；细胞增殖核抗原；子宫内膜息肉；子宫内膜

子宫内膜息肉是由腺体、间质及厚壁血管组成，突出于子宫内膜表面的有蒂或无蒂的赘生物，是子宫内膜癌的高危因素之一。但其病因学和发病机制至今仍不清楚，目前普遍认为与子宫内膜局部的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）失衡和细胞增殖凋亡异常有关。Ki-67是一种与细胞增殖相关的核抗原，可准确反映细胞的增殖活性，近年研究发现其过度表达与子宫内膜癌发病密切相关，但Ki-67在子宫内膜息肉方面的研究相对较少，且其与ER、PR在子宫内膜息肉发病中有何关系尚不明确。本研究采用免疫组织化学染色法（免疫组化）检测ER、PR及Ki-67在绝经前子宫内膜息肉组织及息肉旁内膜中的表达情况，探讨三者在绝经前子宫内膜息肉发生、发展中的意义，现报告如下。

对象与方法

一、研究对象

选取2012年7月至12月在中山大学附属第三医院妇科行宫腔镜手术且经病理确诊的绝经前子宫内膜息肉患者36例，取息肉组织为息肉组，取息肉旁0.5～1.0 cm的子宫内膜为息肉旁内膜组（内膜组）。患者年龄21～46岁，中位年龄35岁，取材前3个月均无接受过任何激素治疗及放置宫内节育器，无妇科内分泌疾病、生殖道炎症及妇科肿瘤等病史。根据月经周期以及显微镜下内膜和息肉中的腺体、间质形态确定所处的月经周期阶段，增生期为月经周期的第5～14日，分泌期为月经周期的第15～28日，其中增生期息肉24例，增生期内膜24例，分泌期息肉12例，分泌期内膜12例。本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准，得到该委员会批准，并征得受试对象本人的知情同意，并与之签署临床研究知情同意书。

二、主要试剂

鼠抗人ER、PR及Ki-67单克隆抗体，0.01 mol／L磷酸盐缓冲液（PBS），均购自英国Novocastra公司，二抗检测试剂盒购自Dako公司。

三、研究方法

1.标本制备

无菌条件下获取子宫内膜息肉以及息肉旁内膜组织后，置入4%甲醛溶液固定，对所有标本进行免疫组化（Envision二步法），检测ER、PR及Ki-67在子宫内膜息肉和息肉旁内膜中的表达情况。

2.观察指标和评价标准

ER、PR以及Ki-67免疫组化产物均呈细颗粒状，定位于腺体和间质的细胞核，以片中细胞核出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。显微镜下观察其染色范围及染色强度，采用双盲法读片，双评分、半定量法对免疫组化结果进行分析。每张切片随机选取5个40倍视野，计算阳性细胞百分比，根据受体阳性细胞占切片中全部细胞的百分比分为4个等级，阳性细胞比例＜25%为0分，阳性细胞比例25%～50%为1分，阳性细胞比例51%～75%为2分，阳性细胞比例＞75%为3分。染色强度分为4个等级：基本不着色为0分，淡棕黄色为1分，深棕黄色为3分，介于两者之间为2分。每张切片的评分以这两者之和表示，0～1分为（－），2～3分为（＋），4～5分为（＋＋），6分为（＋＋＋）。

四、统计学处理

应用SPSS 16.0软件包处理数据。采用配对资料的符号秩和检验行数据分析，相关分析采用Spearman秩相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、增生期子宫息肉组和内膜组ER、PR及Ki-67的表达情况比较

ER、PR以及Ki-67均可表达于息肉和息肉旁内膜的腺体和间质中，主要定位于细胞核。ER在增生期息肉组腺体的表达程度明显高于内膜组（P ＜0.05），而2组间质中ER的表达程度比较差异无统计学意义（P＞0.05）；PR在增生期息肉组腺体及间质的表达程度与内膜组比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）；Ki-67在增生期息肉组腺体的表达程度高于内膜组（P＜0.05），而2组间质中Ki-67的表达程度比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

二、分泌期子宫息肉组和内膜组ER、PR及Ki-67的表达情况比较

ER在分泌期息肉组腺体中的表达程度明显高于内膜组（P＜0.05），而2组间质中ER的表达程度比较差异无统计学意义（P＞0.05）；PR在分泌期息肉腺体中的表达强度明显低于内膜组（P＜0.05），而2组间质中PR的表达程度比较差异无统计学意义（P＞0.05）；Ki-67在分泌期息肉组腺体及间质的表达与内膜组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

三、ER、PR与Ki-67表达程度的相关性分析

在36例子宫内膜息肉腺体中，ER与PR的表达程度无关（rs＝－0.010，P＞0.05）。子宫内膜息肉腺体中ER与Ki-67的表达程度呈正相关（rs＝0.360，P＜0.05）。子宫内膜息肉腺体中PR与Ki-67的表达程度无关（rs＝－0.127，P＞0.05）。

表1 增生期子宫息肉组和内膜组ER、PR及Ki-67的表达情况比较（n＝24）例（%）

表2 分泌期子宫息肉组和内膜组ER、PR及Ki-67的表达情况比较（n＝12）例（%）

讨 论

子宫内膜息肉多为良性，但其恶变率高达0.8%～4.8%，且随着年龄增长，患病率增加［1］。然而，其发病机制至今仍未明确。近年研究表明，子宫内膜息肉的发生涉及ER、PR失衡、细胞调亡与增殖异常、炎性刺激、基因突变等多方面因素，但目前普遍认为其发病与子宫内膜局部的ER、PR失衡和细胞增殖凋亡异常有关。

ER和PR广泛分布在子宫内膜、子宫肌层、阴道上皮以及输卵管等组织中，以子宫内膜中的表达最多。ER和雌激素结合后变构并形成二聚体，继而在细胞核内与靶基因调节区的雌激素反应元件结合，或者与Ap1、Sp1等转录因子相互作用，调节靶基因转录和复制，从而刺激靶器官细胞增殖和分化。长期持续的高水平雌激素作用于子宫内膜，可导致子宫内膜的过度增生和血管增殖，甚至癌变。孕激素则在雌激素作用的基础上发挥效应，孕激素与PR结合后使PR发生构象变化，从而限制内膜的增殖，使增殖期子宫内膜转为分泌期，促进子宫内膜的周期性脱落。由于子宫内膜中ER、PR表达存在差异，使子宫内膜不同部位的性激素受体表达不平衡，以及子宫内膜对雌激素、孕激素反应不一致，导致子宫内膜各个部位增生不平衡，ER表达较高的子宫内膜可在雌激素的刺激下过度增生［2］。本研究中，ER、PR在息肉组织及息肉旁内膜中的表达并不一致，无论增生期还是分泌期，子宫内膜息肉腺体中ER的阳性表达程度均高于息肉旁内膜，而分泌期息肉腺体中PR的阳性表达程度低于息肉旁内膜，由此推测，绝经前子宫内膜息肉腺体中ER处于高表达状态，而分泌期息肉腺体中PR的表达处于低水平、相对缺乏的状态，使孕酮抑制组织增殖作用明显减弱，局部组织相对接受了高水平雌激素的持续刺激而呈显著增殖状态，导致组织的异常增生而形成息肉。

Ki-67是一种与细胞增殖相关的核抗原，与增殖细胞的增殖周期有关［3］。由于Ki-67仅表达于增生期细胞，在静止的细胞中不表达，所以Ki-67指数（即Ki-67阳性细胞所占比例）可以准确反映正常细胞的增殖情况，并能够较客观的完全地反映肿瘤细胞的增生活性。Ki-67在子宫、卵巢、乳腺等几乎全身各部位肿瘤的增殖细胞中均有表达，且其阳性表达率及表达强度在良性、交界性、恶性肿瘤间均有显著差异性，其在三者中的表达呈逐渐升高［4-5］。本研究显示，增生期息肉腺体中Ki-67的阳性表达程度明显高于息肉旁内膜腺体。由于Ki-67可客观反映细胞增殖状况，其表达增强是细胞增殖活性增加的可靠标记，所以提示了子宫内膜息肉是一种细胞增殖性疾病，从而表明子宫内膜息肉的发生与细胞过度增殖有关。因此，Ki-67的高表达对子宫内膜息肉的发生可能具有预测作用，但Ki-67是否可以作为子宫内膜息肉复发及癌变的分子学指标，还有待于进一步的研究。

在正常妇女的月经周期中，ER、PR在子宫内膜中的表达随着体内雌、孕激素水平的波动呈周期性变化，而Ki-67主要在增生期及排卵后3 d内的功能层腺体中表达，分泌期表达显著减少。McGurgan等（2006年）对绝经前、后息肉中ER、PR和Ki-67的表达分别进行比较发现，绝经后息肉腺体和间质中ER表达高于绝经前息肉；绝经后息肉腺体中PR表达亦较绝经前息肉高，但间质中PR表达在2组间无差异；而绝经前息肉间质中Ki-67表达明显高于绝经后息肉。相关性分析发现，2组中ER的表达与PR、Ki-67的表达均密切相关。本研究中，ER和Ki-67在增生期子宫内膜息肉腺体中表达程度均高于息肉旁宫内膜高，相关分析显示两者在子宫内膜息肉腺体中的表达呈正相关。因Ki-67是反映细胞增殖状态的标志性抗原，由此推测，ER在子宫内膜息肉发生发展的调控方面起关键作用，ER通过和雌激素结合发挥生理效应而促进内膜细胞增殖，故Ki-67表达升高，联合检测两者在子宫内膜组织中的表达有助于子宫内膜息肉的早期发现。

［1］杭晨，杨炜敏.宫腔镜电切术后不同方案预防子宫内膜息肉复发疗效分析.新医学，2014，45：45-48.

［2］Peng X，Li T，Xia E，et al.A comparison of oestrogen receptor and progesterone receptor expression in endometrial polyps and endometrium of premenopausal women.J Obstet Gynaecol，2009，29：340-346.

［3］段超，王斌，梁霜，等.骨桥蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及其与肿瘤增殖和患者预后的关系.新医学，2013，44：366-369.

［4］Liang YM，Li XH，Li WM，et al.Prognostic significance of PTEN，Ki-67 and CD44s expression patterns in gastrointestinal stromal tumors.World J Gastroenterol，2012，18：1664-1671.

［5］Schmilovitz-Weiss H，Tobar A，Halpern M，et al.Tissue expression of squamous cellular carcinoma antigen and Ki67 in hepatocellular carcinoma-correlation with prognosis：a historical prospective study.Diagn Pathol，2011，6：121.

Expression and clinical significance of ER，PR and Ki-67 in the endometrial polyps of premenopausal women

Feng Yilan，Chen Xiaowei.Department of Gynecology，the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning 530021，China

ObjectiveTo study the expression level and clinical significance of estrogen receptor （ER），progesterone receptor（PR）and proliferating cell nuclear antigen Ki-67 in the endometrial polyps （EP）and adjacent normal endometrial tissues from premenopausal women.Method The EP and adjacent normal endometrial tissues were collected from 36 premenopausal patients pathologically diagnosed with EP. The expression of ER，PR and proliferating cell nuclear antigen Ki-67 in the glands and stromal cells was evaluated by immunohistochemistry between EP and adjacent normal endometrial tissues.ResultsIn the proliferative phase，the expression levels of ER and Ki-67 in the glands of EP were significantly higher than those in adjacent normal endometrial tissues（both P＜0.05）.In the secretory phase，the expression of ER in the glands of EP was significantly higher whereas that of PR was significantly lower than those in adjacent normal endometrial tissues（both P＜0.05）.The expression of ER in the glands of EP was positively correlated with that of Ki-67（P＜0.05）.However，the expression between ER and PR，PR and Ki-67 was not correlated in adjacent normal endometrial tissues（all P＞0.05）.Conclusions In the glands of EP of premenopausal patients，ER was highly expressed.In the secretory phase，PR was lowly expressed.The expression of Ki-67 and ER was positively correlated in the glands of EP.ER plays a pivotal role in the incidence，development and regulation of EP probably via promoting the proliferation of endometrial cells.

Estrogen receptor；Progesterone receptor；Ki-67；Endometrial polyps；Endometrium

2014-08-20）

（本文编辑：林燕薇）

10.3969／g.issn.0253-9802.2015.04.007

广东省科技计划项目（2011B031800094）

530021南宁，广西壮族自治区人民医院（封意兰）；510630广州，中山大学附属第三医院妇科（谌小卫）

，谌小卫，E-mail：xiaoweidoctor＠163.com