不同产地桔梗中桔梗皂苷D及总多糖的含量比较

金传山，张 伟，桂双英，彭代银，吴德玲，黄 力，李保明

(1.安徽中医药大学药学院，安徽省现代中药重点实验室，安徽合肥 230031;2.亳州职业技术学院药学院，安徽亳州 236800;3.安徽协和成药业饮片有限公司，安徽亳州 236800)

桔梗为桔梗科植物桔梗(Platycodon grandiflorum)的干燥根［1］，味苦、辛，性平，归肺经，可宣肺利咽，祛痰排脓，临床上主要用于治疗咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛声哑，肺痈吐脓。桔梗作为药食两用植物在全国各地广泛分布，是部分省区的重要经济植物，在内蒙赤峰，安徽太和、亳州，山东淄博等地广泛栽培。桔梗的化学成分研究始于20世纪初，主要包括五环三萜类的多糖苷［2］和菊糖型多聚糖类［3］等成分。目前，《中国药典》2010版中仅以桔梗皂苷D含量高低作为判断桔梗药材质量的优劣标准，而中药的疗效是多种成分协同作用的结果，因此选择一种活性成分进行含量分析不足以全面、客观、真实地反映药材质量。本研究参照2010年版《中国药典》的标准，同时结合桔梗多糖的含量测定［4］，在进行桔梗主产区调查的基础上，对目前不同主产区的桔梗质量进行分析。

1 仪器、试药与实验药材

1.1 仪器 岛津LC-15C型高效液相色谱(LC-15C泵、SPD-15C紫外检测器、DT-230A型柱温箱、LC Solution-15C色谱工作站)，WL-100型打粉机(威力制药机械厂)，UV-757CRT紫外可见分光光度计(上海精科);CP225D型十万分之一电子天平(德国Sartorius公司);HHS111-2型电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂);R-205旋转蒸发器(上海申胜生物科技有限公司)等。

1.2 试药 甲醇(色谱纯，天津四友精细化学品有限公司)、乙腈(色谱纯，Fisher公司);水为Milli-Q超纯水;浓硫酸(上海苏懿化学试剂有限公司);盐酸，香草醛(北京化学试剂有限公司)、磷酸二氢钾、磷酸(上海市试剂一厂综合经营公司)等均为分析纯。桔梗皂苷D(成都普思生物科技有限公司，批号:20080723)。

1.3 实验药材 药材采集后清洗去除泥沙，用玻璃片刮去根皮后摊晒，晾晒至一定程度后切圆片，晒干，即得桔梗样品，药材经安徽中医药大学中药资源与利用教研室刘守金教授鉴定为桔梗科植物桔梗Platycodon grandiflorum。样品信息见表1。

表1 桔梗样品来源

2 方法与结果

2.1 桔梗皂苷D的含量测定［5］

2.1.1 色谱条件 采用 Alltima C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈—0.02 mol·L－1磷酸二氢钾缓冲溶液(用磷酸调 pH为3.0，30∶70)，流速 0.7 mL·min－1，检测波长 210 nm，柱温35℃，进样量 20 μL 。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的桔梗皂苷 D对照品2.60 mg，置10 mL量瓶中，用不加缓冲盐和磷酸的流动相溶解并定容至刻度，以0.22 μm微孔滤膜滤过即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 取各桔梗样品粉末(过80目筛)约0.5 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加入不含缓冲盐和磷酸的流动相至近刻度，在功率500 W下超声30 min，放冷，用流动相定容至刻度，摇匀，过微孔滤膜(0.22 μm)，取续滤液，即得。

2.1.4 线性关系考察 精密吸取上述桔梗皂苷D对照品溶液 4、8、12、16、20 μL，按上述色谱条件进样，以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为:Y=294 001X+160 319，r=0.999 6。结果表明桔梗中桔梗皂苷D在1.44 ～7.20 μg范围内线性范围良好。

2.1.5 样品含量测定 取“2.1.3”项下方法制成的样品溶液，分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各20 μL，按上述色谱条件测定，外标一点法，以干燥品计算样品中的桔梗皂苷 D含量，结果见表2，图1。

2.2 桔梗多糖的含量测定［6］

2.2.1 对照品溶液的制备 精确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品12.91 mg，置于100 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得葡萄糖 0.129 1 g·L－1的标准溶液。

图1 桔梗HPLC色谱图

2.2.2 供试样品的制备 称取各样品约0.5 g，精密称定，放入置圆底烧瓶中，精密加蒸馏水50 mL，称定重量，静置30 min，沸水浴回流1 h，放冷称定，用水补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL蒸干，加2 mL水分次溶解，加10 mL无水乙醇放置24 h，抽滤，沉淀用85%乙醇洗涤3次，沉淀用水溶解定容至50 mL量瓶，摇匀，即得各个不同产地的供试品溶液。

2.2.3 线性关系的考察 分别精确移取葡萄糖标准溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL 于具塞试管中，再分别依次加入 0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3 mL蒸馏水，每管加入5%苯酚溶液1 mL，迅速滴加浓硫酸5 mL，立即摇匀，放置5 min，置沸水浴中加热10 min，迅速冷却至室温，同法以1 mL蒸馏水作空白对照，于486 nm处测吸光度。以吸光度(A)对葡萄糖质量浓度(C)作回归处理，得回归方程Y=0.079 1C －0.007 7，r=0.999 2。结果表明桔梗中桔梗多糖在0.025 82 ～0.090 37 μg 范围内线性关系良好。

2.2.4 样品含量测定 取2.2.2”项下方法法制成的样品溶液，分别精密吸取样品溶液和葡萄糖对照品液于10 mL具塞试管中，各补加蒸馏水至1 mL，加5%苯酚1 mL，浓硫酸5 mL，摇匀，放置5 min后水浴加热10 min，放冷后测定吸光度，计算样品多糖含量，结果见表2，图2。

表2 不同产地桔梗桔梗皂苷D和桔梗多糖的含量测定结果

图2 紫外扫描图

3 讨论与分析

各主产地桔梗药材中桔梗皂苷D含量均符合药典标准。山东产桔梗在总皂苷含量上高于内蒙和安徽产桔梗，而内蒙产桔梗在多糖含量上则在整体上优于安徽和山东产桔梗，不同产地桔梗中的分布趋势显示出桔梗皂苷D含量高，多糖含量低，而当总皂苷含量低时，多糖含量则升高。

现代药理研究表明，桔梗皂苷D为桔梗中镇咳活性成分之一［7］，桔梗多糖对特异性和非特异性免疫都具有一定的调节作用。桔梗中主要成分与其药效相关性研究并不多，如何用成分来有效控制桔梗药材及其加工品的质量仍是需待解决的问题，若采用单一指标进行药材质量评价，则会产生偏颇，而通过多指标评价不同产地的桔梗药材质量，可以为桔梗药材的选用提供依据。

不同产区的桔梗外观形状差异明显，在样品处理过程中发现，内蒙产桔梗主根顺直切片干燥后片型美观，且碎屑较少，而产于安徽和山东的桔梗药材由于主根分叉较多，切片后细小侧根干燥形成大量碎屑，影响药材品相，因此在商品规格上内蒙产桔梗优于其他产地。

致谢:本研究得到美国许氏基金会的支持。

［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:259－260.

［2］ 李喜凤，杜云锋，谢新年，等.不同产地桔梗药材HPLC指纹图谱及桔梗皂苷D 含量测定研究［J］.中成药，2010，32(4):529－532.

［3］ 贾 林，陆金健，卢德赵，等.桔梗多糖的分离纯化与含量测定［J］.中国农学通报，2011，27(17):83 －86.

［4］ 金传山，黄 力，李素亮.桔梗双飞片产业化生产工艺研究［J］.中药材，2011，34(6):968 －971.

［5］ 黄 力，金传山，吴德玲.不同干燥方法对桔梗中桔梗皂苷 D含量的影响［J］.安徽中医学院学报，2010，29(3):69 －71.

［6］ 黄 力.桔梗双飞片工艺及质量研究［D］.合肥:安徽中医学院，2010:30－35.

［7］ 张艳艳，王举涛，桂双英.桔梗边角料中桔梗总皂苷提取工艺研究［J］.安徽医药，2012，16(4):442 －443.