超声波快速石蜡切片在胃肠镜活检黏膜中的应用及意义

朱启淦，孟加榕，戴太监，杨立民，潘羡心，林明珠(中国人民解放军第一七五医院，厦门大学附属东南医院病理科，漳州 363000;通讯作者;E-mail:mengjiarong@sina．com)

传统的石蜡切片方法虽然是目前病理诊断中最可靠、最准确的诊断方法之一，但由于操作时间较长(有的医院甚至需要2-3 d)，已不能适应现代临床医学快速诊断的要求［1］。超声波快速石蜡切片因其制片质量可与常规石蜡切片相媲美，并且随着技术的不断改进，制片的时间能满足术中快速诊断的需要，使得超声快速石蜡切片在一些小医院的应用较为广泛［2］。随着胃肠镜的普及，胃肠镜活检小黏膜标本数量也随着增长。我院采用超声波快速石蜡切片技术制作胃肠镜活检石蜡切片，可以当天取病理报告，有效地缩短了病人就诊时间。本文探讨应用超声波快速石蜡切片技术制备胃肠镜活检小黏膜石蜡切片予以推广的可行性、实用性，现报告如下。

1 材料与方法

1．1 材料与试剂

收集我院2014-07～2015-07使用超声波快速石蜡切片技术制作的胃肠镜活检小黏膜石蜡切片1 257例。取材部位包括食管、贲门、胃底、胃体、幽门、十二指肠、回盲部、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠、直肠等。试剂:4%中性甲醛、丙酮、石蜡等。

1．2 仪器

RM2245切片机(莱卡);PHY-Ⅲ病理组织漂烘仪(常州市中威电子仪器有限公司);YTG-300E生物组织处理多用机及程序化控制系统(湖北省孝感市亚光医用电子技术有限公司)，3个超声波发生器，可单独使用也可同时操作，工作性能稳定可靠。3个150 ml的清洁烧杯。

1．3 方法

①取材。将活检组织分别用编好病理号的滤纸包裹，置于脱水筐中。②固定。将组织放入50 ml中性甲醛5-8 min。③脱水透明。用吸水纸除去包裹组织表面的残液，投入50 ml丙酮6-8 min;有学者认为丙酮在脱水的同时兼有透明的作用［3］。④浸蜡。用吸水纸除去包裹组织表面的残液，随即投入50 ml石蜡液中约8-10 min。⑤包埋。将编好病理号的滤纸包裹的组织打开与对应标记病理号的包埋盒进行包埋。⑥与常规石蜡切片相同，切片、烤片。⑦染色。格林环保染液Ⅰ、Ⅱ染色程序脱蜡［4］各5 min;无水乙醇和95%乙醇各30 s后流水洗;苏木精染色5 min，后水洗3 min，分化2 s后充分水洗;伊红1 min后稍水洗，除浮染液30 s;无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 min，除水透明和透明各1 min;GS封片胶封片镜检。

②-④步均在YTG-300E生物组织处理多用机中进行，使用150 ml的烧杯盛装试剂和石蜡，YTG-300E生物组织处理多用机的水槽温度为68-72℃。

2 结果

超声波快速石蜡切片整个过程约1．5 h，在光镜下观察，红蓝对比分明，颜色亮丽鲜艳，组织结构清楚，细胞形态完整，胞质核对比醒目，胞膜及核膜清晰，对比度好(图1，2)。与常规石蜡切片耗时2-3 d相比明显缩短制片时间，且质量与常规石蜡切片(图1，2)媲美，符合优质 HE 切片要求［5］。在1 257例病例中恶性159例(12．65%)，其中102例(64．2%)在我院手术，与术后常规石蜡切片相符;交界57例(4．53%)，建议重取或定期复查;延迟3 例(0．24%)因标本太小或夹取组织为黏液，建议重取。

图1 腺瘤性息肉乙状结肠活检组织(×100)

图2 腺癌浸润肌层乙状结肠活检组织(×100)

3 讨论

我国消化道肿瘤呈逐年上升趋势，消化内镜技术已广泛应用于临床。内窥镜下取黏膜活检技术已成为胃肠道肿瘤、息肉、炎症等各种疾病的重要诊断方法［6］。另一方面，随着社会发展，生活节奏加快，人们对医疗护理质量和快捷方便性的医疗服务要求越来越高，医疗模式随之发生了较大变化，为适应生物—心理—社会这一新模式［7］，我院消化内镜室开展了日间病房。然而在日常的病理检验中，黏膜活检组织主要采用的是常规石蜡切片技术，这种技术病理报告时限周期长，严重影响病人的下一步治疗。超声波快速石蜡切片技术通过微波辐射能有效缩短制片过程中的固定、脱水透明及浸蜡时间。且操作简便，制片质量可与常规石蜡切片相媲美，病人可以当天取报告，对内镜室开展日间病房及平均住院日的缩短起到极大作用，满足了临床医生和病人对病理报告准确及时的高标准要求。

超声波快速石蜡切片在操作的过程中，需要注意以下事项:①当前送检的胃肠镜黏膜活检标本，普遍存在检材数量少、标本小、黏膜面不易分辨等问题。同时，由于包埋面不易确定，导致黏膜平包、平切、不能完全呈现黏膜各层组织结构的情况时有发生［6］。需要病理技术人员经验丰富，取材时标本需用滤纸包裹，对于一些包膜完整的圆形息肉，需对半切开，活检组织过厚的标本按解剖面切薄至0．15 cm左右，并采用正确的包埋方式。②标本例数多时，在滤纸上用铅笔标记相应病理号，放入脱水筐，包埋时对应标记病理号的包埋盒。③整个制作过程应认真观察，间断翻动脱水筐，保证各例标本充分浸泡于试剂中，并提前将下一步试剂放在加热池预热，便于在有限时间内发挥最大的功效。④脱水时间的掌握，时间过短或过长都不符合快速石蜡切片的要求，处理时间的长短要视活检黏膜类型、黏膜组织块的厚薄，标本例数等因素灵活掌握。以脱水筐平铺满活检组织为宜，切不可叠加，影响试剂的浸入，如标本多，可分批次进行。⑤超声波处理仪置于通风柜中，能有效减少操作过程中试剂挥发产生的气味。

目前，快速石蜡切片染色最常用的还是以二甲苯为脱蜡及透明剂、剧毒黄色氧化汞作为苏木精氧化剂，其中二甲苯可危害人体健康［8］。我科使用格林环保染液进行染色的快速石蜡切片，切片脱蜡完全彻底，颜色亮丽鲜艳，胞质核对比醒目，胞膜及核膜清晰，切片透明度高。不仅同常规二甲苯脱蜡透明的HE染色效果相同，而且可以减少二甲苯等有害液体的排放，减少其对人体危害及环境污染［9］。

综上所述，超声波快速石蜡切片技术过程科学合理，操作简便，制片质量稳定。病理技术人员通过培训，严格按照标准操作程序规范操作，可以为病理医生提供高质量的切片及清晰的染色保证。胃肠镜活检小黏膜快速石蜡制片的开展方便了门诊急诊患者，使他们的疾病得到了及时诊断及治疗，同时满足了临床手术快速诊断的需要，值得在各医院推广使用。

［1］楚广民，罗伟，裴素丽，等．超声波快速石蜡切片的制备［J］．诊断病理学杂志，2001，8(6):366．

［2］郑俊，骆利康，何晓燕，等．超声快速石蜡切片对免疫组化抗原检测的影响［J］．临床与实验病理学杂志，2008，24(4):497-498．

［3］马恒辉，徐玮，孟奎，等．使用超声波处理仪制备快速石蜡切片的体会［J］．中华病理学杂志，2001，30(1):65．

［4］田玉旺，朱红艳，李琳，等．GS环保染液在病理制片技术工作中的应用［J］．诊断病理学杂志，2011，18(4):213-215．

［5］ 中华医学会．临床技术操作规范:病理学分册［M］．北京:人民军医出版社，2004:6．

［6］徐金永，赵夫娟，陈阳，等．胃肠黏膜琼脂竖式包埋与常规包埋对比分析［J］．临床与实验病理学杂志，2014，30(4):461-462．

［7］郑成中，张军，孙玉平，等．儿科留观15008例分析及启迪［J］．中国当代儿科杂志，2002，4(6):525-526．

［8］Acton A，Harvey T，Grow M．An examination of non-fomalinbased fixation metho-ds for xenopus embryos［J］．DevDyn，2005，233(147):1464-1469．

［9］宋一民，庞霞，高冬玲，等．格林环保染液在快速石蜡切片应用中的体会［J］．诊断病理学杂志，2014，6(6):403．