牛冷冻精液产品细菌数的控制

文│张志宏（内蒙古自治区通辽市家畜繁育指导站）

梁宝海（内蒙古自治区通辽市科尔沁区莫力庙苏木畜牧兽医工作站）

农业部牛冷冻精液质量监测中心数据显示，在牛冷冻精液抽检不合格产品中，细菌数超过国家标准比例较高，甚至有些生产单位的产品因为细菌数超标使产品合格率为零。细菌数在牛冷冻精液生产过程中最容易出现问题，必须引起足够的重视。生产环境、生产工艺各环节及管理等方面的细节都能影响产品细菌数，控制细菌数的措施要贯穿全部生产过程，细节决定成败在这里体现尤为突出。在生产实践中，我们将可能造成细菌污染的细节进行分析并制定周密的控制措施，取得了良好的效果。

一、生产环境的控制

1.环境卫生。牛冷冻精液生产环境包括采精室和化验室（采精室、原精处理室、配剂室、洗涤室等）。环境卫生是减少污染的基础。生产环境要求有良好的通风条件，保证空气清新、工作台面、门窗、地面、机器、设备等整洁。实际生产中有时会出现重视生产工艺流程控制而忽视环境卫生，导致细菌数控制效果不理想。在北方地区夜间有风沙，次日要提前到岗做生产准备，将采精室、原精处理室、配剂室的工作台面、地面及机器设备重新擦拭一遍，才能开始工作。采精结束要及时清理采精场地，保证地面干净、空气清新，以防止蚊蝇滋生。

2.原精处理台的位置。原精镜检、稀释工作台面尽量不正对采精室窗口，要离开窗口1.0米以上。多数单位为了操作方便，原精镜检、稀释处理的台面与传送原精的采精室窗口相对，工作时采精室有几头甚至十几头牛，空气卫生水平低于原精处理室，原精在此污染机会增多。

3.空气消毒和灭菌。空气消毒和灭菌一般采用紫外线灯，要注意紫外线灯消毒灭菌的温度要求、有效空间及紫外线灯管的有效寿命，保证消毒效果。紫外线空气消毒要求室内温度17℃以上，低于10℃效果不理想；30瓦灯有效消毒空间是20立方米；紫外线灯管的有效使用寿命要按照不同品牌灯管的说明书要求及时更换，不要误认为紫外线灯管只要亮就有杀菌消毒效果，因为灯管随着使用的时间增长，紫外线会衰减。紫外线杀菌灯一般采用的是185纳米或254纳米的波长，所以紫外线穿透能力较差，尘埃、纸片、玻璃、塑料都会遮挡住光线，从而大幅降低辐射强度。杀菌灯管上的灰尘、油渍都会直接影响其穿透能力，所以新灯管在使用前要用纱布沾75%的酒精擦拭，清除油渍、手汗及灰尘。使用之中的灯管要每周用同样方法擦拭一次，以免影响紫外线穿透率及照射强度。照射表面消毒物品距离紫外线灯源要在2米以内，物品、工作服等不要叠放。

二、器械洗涤及化学试剂灭菌消毒过程的细节控制

1.器械浸泡与洗涤。

（1）浸泡。假阴道、漏斗、集精管、查原精活力和密度用的滴管、移液器滴头、细管分装用的胶管、针头等用完应随时浸泡在有洗涤剂的温水中，这样能及时抑制细菌的繁殖，并使下一步洗涤省时省力，提高洗涤效果。不要等工作全部完毕后统一浸泡。

（2）洗涤。使用常用洗涤剂即可，第一次洗涤用温水效果好，然后清洗3～4次，最后一次用蒸馏水冲洗。假阴道要用长刷从假阴道两端分别伸进去刷拭，假阴道清洗不干净、消毒不严格，极易造成严重污染；玻璃器皿洗完要达到透明无水滴附着；细管分装胶管是一次性的，但生产中大多重复使用，所以浸泡、洗涤非常关键，洗涤时要多次震荡、冲洗，必要时用注射器进行冲洗。

2.器械和化学试剂灭菌消毒。假阴道、漏斗、胶管等橡胶制品及金属制品用75%酒精擦拭，充分蒸发风干，也可用蒸煮灭菌消毒，效果好于酒精；玻璃制品及搅拌棒要高温干燥灭菌；假阴道气嘴定期浸泡在75%酒精或其他消毒液中消毒，这点容易被忽视；恒温箱要定期消毒，要每周至少用75%酒精棉擦拭内壁及内置架一次。甘油、凡士林每次使用前水浴煮沸消毒15分钟，凡士林消毒后放进56℃恒温箱中备用，甘油冷却至室温备用。

三、抗生素的正确使用与稀释液配制

1.抗生素。注意抗生素发挥作用的温度条件，抗生素在30～40℃发挥作用充分。生产中配制稀释液添加抗生素的温度一般10℃左右，因此配制完稀释液要在使用前放置在33～35℃水浴箱中20分钟后再用，这样抗生素才能良好发挥作用。

2.无卵黄稀释液。要注意产品规定的稀释配制条件，一般要求与双蒸水在33～35℃水浴箱中等温后稀释配制，不能从冰箱保鲜室取出就进行稀释配制。

3.自制稀释液。自制稀释液因含丰富营养物质，细菌容易繁殖。污染原因主要是卵黄带菌、甘油和搅拌磁头没消毒、抗生素使用方法不当等。消毒灭菌方法上面已述。鸡蛋要新鲜，使用前用75%酒精擦拭消毒。

四、公牛和台牛的污染控制

1.种公牛疾病。当公牛患生殖道炎症、前列腺炎、痢疾等疾病时，可能造成原精细菌数增多，应积极预防，减少疾病发生。当发病时应及时治疗。视病情情况，决定是否采集及弃用精液。

2.公牛卫生。牛舍保证清洁干燥；每天刷试种公牛一次，保证牛体卫生。定期修剪包皮毛，保持2厘米左右。

3.台牛。要健康，无生殖道炎症、痢疾。采精前台牛后躯，尤其是尾部、臀部要用清水清洗，用干净毛巾擦拭干净，将尾巴拴系固定。

五、生产流程各环节的污染控制

1.采精。公牛腹部和包皮冲洗，可用清水或生理盐水，冲洗器械可采用高压水枪或喷雾器，使冲洗液呈水柱状，冲洗完用毛巾顺着一个方向（从牛尾到牛头）将包皮口周围擦干。严格做到一牛一巾，一次一巾，避免交叉感染。没条件冲洗或清洗不能达到以上要求的，则不提倡冲洗包皮，因为若冲洗不干净反而会破坏包皮屏障功效，造成污染。采精操作前假阴道口保持用塑料袋封闭状态，采精瞬间迅速将塑料袋拿掉，防止假阴道的污染。假阴道要保证采精一次一个，严禁一次采精没射精后继续使用该假阴道，这会造成假阴道内严重污染。采精技术要娴熟，禁止用手接触公牛阴茎。

2.原精检验、稀释。原精检验过程用的滴管、稀释用的玻璃瓶要随用随在恒温箱中拿，每次拿完迅速关上门，尽量减少恒温箱的污染。镜检、稀释操作要快，装稀释液的三角瓶要加盖或用消毒纸封口。

3.细管分装。操作人员要戴手套，严禁接触安装针头及细管的接触精液端。

4.细管机卫生。使用完毕后立即进行擦拭，特别是灌装机的封口处，用温水将残留精液擦净，再用75%酒精擦拭。其他接触细管的部位要每次生产后及时擦拭、灭菌。

六、工作人员的卫生

1.健康。接触精液的操作人员要健康，不能患传染病，尤其是人畜共患传染病，不能让患有痢疾的工作人员带病参加任何原精处理环节。

2.整洁。工作时穿戴工作服（帽），采精员的工作衣、帽保证每次采精后清洗。