核转录因子-κB和肿瘤坏死因子-α在动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者血清中的表达

梁汉才，杨福义

（1.黑龙江省牡丹江市第二人民医院神经外科，黑龙江 牡丹江 157000；2.黑龙江省佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007）

核转录因子-κB和肿瘤坏死因子-α在动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者血清中的表达

梁汉才1，杨福义2

（1.黑龙江省牡丹江市第二人民医院神经外科，黑龙江 牡丹江 157000；2.黑龙江省佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007）

目的探讨核转录因子-κB（NF-κB）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与动脉瘤性蛛网膜下腔出血（aSAH）后脑血管痉挛（CVS）之间的关系。方法选取aSAH患者42例的血液NF-κB、TNF-α分别进行动态检测，并采用经颅多普勒超声（TCD）检测大脑中动脉血流速度（VMCA）。结果aSAH患者血液NF-κB在发病后1～3天、7～9天各均值明显高于对照组，TNF～α在发病后l～3天、7～9天各均值明显高于对照组。结论aSAH患者NP-κB、TNF-α含量变化与CVS呈正相关。

aSAH；脑血管痉挛；NF-κB；TNF-α；经颅多普勒

CVS是aSAH后最严重的并发症之一，是aSAH病人致残、致死的主要原因［1］。aSAH后CVS的发生机制目前尚不十分清楚，但炎症反应在其中起了重要作用［2］。研究表明，TNF-α等细胞因子在其中起了重要作用，而NF-κB是TNF-α等诸多细胞因子的启动子。因此，通过对aSAH病人血液NF-κB、TNF-α的动态检测，探讨其作为判断病情、观察疗效、指导临床治疗的有效指标的可行性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集了近期本院aSAH患者42例作为研究对象，其中男20例，女22例；年龄32～74岁，平均年龄（56.4 14.2）岁；所有患者入院后第3、7、9、14天分别进行TCD检测，将任何一次大脑中动脉的平均流速（VMCA）＞120 cm/s视为CVS。根据TCD检测结果将患者分为：无CVS组13例，CVS组29例。再将CVS组继续分为：轻度CVS组（VMCA 120～140 cm/s）11例，中度CVS组（VMCA 140～200 cm/s）12例，重度CVS组（VMCA＞200 cm/s）6例。选择同期健康体检者40名作为对照组，其中男19名、女21名；年龄22～70岁，平均年龄（54.9 10.1）岁。对照组和患者组的平均年龄及性别，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

所有病例均在发病后1～3天、7～9天、13～15天清晨同一时间段分别采取外周静脉血5m l/人次，肝素抗凝，在4℃条件下离心10 min，分离血浆，提取外周血单核细胞，涂片并同定，置于-80℃冰箱保存备用。一抗选用兔抗NF-κB p65亚单位的多克隆抗体，用SABC试剂盒（武汉博士德公司提供）进行操作，白细胞NF-κB活性测定用HPLAS-1000彩色病理图像分析系统测定，其活性用吸光度A值表示。另外在相同时段空腹采集静脉血5 mL，ELISA法进行检测（试剂盒由武汉博士德公司提供）TNF-α水平。对照组采血后检测方法同上。

1.3 统计学处理

使用SPSS 13.0对各项资料进行统计、分析，计量资料以“±s”表示，采用t检验，计数资料采用x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同患者血清中NF-κB（A值）含量比较

患者组（无论有无脑血管痉挛）血清中NF-κB含量均有升高，与对照组比较（1～3天和7～9天），差异有统计学意义（P＜0.05）。CVS组与无CVS组比较差异只在SAH早期1～3天，差异有统计学意义（P＜0.05），之后7～9天和13～15天，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 不同患者血清中NF-κB（A值）含量比较（±s）

表1 不同患者血清中NF-κB（A值）含量比较（±s）

注：与对照组比较：*P＜0.05，#P＜0.05；与无CVS组同一时间点比较：#P＜0.05

对照组 40 0.077f 0.030 0.108f 0.023 0.071f 0.015无CVS组 13 0.251f 0.057* 0.128f 0.032* 0.083f 0.029 CVS组 29 0.377f 0.095*#0.147f 0.043* 0.095f 0.017

2.2 不同患者血清中TNF-α含量比较

患者组（无论有无脑血管痉挛）血中TNF-α含

量均有升高，但在第7～9天含量最高，CVS组患者TNF-α含量升高更明显，各组之间TNF-α含量比较。差异均有统计学意义（P＜0.02）。见表2。

表2 不同患者血清中TNF-α含量比较（pg/ml）

2.3 不同血管痉挛程度患者血清中NF-κB含量比较

各CVS组患者血中NF-κB含量均有升高，并且痉挛程度越重NF-κB升高越明显，各CVS组之间NF-κB升高程度存在差异，这种差异只在SAH早期（1～3天）有显著性（P＜0.05），之后差异无显著性。见表3。

表3 不同血管痉挛程度患者血清中NF-κB（A值）含量比较（±s）

表3 不同血管痉挛程度患者血清中NF-κB（A值）含量比较（±s）

注：同一时间点，与轻度CVS组比较：*P＜0.05，#P＜0.05，与中度CVS组比较：#P＜0.05

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2.4 不同血管痉挛程度患者血清中TNF-α含量比较

各CVS组患者血清中TNF-α含量均有升高，7～9天最高，并且痉挛程度越重TNF-α升高越明显，各CVS组之间不同时间点TNF-α含量比较差异均有显著性（P＜0.05。见表4。

表4 不同血管痉挛程度患者血清中TNF-α含量比较（pg /mL）

3 讨论

aSAH后CVS发生的原因和机理至今尚未完全阐明，但总体认为炎症反应在CVS的发生中起重要作用。TNF-α是主要的致炎因子，TNF-α等参与了CVS的发生，并与CVS密切相关。在本实验中CVS患者的TNF-α含量明显高于无CVS的患者，说明TNF-α异常升高可能与aSAH后血管的炎症反应及CVS关系密切。NF-κB是具有多向性调节作用的一类蛋白质因子，通过调控多种基因的表达，发挥NF-κB对不同靶基因的调控作用［3］。本实验研究发现，与对照组比较，在aSAH患者不同时间段血液中NF-κB的浓度均相应的升高，但在SAH早期（1～3天）升高更为明显，之后7～9天维持在一个较高水平，随后逐渐恢复。而CVS主要发生在SAH后7～9天。NF-κB的高表达发生在SAH的早期，与CVS的发生有时段上的先后性。提示CVS的发生可能是受NF-κB启动诱发的。

本实验研究发现CVS组与无CVS组不同时间段NF-κB的表达只在CVS的早期差异有统计学意义，之后差异无统计学意义，这同样说明NF-κB只在CVS的早期发生作用。中、重度痉挛患者NF-κB，TNF-α表达较轻度患者明显升高，说明NF-κB，TNF-α表达程度与脑血管痉挛程度相一致，并且NF-κB的高表达与TNF-α的高表达是相一致的。同样提示了早期NF-κB的高表达诱发了随后TNF-α的高表达，二者在表达强度上有一定的相关性，早期NF-κB的高表达导致TNF-α的高表达，进而引发CVS的发生。NF-κB的高表达与TNF-α的高表达有时段上的先后性，NF-κB的高表达发生在SAH的早期、CVS的前期，TNF-α的高表达发生在CVS期，恰恰与CVS的发生相一致。提示CVS的发生可能是受NF-κB启动诱发，而由TNF-α等炎症因子作用表达的。NF-κB的高表达提示病情较重，预示有CVS的发生；TNF-α的高表达表示病情较重，有CVS的发生。

［1］ Treggiari MM，Walder B，Suter PM，et al.Systematic review of the prevention of delayed ischemic neurological deficits with hypertension［J］.Neurosurg，2003，98：978-984.

［2］张 健，王 中，周 岱，等. NF-κB、ICAM-1在实验性SAH后基底动脉壁上的表达变化［J］.中风与神经疾病杂志，2009，26（6）：684-688.

［3］冀 勇，王志刚，丁 璇，等.兔蛛网膜下腔出血后NF-κB在基底动脉的表达［J］.中华神经外科杂志，2007，23（10）：780-782.

本文编辑：徐 陌

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ISSN.2095-6681.2015.33.049.02