人参与林蛙油配伍的保健食品体外致突变试验研究

张晶莹 宋昕恬 张琨 隋自洁 高峰

人参与林蛙油配伍的保健食品体外致突变试验研究

张晶莹 宋昕恬 张琨 隋自洁 高峰

目的 体外观察人参与林蛙油配伍的保健食品能否诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株的回复突变。方法 Ames试验用TA97、TA98、TA100、TA102菌株并分加与不加肝微粒体酶活化系统(+/-S9)试验。结果 人参与林蛙油配伍的保健食品对4个菌株各剂量组的回复菌落数都未超过自然回复菌落数, Ames试验结果为阴性。结论 在5000-8 μg/皿剂量下未见人参与林蛙油配伍的保健食品致突变性。

人参；林蛙油；配伍；保健食品；Ames试验；致突变性

人参作为著名的中草药, 在我国已经使用了几千年之久, 据《神农本草经》记载：“人参主补五脏, 安精神, 定魂魄, 止惊悸, 除邪气, 明目开心益智, 久服轻身延年”［1］。 林蛙油又称蛤蟆油、田鸡油、哈什蚂油, 为雌性林蛙干燥的输卵管制品, 具有补肾益精、润肺养阴之功效, 其主要分布东北长白山区。林蛙油中含有多种生理活性物质, 具有明显的生理保健作用［2］。因此, 本文采用Ames 试验平皿掺入法对人参与林蛙油配伍的保健食品进行了体外致突变效应初步探讨, 为其保健食品开发利用提出科学理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 人参与林蛙油配伍的保健食品, 由本实验室自制；敌克松、叠氮钠、二氨基芴、1, 8-二羟基蒽醌均购

自Sigma公司；D-生物素、L-盐酸组氨酸购自Fluka公司；鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102和S9均购自上海启发实验有限公司。

1.1.2 仪器 电热恒温培养箱、电热恒温水浴箱, 均由上海基玮试验仪器设备有限公司产；立式压力蒸汽灭菌仪(YXQ-LS-50G型), 上海博迅实业有限公司医疗设备厂产；METTLER TOLEDO-AB204-N分析天平, 上海产。

1.2 方法

1.2.1 试验方法 依据《保健食品安全性毒理学评价程序和检验方法规范》中介绍的平板掺入法进行试验［3］。试验设5000、1000、200、40、8 μg/皿5个剂量。取2.5 g受试物加二甲基亚砜至50 ml混均即为5000 μg/皿剂量, 其余各受试物剂量1/5倍比递减稀释；上述受试液经灭菌(时间：20 min,温度：121℃, 压力：0.103 MPa)后使用；另设未处理对照、溶剂对照、阳性对照。在顶层琼脂中加入0.1 ml试验菌株增菌液、0.1 ml受试物溶液, 代谢活化时加入0.5 ml S9混合液,混匀后倒入底层培养基平板上。37℃, 培养48 h, 计数每皿回变菌落数。如果受试物的回变菌落数是自发回变菌落数2倍以上, 并具有剂量-反应关系者则定为阳性。每个剂量做3个平行。整套试验在相同条件下重复做2次并分别统计。

1.2.2 阳性对照 活化系统TA97、TA98、TA100采用二氨基芴10.0 μg/皿, TA102为1, 8-二羟基蒽醌50.0 μg/皿。非活化系统TA97、TA98、TA102为敌克松50.0 μg/皿, TA100为叠氮钠1.5 μg/皿。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

结果显示, 将人参与林蛙油配伍的保健食品在鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株TA97、TA98、TA100、TA102进行平板掺入试验, 无论在加和不加S9混合液时, 8～5000 μg/皿各剂量组均未引起试验菌株的回复突变菌落数显著增加, 与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；溶剂对照组的菌落回变数与阴性对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)；阳性诱变剂诱发回变菌落数均明显增加, 与阴性对照比较差异有统计学意义(P＜0.01)。

3 讨论

Ames试验是国际上通用的遗传毒理学鉴定致突变的必检项目之一。采用鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型菌株作为微生物, 检测化学物的致突变性。人工诱变的鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型菌株在其组氨酸操纵子中有一个突变, 突变菌株必需以来外源性组氨酸才能生长, 在无组氨酸的选择性培养基上不能存活, 诱变剂可使其基因发生回复突变, 使它在缺乏组氨酸的培养基上也能生长［4］。另外, Ames试验在安全性评价方面具有举足轻重的作用, 应在生物安全柜中操作及观察结果, 注意严格无菌操作, 以保证本次试验结果的可靠性［5］。

本试验将人参与林蛙油配伍的保健食品与各标准菌液混合后在最低营养板上培养, 依据出现的回变菌落数及致突变比值来判断其是否存在诱变物质。结果显示, 在有无S9的作用下, 人参与林蛙油配伍的保健食品各剂量组均未发现测试菌株回变菌落数超过阴性对照组回变菌落数的2倍, 且无剂量-反应关系, 而阳性对照组各测试菌株的回变菌落数均明显增加, 并超过阴性对照组回变菌落数的2倍以上, 证实本实验条件下, 鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型突变菌株对人参与林蛙油配伍的保健食品检测结果为阴性, 试验结果表明, 人参与林蛙油配伍的保健食品在5000-8μg/皿的剂量内无致突变性, 为其进行功能学评价提供了科学依据。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) .北京: 化学工业出版社, 2005: 261.

［2］ Hwang J, Kleinhenz DJ, RUpnow HL, et al.The PPAR gamma ligand, rosiglitazone, reduces vascular oxidative stress and NADPH oxidaseexpression in diabetic mice.Vascul Pharmacol, 2007, 46(6): 456-462.

［3］ 中华人民共和国卫生部, 国家标准化管理委员会.保健食品安全性毒理学评级程序和检验方法规范(2003版) .北京:中国标准出版社, 2004:24-35.

［4］ Li J, Kong X, Li X, et al.Genotoxic evaluation of aspirin eugenol ester using the Ames test and the mouse bone marrow micronucleus assay.Food Chem Toxicol, 2013, 62(12):805-809.

［5］ Anjum R, Krakat N, Toufiq Reza M, et al.Assessment of mutagenic potential of pyrolysis biochars by Ames Salmonella/mammalianmicrosomal mutagenicity test.Ecotoxicol Environ Saf, 2014, 107(19):306-312.

2014-08-28］

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