回瑞华,刁全平,侯冬岩,李铁纯
(鞍山师范学院化学与生命科学学院,辽宁鞍山114007)
学龄前儿童正处于生长发育的关键时期,蛋白质的供给特别重要.蛋白质由多种氨基酸组成,它是构成细胞组织的主要成分,是儿童生长发育所必要的物质.学龄前儿童需要蛋白质较成人多,因为他们不但需要蛋白质来补充丢失的热量,而且还需要它来增长和构成新组织,学龄前儿童体重每增加1 kg,体内就要合成160 g新的蛋白质,以满足身体细胞组织生长的需要.若长期缺乏蛋白质,可引起智力障碍、生长发育迟缓、体重过轻以及贫血等,健康受到影响.研究表明,食物中以豆类、干果、肉类、乳类、蛋类、鱼虾类蛋白质含量较高.除了保证学龄前儿童饮食中有足够的蛋白质数量以外,还要注意饮食中蛋白质的质量,就是说动物性蛋白质和植物性蛋白质的量要占蛋白质总摄入量的1/2.据调查目前城区学龄前儿童普遍存在动物蛋白多、植物蛋白少,蛋白质的获得不平衡.在植物性食物中,干果像松子仁、核桃仁、腰果、葵花子、黑芝麻、榛子仁、花生仁等营养成分很高[1-4],特别是蛋白质的含量均较高[5].本文采用光谱法对干果中蛋白质含量进行分析[6-7],为学龄前儿童合理补充植物蛋白提供参考.
KQ-250B型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司),UV036型紫外可见分光光度计(美国瓦里安公司),离心机(上海安亭科学仪器厂,4 000 r/min),0.085 946 moL/L盐酸标准溶液,0.1 moL/L柠檬酸水溶液,8 moL/L尿素的2 moL/L氢氧化钠溶液,试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水.
蛋白质标准品:牛血清白蛋白,北京北方同正生物技术发展有限公司.
样品:松子仁、核桃仁、腰果、葵花子、黑芝麻、榛子仁、花生仁,均购于鞍山市场.
准确称取样品2.00 g,置于50 mL烧杯中,加入0.1 moL/mL柠檬酸溶液30 mL,超声15 min,使其充分溶解,过滤后,以3 000 r/min的速度离心20 min,上清液过滤保存为储备液.
精确称取牛血清白蛋白2.0 g,置于50 mL烧杯中,加入0.1 moL/mL柠檬酸溶液30 mL,超声15 min,使其充分溶解保存为储备液.
1.4.1 测定波长的确定 取0.1 mL滤液于10 mL容量瓶中,8 moL/L尿素的2 moL/L氢氧化钠溶液定容,充分振摇2 min,将滤液置于比色皿中,以8 moL/L尿素的2 moL/L氢氧化钠溶液作参比液,在200~800 nm范围内扫描,得到其吸收光谱,最大吸收波长为280 nm[4-6].
1.4.2 标准曲线的绘制 分别移取 0,0.30,0.60,0.90,1.20,1.50 mL1.3 中的储备液于 10 mL 容量瓶中,以8 moL/L尿素的2 moL/L的氢氧化钠溶液定容,充分振摇,以8 moL/L尿素的2 moL/L的氢氧化钠溶液作参比液,在280 nm处分别测定其吸光度值A.以蛋白质浓度C为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线.回归方程是
相关系数 r为0.999 9,线性范围为0.447 8 ~1.497 3(mg/mL).
1.4.3 实验方法 按1.2处理样品,按照1.4.2测定方法分别测定其吸光度,按标准曲线法测定干果样品中蛋白质含量.
用与绘制吸收曲线相同方法配置的样品进行稳定性实验,结果表明:样品放置60 min,测得其吸光度值基本不变.
移取1.3中的蛋白质标准品储备液,按照1.4.2测定方法测定6次,计算该方法的RSD为0.24%.
准确移取3份相同质量浓度的样品,加入不同质量浓度的标准溶液,按照1.4.2的方法进行测定,计算该方法的回收率见表1.
表1 方法回收率
按1.2分别处理干果样品,按照1.4.3实验方法分别测定其吸光度,按标准曲线法定量分析出干果样品中蛋白质含量,结果如表2.
表2 干果中蛋白质含量测定结果 (mg/g)
由实验结果表明,干果中松子仁、核桃仁、腰果、葵花子、黑芝麻、榛子仁、花生仁等蛋白质的含量均较高,其含量由大到小依次为:花生仁、榛子仁、黑芝麻、葵花子、腰果、核桃仁、松子仁,测定的干果样品中花生仁蛋白质含量最高,为243 mg/g.
[1]Takahashi R,Ohmori R,Kiyose C,et al.Antioxidant activities of black and yellow soybeans against low densitylipoprotein oxidation[J].J Agric Food Chem,2005,53(11):4578 -4582.
[2]Azevedoa L,Gomes J C,Stringheta P C,et al.Black bean(Phaseolus vulgarisL.)as a protective agent against DNAdamage in mice[J].Food Chem Toxicol,2003,41(12):1671 -1676.
[3]Bawadi H A,Nsode R R,Appey A,et al.Inhibition of Caco-2 colon,MCF-7 and Hs578T breast,and DU 145pro-static cancer cell proliferation by water-soluble blackbean condensed tannins[J].Cancer Lett,2005,18(2):153 -162.
[4]Birch E.A randomised controlled trial of early dietary supply of long-chain polyunsaturated fatty acids and mental development in term infant[J].Developmental Medicine and Child Neurology,2000(42):174 - 181.
[5]崔莉,葛文光.核桃蛋白质功能性质的研究[J].食品科学,2000,21(1):14-15.
[6]徐丽丽,侯冬岩,回瑞华,等.乳制品中蛋白质含量的测定[J].鞍山师范学院学报,2006,8(4):40-42.
[7]侯冬岩,回瑞华.奶粉中蛋白质含量的光谱分析[J].鞍山师范学院学报,2004,6(4):37-39.