白芍总苷对腹膜纤维化大鼠HMGB-1、Smad7的影响*

张奡 汤水福 练建红 曾科学

（1广东省第二中医院 广州510095；2广州中医药大学第一附属医院 广东广州510405；3广东省广州市中医院 广州510013）

腹膜纤维化是影响腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）失败的主要原因之一，如何改善腹膜纤维化是目前研究的热点[1]。白芍总苷（the total glucosides of paeony，TGP)是白芍根中提取的一种糖苷类物质[2]，有研究表明，白芍总苷具有抗炎及抗氧化等作用[3]。本研究通过观察白芍总苷对大鼠腹膜纤维化模型腹膜透析液中HMGB-1、smad7的影响，来评价白芍总苷对腹膜纤维化的作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 动物 健康SPF级雄性SD大鼠（周龄4～6周），体重180～200 g，分笼饲养，由广东省医学实验动物中心提供（许可证号SCXK粤2003-002）。

1.2 主要试剂与仪器药物 白芍总苷胶囊（国药准字H20055058）、低钙腹膜透析液（乳酸盐-G4.25%，国 药 准 字 H44025290）、 细 菌 脂 多 糖（Lip polysaccharides，Sigma公司生产）、酶标仪（Max190，美国 SPECTRA 公司）、离心机（Centrifuge5424，德国eppendorf公司）。

1.3 分组及给药方法 选用32只大鼠随机分为4组，每组8只，分别为：空白组、模型组、白芍总苷高剂量组、白芍总苷低剂量组。空白组每日腹腔注射生理盐水20 mL，其他三组每日腹腔内直接注射4.25%含糖透析液20 mL；白芍总苷高剂量、低剂量组每日腹腔内直接注射4.25%含糖透析液20 mL的同时给予白芍总苷200 mg/（kg·d）、100 mg/（kg·d）灌胃。后三组均在第1、3、5、7天加入细菌脂多糖0.6 mg/kg（体重）腹腔注射。整个周期为30 d。

1.4 腹透液的留取及检测 第30天将四组大鼠分别用10%水合氯醛（35 mg/kg）肌注麻醉，腹腔内注射4.25%透析液20 mL，轻揉按摩大鼠腹部以使腹膜透析液均匀地充满腹腔，4 h后沿腹白线剪开腹壁，用灭菌吸管吸取1 mL腹透液注入试管中进行检测。将腹膜透析液标本以1 500 r/min的转速离心5 min，留取样本。酶联免疫分析（ELISA）检测腹水中HMGB-1、smad7的蛋白质表达水平。

1.5 统计方法 采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，计量资料用均数±标准差（±S）表示，各组间差异性比较采用单因素方差分析并进行两两比较（LSD法），P＜0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 各组腹透液中HMGB-1的水平情况 ELISA结果表明：用Levene法进行方差齐性检验，统计量为0.554，P=0.650，按α=0.05标准检验，可认为各组数据方差齐。模型组、白芍总苷高浓度组、白芍总苷低浓度组腹透液中HMGB-1水平与空白组相比有所增高，白芍总苷高剂量组、白芍总苷低剂量组与模型组相比较，HMGB-1水平有所下降，但各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。因操作等原因，本项目有效标本检测值空白组为7个，模型组为7个，白芍总苷低剂量组为6个。见表1。

表1 各组间大鼠腹透液中HMGB-1水平比较 （±S） pg/mL

表1 各组间大鼠腹透液中HMGB-1水平比较 （±S） pg/mL

注：单因素方差分析：与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＞0.05。

组别 n HMGB-1空白组模型组白芍总苷高剂量组白芍总苷低剂量组7786 7.37±1.60 8.82±1.14*7.92±1.49*#8.35±1.63*#

2.2 各组腹透液中Smad7的水平情况 ELISA结果表明：用Levene法进行方差齐性检验，统计量为0.094，P=0.963，按α=0.05标准检验，可认为各组数据方差齐。模型组与空白组比较，腹透液中Smad7的含量显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。白芍总苷高剂量组、白芍总苷低剂量组升高更为明显，与空白组相比，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组相比较，白芍总苷高剂量组、白芍总苷低剂量组腹透液中Smad7水平明显上调，差异有统计学意义（P＜0.05）。余各组间两两比较，腹透液中Smad7含量无统计学差异（P＞0.05）。见表2。

表2 各组间大鼠腹透液中Smad7水平比较 （±S） pg/mL

表2 各组间大鼠腹透液中Smad7水平比较 （±S） pg/mL

注：单因素方差分析：与空白组比较，*P＜0.01，#P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

组别 n Smad7空白组模型组白芍总苷高剂量组白芍总苷低剂量组7786 1.66±0.37 2.28±0.46#2.82±0.52*△2.87±0.55*△

3 讨论

高迁移率族蛋白-1（High mobility group protein-1，HMGB-1）是一类高度保守的蛋白质，参与了基因调节和修复等过程[4]。作为晚期的炎症介质，通过糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products，RAGE）发挥促进炎症的效应，从而在炎症反应性疾病的病理过程中发挥作用。HMGB-1通过磷脂酰丝氨酸结合抑制凋亡中性粒细胞的吞噬功能，参与加强炎症反应[5]。研究发现HMGB-1在慢性肾衰竭病变时显著升高，有学者认为其可能是慢性肾衰竭诊断的新指标[6～7]。有研究提示HMGB-1作为炎症因子也可能参与了腹膜透析相关性腹膜炎的发生[8]，但国内外相关报道不多。HMGB-1有可能成为新的治疗靶点。

TGF-β1途径是目前公认的腹膜纤维化发生机制之一。TGF-β1/Smads信号通路在腹膜纤维化过程中的重要作用已被多个研究所证实[9]。TGF-β1下游信号通路Smads家族中的Smad7属抑制型Smads，它能反馈性抑制Smad通路，进而抑制TGF-β1介导的细胞外基质的合成[10]从而减缓腹膜纤维化的进程。通过上调Samd7的表达对于腹膜纤维化的防治具有潜在临床应用价值[9]。

白芍是我国传统中药，为毛莨科多年生草本芍药的干燥根。白芍总苷是白芍的提取物，多用于风湿免疫疾病方面的治疗[11]。研究显示，白芍总苷能够抑制发生纤维化的肝组织中TGF-β1和NF-κB的表达、进而抑制肝组织中胶原的生成以达到治疗肝脏纤维化的目的[12]。芍药苷是白芍总苷的主要的成分，占白芍总苷的90%以上，研究显示其对LPS诱导的肝损伤有保护作用，可能是通过抑制晚期炎症介质HMGB-1的核转位和释放而发挥作用[13]。芍药苷可能通过抑制HMGB-1释放、下调细胞间黏附分子1的表达等途径对内皮细胞起保护作用[14]。以上结果提示白芍总苷有可能通过下调HMGB-1的表达，从而抑制炎症相关的信号转导通路，进而遏止大鼠腹膜纤维化的过程。综合白芍总苷的上述作用，本课题提出了使用白芍总苷防治大鼠腹膜纤维化。研究发现，芍药苷对LPS诱导的脐静脉内皮细胞有保护作用，其途径是通过抑制HMGB-1的释放及细胞间黏附分子1的表达来发挥作用[15]。本研究发现，各组腹透液中HMGB-1均增高，模型组最高，在灌食白芍总苷后，可一定程度下调，虽无明显统计学差异，但提示药物治疗可能有一定效果。考虑可能与样本量不大及造模时间短有关，在今后的工作中将进一步进行研究。在灌食白芍总苷治疗组中，腹透液中Smad7的含量明显增高，说明药物治疗有效。提示白芍总苷可能通过上调Smad7水平来延缓腹膜纤维化过程，对大鼠腹膜透析模型腹膜具有一定的保护作用，其剂量与疗效未发现正相关。

综上，本研究表明白芍总苷对大鼠腹膜纤维化有一定的保护作用，可能通过上调Smad7水平来发挥作用，是否与HMGB-1有关还需更多的试验证实。白芍总苷对防治腹膜纤维化有一定的治疗前景。

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