超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪①

刘淳

摘 要：目的：建立了超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪的方法。方法：采用乙腈前处理，超声波法提取，超高效液相色谱-紫外检测器测定。色谱柱BEH C18 1.7 μm×50 mm×2.1 mm，流速：0.4 mL/min，流动相：乙腈∶乙酸铵=60∶40，柱温40 ℃，检测波长254 nm，进样量：5 μL。结果：氯丙嗪方法检出限7.5 μg/kg，在0 mg/L～1.00 mg/L范围内呈良好线性关系，相关系数=0.9998。方法平均回收率为87.7%～101.0%，RSD为1.2%～2.6%。结论：本方法适用于猪肉中氯丙嗪的测定。

关键词：超高效液相色谱  氯丙嗪  残留量  猪肉

中图分类号：R155.5 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）10（c）-0187-03

Determination of chlorpromazine residues in meat products by ultra high performance liquid chromatography

LIU Chun

（Dongcheng district Center for Diseases Prevention and Control，Beijing，100009，China）

Abstract：Objective： Ultra High Performance Liquid Chromatography（UPLC） method was determination of chlorpromazine residue in pork. Method： The target analyte was extracted form sample with acetonitrile and determined by UPLA. Chromatographic column： BEH C18 1.7 μm× 50 mm×2.1 mm， flow rate： 0.4  mL/min， mobile phase： acetonitrile∶ammonium acetate=60∶40， column temperature： 40℃， detection wavelength： 254 nm， injection volume：10μL.Result：The detection limit was 15.0μg/kg.The linearity ranged form 0 to 1.00 mg/L with the correlation coefficient of 0.9998. The recovery was 87.7% to 101.0%， RSD was 1.2% to 2.6%. Conclusion： The method was suitable for determination of chlorpromazine residue in pork.

Key word：UPLC;chlorpromazine;residues;pork

氯丙嗪（Chlorpromazine，CHL）又称冬眠灵，属于吩噻嗪类药物，是抗精神病类药的一种，涉及中枢神经、植物神经、心血管和内分泌系统等方面，其中主要被用作镇静药。一些养殖户因经济利益的驱使，在饲料中违规添加氯丙嗪抑制动物的运动，从而间接起到催肥作用。氯丙嗪在家畜饲养中的滥用，不仅会引起动物的中毒，还会通过在动物性食品的残留直接危害到人类。欧盟早已将氯丙嗪列入禁用清单中，我国也规定氯丙嗪禁止用于食品性动物。建立猪肉中氯丙嗪的检测方法，对于研究其在猪、禽体内的代谢及组织残留，实施猪、兽药残留监控具有重要的实际意义。

目前主要采用高效液相色谱法，液质联用法，气质联用法，化学发光法和免疫分析法检测氯丙嗪，采用超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪含量鲜有报道。本文采用乙腈进行样品前处理，超声波提取，建立了超高效液相色谱测定猪肉在氯丙嗪的方法。

1 试验部分

1.1 主要仪器与试剂

Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色谱仪（美国，Waters公司）;3-30K冷冻高速离心机（美国，Sigma公司）。

氯丙嗪标准品（纯度≥99.0%，CAS：50-53-3，Dr.Ehrenstrfer公司）;乙腈（色谱纯，Fisher公司）;试验用水为电导率在18 MΩ·cm以上的超纯水。

1.2 分析方法

1.2.1 色谱条件

ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）;流动相乙腈∶乙酸铵=60∶40;检测波长254 nm;流速0.4 mL·min-1;柱温40 ℃;进样量5 μL。

1.2.2 标准曲线

精确称取氯丙嗪标准品0.0100 g，用少量乙腈溶解，并转移到10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪标准储备液浓度1.00 mg/mL。取氯丙嗪标准储备液1.00 mL，转移到100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪标准使用液浓度10.00 μg/mL。4 ℃避光保存，保存期1个月。

精确吸取氯丙嗪标准使用液0.01 mL、0.50 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，过0.22 μm尼龙微孔滤膜，即为0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪标准溶液。此溶液注意避光，现用现配。

1.2.3 样品制备endprint

取适量粉碎混匀的样品于50 mL离心管中，加25.00 mL乙腈，漩涡混匀30 s，超声避光提取15 min，12000 r/min离心10 min，避光静置20 min，取上清液过0.22 μm尼龙微孔滤膜，上机测定。

1.2.4 样品测定

在色谱条件下，测定标准系列及样品。以目标化合物保留时间及特征光谱图定性;以峰面积为响应值，外标法定量。

1.2.5 定量计算

式中：X-试样中氯丙嗪的含量，单位为微克每千克（mg/kg）。

C-试液中氯丙嗪的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）。

V-试样稀释总体积，单位为毫升（mL）。

m-试样质量，单位为克（g）。

计算结果保留两位有效数字。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

采用不同体积比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸铵作为流动相，将1.00 μg/mL的标准溶液进样检测，比较出峰情况。综合考虑峰形、峰宽、出峰时间，选择乙腈∶乙酸铵=40∶60作为流动相。图1为氯丙嗪标准品的色谱图。图2为氯丙嗪标准物质扫描光谱图。

按色谱条件进行分析，图3为空白猪肉样品的色谱图。图4为添加1.00 μg/kg氯丙嗪标准品样品色谱图。

2.2 方法的线性范围和检出限

精确吸取氯丙嗪标准使用液，用乙腈溶液依次稀释，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪标准溶液，以氯丙嗪的浓度和峰面积进行回归，得回归方程y=69121.94x-396.59，相关系数=0.9999。

按照取样10.0 g，定容25.00 mL，以基线噪声3倍相当的标准物质为检出限，计算最低检出限为7.5μg/kg，最低检出质量浓度为0.01 μg/mL。

2.3 方法的准确度和精密度

以空白猪肉为测试对象，分别添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3个水平的氯丙嗪标准品做加标回收实验，以考察方法的准确度（结果见表1）。

实验结果表明，本方法均回收率为87.7%～101.0%，RSD为1.2%～2.6%，符合方法学要求。

要获得氯丙嗪理想的回收率和较低的检出限，需要注意以下方面：氯丙嗪见光易分解，样品前处理全程需进行避光操作，标准使用液要贮存在棕色容量瓶中;样品离心后，须避光静置20 min，使样品进一步沉降分层;微孔过滤膜须采用尼龙材质（Nylon），避免目标物吸附在微孔过滤膜;配制标准溶液时，需采用100%乙腈，避免产生溶剂效应。

3 结语

本方法采用乙腈溶液超声提取，建立了超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪的方法。方法重现性好，灵敏度高，操作简便，精密度及准确度满意，适用于猪肉中氯丙嗪的日常监测工作。

参考文献

[1] 刘建静，杨曙明.氯丙嗪残留技术研究进展[J].中国兽牧兽医，2008，35（10）：141-144

[2] 袁圣柳，李晓锋，姜晓满，等.自动固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定生活污水中13种抗精神病药物[J].分析化学;2013（1）.

[3] 渠岩，路勇，冯楠，等.基质固相分散-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜禽肉中残留的13种镇静药物[J].食品科学;2012（8）.

[4] 严丽娟，张峰，吴敏，等.UPLC-ESIMS/MS法测定动物饲料中苯二氮卓类药物[J].分析测试学报，2011（11）.

[5] 于慧娟，沈康俊，李向军，等.液相色谱-串联质谱法测定养殖鱼中痕量安眠酮的残留量[J].质谱学报，2012（1）.endprint

取适量粉碎混匀的样品于50 mL离心管中，加25.00 mL乙腈，漩涡混匀30 s，超声避光提取15 min，12000 r/min离心10 min，避光静置20 min，取上清液过0.22 μm尼龙微孔滤膜，上机测定。

1.2.4 样品测定

在色谱条件下，测定标准系列及样品。以目标化合物保留时间及特征光谱图定性;以峰面积为响应值，外标法定量。

1.2.5 定量计算

式中：X-试样中氯丙嗪的含量，单位为微克每千克（mg/kg）。

C-试液中氯丙嗪的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）。

V-试样稀释总体积，单位为毫升（mL）。

m-试样质量，单位为克（g）。

计算结果保留两位有效数字。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

采用不同体积比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸铵作为流动相，将1.00 μg/mL的标准溶液进样检测，比较出峰情况。综合考虑峰形、峰宽、出峰时间，选择乙腈∶乙酸铵=40∶60作为流动相。图1为氯丙嗪标准品的色谱图。图2为氯丙嗪标准物质扫描光谱图。

按色谱条件进行分析，图3为空白猪肉样品的色谱图。图4为添加1.00 μg/kg氯丙嗪标准品样品色谱图。

2.2 方法的线性范围和检出限

精确吸取氯丙嗪标准使用液，用乙腈溶液依次稀释，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪标准溶液，以氯丙嗪的浓度和峰面积进行回归，得回归方程y=69121.94x-396.59，相关系数=0.9999。

按照取样10.0 g，定容25.00 mL，以基线噪声3倍相当的标准物质为检出限，计算最低检出限为7.5μg/kg，最低检出质量浓度为0.01 μg/mL。

2.3 方法的准确度和精密度

以空白猪肉为测试对象，分别添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3个水平的氯丙嗪标准品做加标回收实验，以考察方法的准确度（结果见表1）。

实验结果表明，本方法均回收率为87.7%～101.0%，RSD为1.2%～2.6%，符合方法学要求。

要获得氯丙嗪理想的回收率和较低的检出限，需要注意以下方面：氯丙嗪见光易分解，样品前处理全程需进行避光操作，标准使用液要贮存在棕色容量瓶中;样品离心后，须避光静置20 min，使样品进一步沉降分层;微孔过滤膜须采用尼龙材质（Nylon），避免目标物吸附在微孔过滤膜;配制标准溶液时，需采用100%乙腈，避免产生溶剂效应。

3 结语

本方法采用乙腈溶液超声提取，建立了超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪的方法。方法重现性好，灵敏度高，操作简便，精密度及准确度满意，适用于猪肉中氯丙嗪的日常监测工作。

参考文献

[1] 刘建静，杨曙明.氯丙嗪残留技术研究进展[J].中国兽牧兽医，2008，35（10）：141-144

[2] 袁圣柳，李晓锋，姜晓满，等.自动固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定生活污水中13种抗精神病药物[J].分析化学;2013（1）.

[3] 渠岩，路勇，冯楠，等.基质固相分散-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜禽肉中残留的13种镇静药物[J].食品科学;2012（8）.

[4] 严丽娟，张峰，吴敏，等.UPLC-ESIMS/MS法测定动物饲料中苯二氮卓类药物[J].分析测试学报，2011（11）.

[5] 于慧娟，沈康俊，李向军，等.液相色谱-串联质谱法测定养殖鱼中痕量安眠酮的残留量[J].质谱学报，2012（1）.endprint

取适量粉碎混匀的样品于50 mL离心管中，加25.00 mL乙腈，漩涡混匀30 s，超声避光提取15 min，12000 r/min离心10 min，避光静置20 min，取上清液过0.22 μm尼龙微孔滤膜，上机测定。

1.2.4 样品测定

在色谱条件下，测定标准系列及样品。以目标化合物保留时间及特征光谱图定性;以峰面积为响应值，外标法定量。

1.2.5 定量计算

式中：X-试样中氯丙嗪的含量，单位为微克每千克（mg/kg）。

C-试液中氯丙嗪的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）。

V-试样稀释总体积，单位为毫升（mL）。

m-试样质量，单位为克（g）。

计算结果保留两位有效数字。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

采用不同体积比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸铵作为流动相，将1.00 μg/mL的标准溶液进样检测，比较出峰情况。综合考虑峰形、峰宽、出峰时间，选择乙腈∶乙酸铵=40∶60作为流动相。图1为氯丙嗪标准品的色谱图。图2为氯丙嗪标准物质扫描光谱图。

按色谱条件进行分析，图3为空白猪肉样品的色谱图。图4为添加1.00 μg/kg氯丙嗪标准品样品色谱图。

2.2 方法的线性范围和检出限

精确吸取氯丙嗪标准使用液，用乙腈溶液依次稀释，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪标准溶液，以氯丙嗪的浓度和峰面积进行回归，得回归方程y=69121.94x-396.59，相关系数=0.9999。

按照取样10.0 g，定容25.00 mL，以基线噪声3倍相当的标准物质为检出限，计算最低检出限为7.5μg/kg，最低检出质量浓度为0.01 μg/mL。

2.3 方法的准确度和精密度

以空白猪肉为测试对象，分别添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3个水平的氯丙嗪标准品做加标回收实验，以考察方法的准确度（结果见表1）。

实验结果表明，本方法均回收率为87.7%～101.0%，RSD为1.2%～2.6%，符合方法学要求。

要获得氯丙嗪理想的回收率和较低的检出限，需要注意以下方面：氯丙嗪见光易分解，样品前处理全程需进行避光操作，标准使用液要贮存在棕色容量瓶中;样品离心后，须避光静置20 min，使样品进一步沉降分层;微孔过滤膜须采用尼龙材质（Nylon），避免目标物吸附在微孔过滤膜;配制标准溶液时，需采用100%乙腈，避免产生溶剂效应。

3 结语

本方法采用乙腈溶液超声提取，建立了超高效液相色谱测定猪肉中氯丙嗪的方法。方法重现性好，灵敏度高，操作简便，精密度及准确度满意，适用于猪肉中氯丙嗪的日常监测工作。

参考文献

[1] 刘建静，杨曙明.氯丙嗪残留技术研究进展[J].中国兽牧兽医，2008，35（10）：141-144

[2] 袁圣柳，李晓锋，姜晓满，等.自动固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定生活污水中13种抗精神病药物[J].分析化学;2013（1）.

[3] 渠岩，路勇，冯楠，等.基质固相分散-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜禽肉中残留的13种镇静药物[J].食品科学;2012（8）.

[4] 严丽娟，张峰，吴敏，等.UPLC-ESIMS/MS法测定动物饲料中苯二氮卓类药物[J].分析测试学报，2011（11）.

[5] 于慧娟，沈康俊，李向军，等.液相色谱-串联质谱法测定养殖鱼中痕量安眠酮的残留量[J].质谱学报，2012（1）.endprint