甲氨蝶呤联合环磷酰胺治疗对强直性脊柱炎患者血清MMP-3的影响

， ，，，，，(南华大学附属第二医院脊柱外科，湖南 衡阳 421001)

甲氨蝶呤联合环磷酰胺治疗对强直性脊柱炎患者血清MMP-3的影响

陈小明，曹奇，杨铁军，陈亮元，唐国军，颜学亮，唐晓军
(南华大学附属第二医院脊柱外科，湖南 衡阳 421001)

目的通过检测强直性脊柱炎患者甲氨蝶呤和环磷酰胺联合治疗前后血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的改变，了解甲氨蝶呤和环磷酰胺联合治疗强直性脊柱炎的效果及机制。方法36例强直性脊柱炎患者(甲氨蝶呤组、环磷酰胺组、甲氨喋呤联合环磷酰胺用药组，每组12例)分别在治疗前、治疗后24周时留取血清标本，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其MMP-3的浓度；分析比较胃肠道损害、肝损害和血象变化等不良事件的发生率。结果甲氨蝶呤联合环磷酰胺组MMP-3水平显著下降，与甲氨蝶呤组和环磷酰胺组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，且甲氨蝶呤联合环磷酰胺组出现胃肠道损害、肝损害和血象变化等不良比单一用药少，差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲氨蝶呤联合环磷酰胺的治疗效果优于单一用药，降低患者血清MMP-3浓度效果更佳，且不良反应发生少,这可能是其发挥临床疗效的机制。

强直性； 脊柱炎； 基质金属蛋白酶-3； 甲氨喋呤； 环磷酰胺

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种慢性全身性自身免疫性疾病，其发病原因不明的[1]。患者除可累及关节及系统外，还可使骨密度(bonemineral density,BMD)下降，甚至发生骨质疏松症(osteoporosis,OP)，有些早期即可出现骨密度下降[2]，但针对强直性脊柱炎继发骨密度下降的机制及骨代谢情况的机制目前尚不清楚[3]。强直性脊柱炎基质金属蛋白酶(matrix metalloproteins)MMPs表达异常与骨代谢紊乱及OP等疾病的发生密切相关[4]。本研究拟通过甲氨蝶呤、环磷酰胺及两者联合治疗前后强直性脊柱炎患者血清细胞因子MMP-3的变化，探讨甲氨蝶呤联合环磷酰胺发挥作用的可能机制。为强直性脊柱炎的防治选择提供理论基础，以改善强直性脊柱炎患者的预后。

1 资料与方法

1.1 主要试剂与仪器

MMP-3 ELISA试剂盒为上海西唐生物科技有限公司产品。主要仪器有：全自动定量酶标仪(芬兰DENLEDRAGON Wellscan MK3)，离心机(上海安亭科学仪器厂TGL-168)，洗板机(芬兰Wellw强直性脊柱炎h 4 MK2)，漩涡混合器(上海青浦沪西仪器厂 XW-80A)，烘箱(上海精宏实验设备有限公司DHG-9023A)等。

1.2 病人资料

选择本院2011年12月～2014至5月接受治疗的36例强直性脊柱炎患者病例资料，男性，30例，年龄19岁～52岁，平均年龄34.53±8.26岁；病程3 m～360 m，平均病程79.52±91.06个月。无既往病史、体检及常规化验检查无异常。按目的要求把病例资料分为三组：甲氨蝶呤组12例、环磷酰胺组12例、甲氨喋呤联合环磷酰胺用药组(联合治疗组)12例。

1.3 治疗方法

甲氨蝶呤组：甲氨蝶呤10～15 mg/周；环磷酰胺组：环磷酰胺200～400 mg/2～3周；甲氨蝶呤和环磷酰胺联合组：甲氨蝶呤10～15 mg/周；环磷酰胺200～400 mg/2～3周。

1.4 检测方法

采静脉血3 mL分离血清后ELISA法检测血清中的MMP-3浓度。

1.5 统计学方法

使用SPSS13.0软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05，认为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组强直性脊柱炎患者治疗前后血清MMP-3水平的变化

治疗后三组患者血清MMP-3水平均有下降趋势。甲氨蝶呤和环磷酰胺联合组治疗后血清MMP-3水平下降水平与单一用药比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1各组患者治疗前后血清MMP-3(ng/mL)的变化(n=12)

治疗前治疗后(24周)P值甲氨蝶呤组19．569．870．091环磷酰胺组16．529．650．091联合治疗组15．984．830．028

2.1 不良反应

各组患者在治疗期间均出现于药物相关的不良反应，共有11例患者(30%)、19例次发生不良反应，甲氨蝶呤组有5例患者(14%)7例次、环磷酰胺组4例患者(12%)10例次、甲氨蝶呤和环磷酰胺联合组2例患者(6%)2例次。经统计学比较分析，单一用药组之间无统计学差异，而甲氨蝶呤和环磷酰胺联合组与单一用药组差异有统计学意义(P<0.05)。甲氨蝶呤和环磷酰胺联合组出现不良比单一用药不良反应少，见表2。停药后所有反应消失。

表2与药物直接相关的不良事件发生情况(n=12,例)

总的不良反应例次胃肠道症状肝酶异常白细胞减低其它甲氨蝶呤组72221环磷酰胺组103331联合治疗组20110

3 讨 论

强直性脊柱炎患者出现的脊柱活动功能障碍与关节和骨的破坏和侵蚀关系密切，其主要原因是软骨基质的被降解是关节和骨破坏[5]。这与各种蛋白酶的作用使细胞外基质成分大量降解有关，而对这种降解破坏作用具有决定意义的是基质金属蛋白酶[6]。MMP-3能降解大量的细胞外基质成分，且国内外大量研究表明MMP-3在强直性脊柱炎脊柱是评价疾病活动性的有效指标[7]。

有研究发现，关节液中MMP-3的浓度在OP、反应性关节炎和强直性脊柱炎的炎性疾病中显著高于非炎性骨关节疾病[8]。且血清中MMP-3的水平与其它的炎性标志物如IL-6、TNF-α、CRP和ESR之间具有显著相关性。还有专家检测到RA等炎性关节液中前MMP-3的浓度比骨关节炎等非炎性关节液高9倍[9]，提示MMP-3可能是一个反映关节局部炎症状况的标志物。

血清MMP-3浓度与强直性脊柱炎病情相关性的相关研究报道不多，都大致认为与强直性脊柱炎病情活动性相关，是其骨和软骨破坏的重要原因。相比之下，结果显示治疗后三组患者血清MMP-3水平均有下降趋势。甲氨蝶呤和环磷酰胺联合组治疗后血清MMP-3水平下降水平与单一用药比较，差异有统计学意义(P<0.05)，且不良反少。说明甲氨蝶呤联合环磷酰胺较单用药组更能降低患者血清MMP-3水平，且能在治疗过程中减少不良事件的发生。这可能是其发挥临床疗效的机制。

[1] Frauendorf R,Pinheiro Mde M,Ciconelli RM.Variables related to work productivity loss in patients with ankylosing spondylitis[J].Rev Bras Reumatol，2013，53(3):303-309.

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[5] Chen CH,Lin KC,Yu DT,et al.Serum matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in ankylosing spondylitis:MMP-3 is a reproducibly sensitive and specific biomarker of disease activity[J].Rheumatology (Oxford)，2006，45(4):414-420.

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2095-1116(2014)05-0477-02

2014-05-14

陈小明，男，医学硕士，主治医师，研究方向：脊柱外科临床及相关基础研究，E-mail:chenxiaoming82@sina.com.

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(此文编辑：秦旭平)