电针对慢性强迫游泳应激模型大鼠抑郁样行为及血清5－HT的影响

包伍叶，宋英周，卢峻，任英贞，李伊朔，图娅，郭卓，孙岚

(1．北京中医药大学，北京 100029;2．内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028007)

抑郁症是由生物、心理、社会等多种因素相互作用而引起的以情感或心境异常改变为主的精神疾患，具有很高的致死、致残率，严重威胁着人类健康。据世界流行病学调查研究显示，预计到2020年重度抑郁将成为人类死亡和残疾的第二原因。临床实践证明，电针能有效改善抑郁症患者躯体症状，具有良好的抗抑郁疗效［1］。本课题组在慢性温和不可预知应激结合孤养的抑郁模型上，观察电针抗抑郁效应及其作用机制。发现电针具有抗抑郁效应，其机制与电针能激活抑郁模型大鼠脑内不同神经信号转导通路相关效应分子，促进大鼠海马神经元再生和突触可塑性，降低应激所致的神经元损伤等密切相关［2－4］。

慢性强迫游泳应激模型属于行为绝望抑郁模型，利用动物不能逃逸出恶劣环境，以致行为绝望而设计出的一种抑郁模型，广泛应用于抗抑郁药疗效评价及抑郁症机制研究［5］。慢性强迫游泳应激模型大鼠行为反应较好的模拟人类抑郁情绪，具有比较理想的表面效度［6］。目前，尚未有电针对慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠行为及血清5－HT的影响的相关报道。为此，本研究在慢性强迫游泳应激抑郁模型上，观察电针对慢性强迫游泳应激模型大鼠行为及血清5－HT含量的影响。

1 材料与方法

1．1 实验动物及分组

选取健康、清洁级雄性 SD大鼠40只，体质量(180±10)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号:SCXK(京)2012－0001。实验前大鼠适应性饲养1周之后随机分为正常组、模型组、电针组、氟西汀组，每组10只。

1．2 主要仪器及试剂

韩氏电针仪(LH－202型，北京华卫产业开发公司);酶标仪(SpectraMax M5，美国);盐酸氟西汀片(美国礼来公司，批号J20120001，20mg/片);5－HT试剂盒(SIGMA公司)。

1．3 模型制备

将大鼠放入游泳缸(高40cm、直径18cm)中，水深30cm、温度(10 ±0．5)℃，每次1 只，每次游泳5min，连续14天。每2只游完更换1次水。

1．4 干预方法

正常组大鼠不接受任何刺激。模型组大鼠仅接受强迫游泳应激刺激。电针组大鼠强迫游泳应激刺激前1h接受针刺干预。参照《实验针灸学》，选取“百会”、“印堂”穴，以1mm 毫针平刺0．3～0．5mm，针柄接韩氏LH202型电针仪，电流强度为0．6mA，连续波型，频率为2Hz，每次留针10min，每日1次，连续治疗14天。氟西汀组大鼠接受慢性强迫游泳应激前1h灌胃给药(1．8mg/kg)，用蒸馏水配成氟西汀悬浮液，按10ml/kg给药，每日1次，共14天。

1．5 行为观察

1．5．1 体质量测量分别在应激前(基线值)和应激结束后测量各组大鼠体质量。

1．5．2 旷场实验 应激结束后24h内进行旷场实验。将大鼠放入高40cm，长、宽均为80cm，周壁、底面为黑色，底面用白线划分为面积相等的25块的敞箱底面的中心方格，以动物穿越底面的格数(四爪均进入的方格方可记数)为水平运动次数，以后肢直立次数(两前爪腾空或攀附箱壁)为垂直运动次数。记录5min内每只大鼠平行运动次数和垂直运动次数。

1．5．3 糖水实验 应激结束后测每只大鼠糖水摄入量。将大鼠禁水24h，然后给予1%的蔗糖水250g，测2h(14:00～16:00)内的糖水摄入量。

1．6 血清5－HT含量的测定 实验结束后将大鼠断头取血。于室温放置2h后离心(1000rpm)20min，取上清液，按照血清5－HT ELASA试剂盒说明进行操作。

1．7 统计学处理

所有实验数据均采用SPSS 13．0统计软件进行分析，以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用单因素方差分析，以P＜0．05为差异有显著性。

2 结果

2．1 电针对慢性强迫游泳应激大鼠体质量的影响

各组大鼠接受应激前体质量基线值无显著性差异(P＞0．05)。强迫游泳应激14天后正常组、模型组与治疗组之间产生了显著差异。与正常组比较，模型组大鼠体质量明显下降(P＜0．05);与模型组比较，电针组和氟西汀组大鼠体质量明显增加(P＜0．05);电针组与氟西汀组之间比较，无显著性差异(P＞0．05)，见表1。

表1 各组大鼠体质量变化比较(±s，g)

表1 各组大鼠体质量变化比较(±s，g)

注:与正常组比较，*P ＜0．05;与模型组比较，△P ＜0．05。

组别 n 应激前 应激结束后正常组10 236．6 ±8．35 334．4 ±18．59模型组 10 236．8 ±9．94 298．5 ±9．95*电针组 10 237．4 ±8．73 315．6 ±8．54△氟西汀组 10 239．6 ±7．97 316．2 ±11．79△

2．2 电针对慢性强迫游泳应激大鼠旷场实验的影响

应激结束后旷场实验结果显示，与正常组比较，模型组大鼠平行运动和垂直运动次数明显下降(P＜0.05);与模型组比较，电针组和氟西汀组大鼠平行运动和垂直运动次数显著增加(P＜0．05)，电针组大鼠平行运动改善更明显(P＜0．01)，见表2。

表2 各组大鼠平行运动与垂直运动结果比较(±s)

表2 各组大鼠平行运动与垂直运动结果比较(±s)

注:与正常组比较，*P ＜0．05;与模型组比较，△P ＜0．05，△△P ＜0.01。

组别 n 平行运动次数 垂直运动次数正常组10 64．3 ±26．9 19．4 ±12．8模型组 10 25．3 ±14．9* 8．3 ±6．9*电针组 10 55．6±24．1△△ 18．3±9．52△氟西汀组 10 37．4±15．9△ 17．3±7．69△

2．3 电针对慢性强迫游泳应激大鼠糖水实验的影响

检测结果显示，模型组大鼠糖水摄入量较正常组降低，有极显著性差异(P＜0．05);与模型组比较，电针组和氟西汀组大鼠糖水摄入量显著增加(P＜0.05);电针组与氟西汀组之间比较，无显著性差异(P ＞0.05)，见表3。

表3 各组大鼠糖水摄入量的比较(±s，n=10)

表3 各组大鼠糖水摄入量的比较(±s，n=10)

注:与正常组比较，*P ＜0．05;与模型组比较，△P ＜0．05。

10 25．1 ±4．82模型组 10 12．8 ±2．15*电针组 10 21．6 ±6．77△氟西汀组 10 23．1 ±8．01正常组△

2．4 电针对慢性强迫游泳应激大鼠血清5－HT的影响

与正常组比较，模型组大鼠血清5－HT含量显著降低(P＜0．05);与模型组比较，电针组和氟西汀组大鼠血清5－HT含量增加显著(P＜0．05);电针组与氟西汀组之间比较，无显著性差异(P＞0．05)，见表4。

表4 各组大鼠血清5－HT含量的比较(±s)

表4 各组大鼠血清5－HT含量的比较(±s)

注:与正常组比较，*P ＜0．05;与模型组比较，△P ＜0．05。

10 4．05 ±0．79模型组 10 2．91 ±0．28*电针组 10 3．61 ±0．44 △氟西汀组 10 3．69 ±0．33正常组△

3 讨论

20世纪70年代建立了强迫游泳抑郁动物模型，并广泛用于抗抑郁药的筛选，也用于研究抗抑郁药的作用机制以及研究抑郁症的神经生理学机制。强迫游泳应激模型属于“行为绝望”模型，与人类抑郁症有相似的行为表现和病理生理学改变［7］。慢性强迫游泳应激中水温和时间是两个重要的参数。大鼠在水温(10±0．5)℃的慢性强迫游泳应激7天后出现体质量和摄食的变化，但应激14天才出现明显的抑郁行为表现［8］。亓晓丽［9］等研究发现，慢性强迫游泳应激诱发动物明显的焦虑和抑郁情绪，使动物的体质量增长缓慢，降低大鼠活动性和探究行为，说明强迫游泳应激模型大鼠出现的行为反应较好的模拟了人类抑郁情绪，具有良好的表面效度。

强迫游泳实验在抑郁症相关研究中广泛应用。报道显示，慢性强迫游泳应激模型大鼠海马区5－HT1A受体的mRNA表达降低［10］，前额叶内谷胺酸及谷氨酰胺+谷氨酸等代谢物水平显著低于正常组，这些变化与临床发现的重型抑郁症患者存在谷氨酸系统代谢异常的表现相似［11］。慢性强迫游泳应激能诱发大鼠抑郁行为和症状与大鼠海马神经元再生功能障碍密切相关，其机制可能与磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p－CREB)的表达和脑源性神经营养因子mRNA水平的表达降低有关［12－13］。慢性强迫游泳应激提高大鼠下丘脑－垂体肾上腺皮质轴和蛋白激酶的磷酸化水平［14－15］。

本研究中我们采用慢性强迫游泳应激抑郁模型，观察电针对慢性强迫游泳应激大鼠抑郁样行为及血清5－HT的影响。结果显示，慢性强迫游泳后大鼠旷场实验平行运动和直立运动降低，对奖励物质蔗糖水的渴求也降低，这一结果与文献报道一致［16］。电针治疗后大鼠体质量、旷场实验中的水平运动和直立行为、糖水摄入量均显著增加;电针组与氟西汀组之间比较，无显著性差异。模型组大鼠血清5－HT含量较正常组降低，而电针和氟西汀治疗后慢性强迫游泳应激大鼠血清5－HT含量显著增加。从上述结果可以得出如下结论，电针能有效改善慢性强迫游泳应激大鼠活动性、探究行为和快感缺乏，具有抗抑郁作用。机体内单胺类神经递质含量减少被认为是抑郁症发病机制之一，在抑郁症患者以及抑郁症动物模型的研究中均能看到5－HT 含量减少表现［17－18］。因此，我们认为增加大鼠血清5－HT含量是电针对慢性强迫游泳应激抑郁大鼠发挥抗抑郁作用机制之一。

［1］ 段冬梅，图娅，陈利平．电针与百优解对伴躯体症状抑郁症有效性的评价［J］．中国针灸，2008，28(3):167－170．

［2］ 梁佳，卢峻，崔善福，等．针刺对抑郁模型大鼠皮层及海马脑源性神经营养因子基因和蛋白表达的影响［J］．针刺研究，2012，37(1):20－24．

［3］ 韩焱晶，李文迅，贾宝辉，等．电针对抑郁模型大鼠海马一氧化氮－环磷酸鸟苷信号转导通路的影响［J］．针刺研究，2009，34(4):236－241．

［4］ 戴巍，李卫东，卢峻，等．电针对慢性应激抑郁大鼠海马神经元凋亡及 JNK信号转导通路的影响［J］．针刺研究，2010，35(5):330－334．

［5］ Holmes PV．Rodent models of depression:reexamining validity without anthropomorphic inference［J］．Crit Rev Neurobiol，2003，15(2):143－174．

［6］ 亓晓丽，林文娟．慢性强迫游泳应激对大鼠情绪和脑细胞外信号调节激酶磷酸化水平的影响［J］．中华精神科杂志，2006，39(3):178－181．

［7］ 李仲铭．强迫游泳动物模型的研究进展［J］．中国行为医学科学，2004，13(5):595－596．

［8］ Han MF，Gao D，Sun XL．A comparative study on behaviors of two depression models in rats induced by chronic forced swimming stress［J］．Sichuan Da Xue Xue Bao，2010，41(1):137－139．

［9］ 亓晓丽，林文娟，李俊发．慢性强迫游泳应激对大鼠情绪和脑细胞外信号调节激酶的影响［J］．心理学报，2006，38(4):583－589．

［10］ 修丽娟，魏品康，刘龙，等．消痰解郁方对慢性强迫游泳应激后小鼠行为学及其海马组织5－HT1A受体mRNA表达的影响J］．第二军医大学学报，2007，28(10):1126－1128．

［11］ Li CX，Wang Y，Gao H，et al．Cerebral metabolic changes in a depression－like rat model of chronic forced swimming studied by ex vivo high resolution 1H magnetic resonance spectroscopy［J］．Neurochem Res，2008，33(11):2342－2349．

［12］ 高东，韩明飞，蒋晓江，等．慢性强迫游泳应激对大鼠海马神经元再生和p－CREB表达的影响［J］．神经疾病与精神卫生，2010，10(4):329－331．

［13］ Berezova IV，Shishkina GT，Kalinina TS，et al．Behavior in the forced－swimming test and expression of BDNF and Bcl－xl genes in the rat brain［J］．Zh Vyssh Nerv Deiat Im I P Pavlova，2011，61(3):332－339．

［14］ Sakakibara H，Ishida K，Izawa Y，et al．Effects of forced swimming stress on rat brain function［J］．J Med Invest，2005，52(Suppl):300－301．

［15］ 王海涛，徐爱军，李冉，等．慢性强迫游泳应激大鼠内测前额皮质磷酸化细胞外信号转导激酶1/2的变化［J］．解剖学报，2010，41(4):510－513．

［16］ 陈夫银，柳威，赵虎，等．慢性强迫应激行为和血清皮质酮的变化［J］．中国行为医学科学，2006，15(3):229－231．

［17］ 陈洁，黄宏平．应激导致抑郁症与单胺类递质系统稳态［J］．生物学杂志，2013，30(1):78－81．

［18］ 范文涛，王倩，闫咏梅．地黄饮子对卒中后抑郁大鼠海马5－HT1AR与5－HT2AR mRNA水平表达的影响［J］．中医药学报，2013，41(4):93－95．