notch-1、p16在宫颈癌中的表达及临床意义

李 宇 李文娟 宋慧胜 刘 祺

广东省清远市人民医院放疗科，广东清远 511500

宫颈癌是妇女最为常见的一种恶性肿瘤，全球每年约有25万人死于宫颈癌，其发病率呈上升及年轻化趋势。宫颈癌的发病机制目前尚未被完全阐明，但感染人乳头瘤病毒（HPV）被广泛证实为该病发生过程中重要的危险因子[1-2]。研究表明，notch-1受体异常表达会导致细胞过度增殖，继而促进肿瘤的形成；p16基因是重要的抑癌因子，参与了肿瘤细胞的周期调节，其表达的强弱可间接反映HPV 病毒量。故该文应用免疫组化（SP）技术检测notch-1、p16 在该院2010年1月—2014年6月收治的56 例宫颈癌及40 例正常宫颈组织中的表达情况及核异位情况，阐明其活化表达与宫颈癌发生发展的关系，提高宫颈癌诊断的灵敏度，为肿瘤的防治提供新的方向。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院收治的宫颈癌患者56 例作为研究对象，年龄27～73岁，平均（45.1±9.7 岁）。宫颈癌的诊断标准及分级标准以国际妇产科联盟（FIGO，2000年）为准[3]。其中宫颈鳞癌30 例、腺癌26 例，病例分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级者分别为13、19、24 例；另取40 例因子宫肌瘤行全子宫切除、且经病理证实无宫颈病变的宫颈组织标本作为对照，年龄26～75 岁，平均（44.8±8.2 岁）。两组对象一般资料的差异不具有统计学意义，具有可比性。两组的组织标本均保存于液氮中，且无放化疗或局部治疗史。

1.2 方法

标本经常规10%福尔马林固定，脱水后经石蜡包埋，切片，厚度为4 μm，并将切片敷贴于载玻片上，按试剂盒说明书进行免疫组化操作。注意将兔多克隆notch-1 抗体稀释至1:80，鼠单克隆p16 抗体稀释至1:100，并设置PBS 作为着色对照标准。

1.3 判断标准

在光镜高倍视野下观察，阳性的判断可根据胞核或胞浆中是否呈现粗细不一棕黄至棕褐色颗粒，核着色时代表存在核异位或活化表达。无着色则为阴性。

1.4 统计方法

应用SPSS16.0 统计软件进行数据统计分析，计数资料用采用χ2检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

宫颈鳞癌及宫颈腺癌组织中的核异位比率均显著高于正常宫颈组织，差异具有统计学意义(P<0.05)；3 种组织中p16 的阳性率分别为75%、83.3%和92.3%，相互比较差异无统计学意义(P>0.05)。具体见表1。

表1 notch-1、p16 在不同类型宫颈组织中阳性表达情况及分布情况

3 讨论

3.1 notch-1 在宫颈癌中表达及临床意义

notch 是位于细胞膜上的一个单次跨膜的异二聚体受体，参与血细胞分化、胚胎发育等重要生理过程。研究发现，notch 在血液系统肿瘤等多种实体瘤中存在表达异常，在肿瘤细胞的增殖、分化、发育及凋亡过程中发挥重要作用[4-5]：notch 表达异常，细胞无法正常分化而过度繁殖，增加了肿瘤发生率。已有的研究表明，notch-1 受体与宫颈癌细胞的增殖密切相关。该研究利用SP技术发现，notch-1 核异位在正常宫颈组织中的发生率仅为5%，而在宫颈腺癌、鳞癌中的发生率达到了43.3%和57.7%，差异有统计学意义。提示notch-1 核异位可能是宫颈肿瘤病变因素。

3.2 p16 在宫颈癌中表达及临床意义

p16 基因是细胞周期调节的重要因子，可抑制细胞周期，进而抑制细胞的异常增殖。p16 可特定性竞争性结合CDK4 进而导致CDK4 的活性被抑制，抑制了细胞由G1 期向S 期的转变同时阻止了DNA 合成的启动[6]。CDK4 激酶的活性被抑制也将导Rb不能磷酸化，未磷酸化的Rb 增多而抑制细胞增殖。故p16 基因的变异或其蛋白的失活会导致cyclinD→CDK4/6→Rb→EF 细胞周期调节途径失控，而使细胞过度增殖，导致肿瘤发生。研究表明，p16 在具有HPV 感染的宫颈癌中表达异常，且其表达与宫颈癌病情严重程度存在正相关的关系。因此，可认为HPV 感染可能导致肿瘤细胞中p16 的表达增高，而HPV 通过E6、E7 蛋白介导而导致宫颈癌发生，即HPV 感染是导致宫颈癌发生的主要病因。研究表明，p16 表达的强弱可作为检测是否感染了HPV 的一种简单可靠的方法，且其灵敏度和特异度分别为95%，96%，通过检测p16 可提高宫颈癌诊断的灵敏度，具有一定的临床意义。该组研究3 种组织中p16 的表达分别为75%、83.3%和92.3%，三者相互比较差异无统计学意义(P>0.05)。该结果和许多文献[7-8]中报道不一致，对此的理解是HPV 感染导致了p16 的表达增大，且并不是所有HPV 感染都发展为宫颈癌，且该组实验所选的样本数较少。

通过联合检测notch-1、p16 的表达可提高宫颈癌诊断的灵敏度，为其防治提供新的方向，具有一定的临床意义。

[1]刘馨,白艳香.血清肿瘤标志物和宫颈癌分期的相关性及其机制[J].中国老年学杂志,2014(11):2945-2946.

[2]Gong-ling PENG,Ye TIAN,Chong LU et al.Effects of Notch-1 Down-regulation on Malignant Behaviors of Breast Cancer Stem Cells[J].华中科技大学学报：医学英德文版，2014,34(2):195-200.

[3]马永超，范文娟，吴华，等.Notch 信号通路在血小板衍生生长因子-BB诱导人胰腺癌细胞增殖过程中的作用[J].解剖学报,2014,45(2):239-241.

[4]巴黎,丁雪冰,王雪晶，等.Notch 信号通路在1-甲基-4-苯基吡啶诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用[J].中华医学杂志,2014,94(13):1025-1028.

[5]万磊,刘健,黄传兵，等.Notch-Jagged/Delta 信号通路在佐剂关节炎大鼠肺功能降低中的作用[J].中南大学学报：医学版，2014,39(2):109-116.

[6]Raghu Hari,Gondi Christopher ,Dinh Dzung et al.Specific knockdown of uPA/uPAR attenuates invasion in glioblastoma cells and xenografts by inhibition of cleavage and trafficking of Notch -1 receptor[J].Molecular Cancer,2011,10(1).

[7]李道旺，王红群，王庆梅，等.p16 及p53 蛋白在前列腺癌中的表达及意义[J].山东医药,2014(17):43-45.

[8]Pooja Malhotra,Rakesh Kochhar,Kim Vaiphei,et al.Aberrant promoter methylation of p16 in colorectal adenocarcinoma in North Indian patients[J].World Journal of Gastrointestinal Oncology,2011,2(7).