不同治疗方法对子宫腺肌病模型小鼠血管生成相关因子的影响

付先芸　魏绍斌

【摘要】 目的：探讨在子宫腺疾病（AM）在位及异位子宫内膜不同空间部位，中西医治疗方法对模型小鼠血管生成相关因子的不同影响。方法：对8周龄ICR雌鼠施行雄鼠垂体宫腔内移植手术，术后分别饲养3个月，形成模型组。选择导师行气化瘀法临床验方（蒲灵化瘀止痛方）为实验药物（A组），同时将丹莪妇康煎膏作为中药对照组（B组）、孕三烯酮组为西药对照组（C组）、未造模同期小鼠为空白组，各组分别给药3个月。运用免疫组化技术观察血管生成相关因子（VEGF、CD31、MMP-2）在模型组、用药组的变化。结果：与正常组比较，模型组在位内膜CD31表达显著下降（P<0.05），A、B、C组治疗后上调，且A组显著优于B、C组（P<0.05）。与模型组比较，A、B、C组异位内膜CD31表达显著下降（P<0.05），A、B、C组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。与正常组比较，模型组在位内膜MMP-2、VEGF显著升高（P<0.05）。治疗后A、B、C组在位内膜MMP-2、VEGF表达与模型组比较均显著下调（P<0.05），A、B、C组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较，治疗后A、B、C组异位内膜MMP-2均显著下降（P<0.05），C组显著低于A组及B组（P<0.05）。结论：蒲灵化瘀止痛方可以有效改善在位内膜的缺血缺氧状态，通过终止疾病的始动环节而达到治疗该病的目的。在改善局部血供方面，行气活血中药与西药比较有明显优势。

【关键词】 子宫腺疾病； 小鼠模型； 血管生成相关因子

近几年的研究显示，子宫腺肌病（AM）的发病率约为20.9%，近年来其发病率逐年上升且呈年轻化趋势，很大部分患者于青少年时期即开始发生[1-3]。AM患者的妊娠率远远低于正常人群（22.2%）[4]。由于病因较为复杂，发病的确切机制仍不十分清楚，病情迁延反复，临床难以治愈，多年来一直是临床和基础研究重点关注的问题。目前研究显示子宫内膜血管向肌层的浸润生长是AM发生的必要条件[5]。中医药治疗此病在缓解痛经、减少经量、改善不孕方面，显示出了其独特的优势。本研究引入AM小鼠模型，以血管生成相关因子为观察靶点，将中药与西药的作用机制及治疗疗效进行比较，为临床治疗提供可靠的依据。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雌性未孕ICR小鼠，健康雄性ICR小鼠，鼠龄8～9周，体重为（28±2.5）g，由四川简阳动物实验中心提供。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型的建立 小鼠同种异体垂体宫腔内移植法：（1）腹腔麻醉：选择3%戊巴比妥钠作为腹腔麻醉用药，根据体重计算，30～35 mg/kg。抽取适量麻醉药给予8周龄雌鼠腹腔内注射。（2）分离雌鼠子宫：8周龄雌鼠，分层切开皮肤层及皮下肌层，在膀胱下找到子宫分叉处。（3）取出雄鼠垂体：8～9周龄ICR雄鼠，处死后开颅取出垂体，混合少许生理盐水后，置于部分垂体生理盐水悬浊液约0.5～1 mL于自制套管针头内备用。（4）垂体注射入宫腔内：针头穿刺进入雌鼠右侧子宫内后，利用套管针内芯将垂体生理盐水悬浊液缓慢推入宫腔，针头及内芯同时退出，将子宫放回腹腔，腹腔内滴入庆大霉素溶液0.25 mL（1万U）预防感染，关腹。

1.2.2 实验药物制备 蒲灵化瘀止痛方是导师临床验方，全方由蒲黄、五灵脂、制乳香、制没药、姜黄、延胡索、三七粉、花蕊石、水蛭、土鳖虫组成。该方由四川省中医院制剂室制成中药浸膏，储存于4 ℃冰箱保存。实验前将中药浸膏用蒸馏水配成浓度为3.0 g/mL相当于1.2 g原生药材/20 g体重（28倍于人体常用剂量，按小鼠与人体体表面积折算）。

1.2.3 实验分组 （1）正常组：未施行手术，常规饲养3个月。（2）模型组：6只，同种异体垂体移植术后饲养3个月。（3）A组：6只，蒲灵化瘀止痛方组（28倍于人体常用剂量，按照体表面积换算），将中药浸膏用蒸馏水配成浓度为3.0 g/mL相当于1.2 g原生药材/20 g体重（28倍于人体常用剂量），每天一次灌胃浸膏稀释后水溶液0.4 mL/20 g体重。灌胃3个月后处死。（4）B组（丹莪妇康煎膏组）：中药对照组6只，成人每日用量0.5 g/kg体重，昆明滇虹药业有限公司生产，用蒸馏水配成浓度为0.35 mg/mL的水溶液（相当于0.14 g/20 g体重）国药准字Z20025253。灌胃3个月后处死。（5）C组（孕三烯酮组）：西药对照组6只，孕三烯酮胶囊，北京紫竹药业有限公司，药准字H19980020用蒸馏水配成浓度为0.02 mg/mL的水溶液。每周2次灌胃孕三烯酮水溶液0.4 mL/20 g体重（相当于8×103 mg/20 g体重）。灌胃3个月后处死。

1.2.4 标本采集与处理方法 于末次给药后24 h，颈椎脱臼处死小鼠，立即剖腹取出右侧子宫标本置于10%中性福尔马林液中固定保存；48 h后取出，经常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片（片厚4 ?m）、采用免疫组化SP法染色：用PBS液（0.01 mol/L pH 7.4）冲洗3次，5 min/次；3%H2O2室温孵育10 min，以消除内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育10 min；蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min；10%的正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10 min。倾去血清，勿洗，滴加1：100比例稀释的一抗，37 ℃孵育1 h；PBS冲洗，冲洗3次，5 min/次；滴加第二代生物素标记二抗工作液，37 ℃孵育30 min；PBS冲洗，冲洗3次，5 min/次；滴加第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37 ℃孵育30 min；PBS冲洗，冲洗3次，

5 min/次；DAB显色剂显色；自来水充分冲洗，苏木精复染，封片。

1.3 观察指标 运用免疫组化技术观察各组AM小鼠在位及异位子宫内膜血管生成相关因子（VEGF、CD31、MMP-2）的变化。endprint

1.4 结果判定 取模实验小鼠右侧子宫纵切面及横切面切片，一个标本的同一切片显微镜下可同时观察异位内膜及在位内膜。在光学显微镜下分组观察，在40倍视野下分别找到在位内膜及异位内膜部位，转换为100倍视野，观察子宫内膜层腺细胞及间质细胞侵入子宫肌层内的情况及浸润深度。采用Mias图形分析系统，在200倍视野下分别选择异位及在位内膜组织的被覆上皮中含阳性物质（即棕黄色颗粒物质）最多的5个区域浏览，先测量被覆上皮面积，再测量相应面积中阳性物质的积分光密度，以此表示观察指标的表达情况。

1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用单因素方差分析，组间比较用LSD、S-N-K分析和Tamhanes T2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组在位子宫内膜CD31、MMP-2、VEGF的比较 与正常组比较，模型组在位内膜CD31表达显著下降（P<0.05）。经过治疗后，A、B、C组CD31表达均有上调趋势（P<0.05）。与模型组比较，A组CD31表达上调显著（P<0.05），A组显著优于B、C两组，差异均有统计学意义（P<0.05）。与正常组比较，模型组在位内膜MMP-2、VEGF，显著升高（P=0.019）。与模型组比较，经治疗后各组MMP-2表达均下调（A组：P=0.041；B组：P=0.091；C组：P=0.029），VEGF表达均显著下降（P<0.05），A、B、C组之间比较无差异，见表1。

2.2 各组异位子宫内膜CD31、MMP-2、VEGF的比较 与模型组比较，A、B、C组经治疗后异位内膜CD31表达显著下降（A组：P=0.018；B组：P=0.031；C组：P=0.004），A、B、C组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较，治疗后A、B、C组异位内膜MMP-2均显著下降（A组：P=0.002；B组：P<0.05；C组：P<0.05），且C组显著低于B组（P=0.042）及A组（P=0.001），见表2。

3 讨论

实验结果表明，模型组在位内膜CD31显著下降，局部处于缺血缺氧的状态，可能为AM发生的首要触发机制，缺氧可以通过HIF-1通路等诱导血管增殖，并可能是诱发促血管因子上调的最强因素之一[6]。而异位内膜CD31及VEGF表达显著增高，异位内膜血管的增殖，为异位病灶的发生发展提供了必要的条件[7]。经3种方法治疗后，在位内膜CD31的表达均上升，蒲灵化瘀止痛方组上升显著，优于其他治疗组。活血化瘀类中药治疗对血管生成的多靶点作用的研究表明，活血化瘀中药能够直接改善血液流变性、降低血黏度、抗凝、抑制血小板活性、促纤溶、抗血栓、消除微循环障碍，可以改善血液高凝状态，改善局部缺血缺氧状态[8]；同时，通过修复血管内皮细胞损伤，抑制其增殖，可能有效改善组织缺血缺氧的“血瘀”状态，而消除新生血管生成的条件，通过下调促血管生成因子、诱导内皮细胞凋亡、调节雌激素受体敏感性等多靶点作用，在血管形成前期阻断病变进一步发展[9-12]。本实验中，蒲灵化瘀止痛方组通过改善局部的缺血缺氧状态，显著上调在位CD31水平，下调在位及异位VEGF的异常增高，下调在位及异位MMP-2的异常表达，与现有的研究结果相似[13-14]。在下调血管生成关因子表达方面，中西药治疗组无显著差异。

综上所述，与西药治疗相比，蒲灵化瘀止痛方可以有效改善在位内膜的缺血缺氧状态，通过终止疾病的始动环节而控制该病的发生发展，从而达到有效缓解痛经、减少经量的临床治疗效果。在改善局部血供方面，行气活血中药与西药比较有明显优势。

参考文献

[1] Naftalin J，Hoo W，Pateman K，et al.How common is adenomyosis？ A prospective study of prevalence using transvaginal ultrasound in a gynaecology clinic[J].Hum Reprod，2012，27（12）：3432-3439.

[2] Salim R，Riris S，Saab W，et al.Adenomyosis reduces pregnancy rates in infertile women undergoing IVF[J].Reprod Biomed Online，2012，25（3）：273-237.

[3] Dietrich J E.An update on adenomyosis in the adolescent[J].Curr Opin Obstet Gynecol，2010，22（5）：388-392.

[4] Salim R，Riris S，Saab W，et al.Adenomyosis reduces pregnancy rates in infertile women undergoing IVF[J].Reprod Biomed Online，2012，25（3）：273-277.

[5]赵瑞，李艳，赵蔚.子宫腺肌病中异位子宫内膜血管发生的研究[J].医药论坛杂志，2007，28（21）：38.

[6] Won Y W，Lee M，Kim H A，et al.Post-translational regulated and hypoxia-responsible VEGF plasmid for efficient secretion[J].J Control Release，2012，160（3）：525-531.

[7] Xiao-xia W，Jia-li K，Xue-fei S，et al.Effect of GnRHa on apoptosis and release of VEGF in endometrial cell cultures from patients with adenomyosis[J].Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology，2012，28（1）：72-73.

[8]付先芸，魏绍斌，冯婷婷.丹莪妇康煎膏对子宫腺肌瘤小鼠在位及异位内膜MMP-2及VEGF表达的不同影响[J].中成药，2013，35（11）：2523-2525.

[9] Moreira L，De Carvalho E C，Caldas-Bussiere M C.Differential immunohistochemical expression of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 in cow uteri with adenomyosis during follicular phase[J].Vet Res Commun，2011，35（5）：261-269.

[10]吕晓霞，李楠.子宫腺肌病组织中PTTG、bFGF和VEGF的表达及意义[J].山东医药，2008，48（3）：97-98.

[11] Yasumura E G，Stilhano R S，Samoto V Y，et al.Treatment of mouse limb ischemia with an integrative hypoxia-responsive vector expressing the vascular endothelial growth factor gene[J].PLoS One，2012，7（3）：e33 944.

[12]贺丰杰，李小宁，张文婷.凋膜止崩液宫腔靶向给药对ADUB模型大鼠子宫内膜组织中MMP-1、TIMP-1、ER及亚型表达的影响[J].时珍国医国药，2012，23（6）：1861-1863.

[13]李所平.少腹逐瘀汤加味治疗子宫腺肌病50例[J].河北中医，2009，31（4）：592.

[14]李学应，杨廉泽.散结汤治疗子宫肌瘤子宫腺肌症的临床研究[J].浙江中医药大学学报，2006，30（4）：365-367.

（收稿日期：2014-05-25） （本文编辑：蔡元元）endprint

1.4 结果判定 取模实验小鼠右侧子宫纵切面及横切面切片，一个标本的同一切片显微镜下可同时观察异位内膜及在位内膜。在光学显微镜下分组观察，在40倍视野下分别找到在位内膜及异位内膜部位，转换为100倍视野，观察子宫内膜层腺细胞及间质细胞侵入子宫肌层内的情况及浸润深度。采用Mias图形分析系统，在200倍视野下分别选择异位及在位内膜组织的被覆上皮中含阳性物质（即棕黄色颗粒物质）最多的5个区域浏览，先测量被覆上皮面积，再测量相应面积中阳性物质的积分光密度，以此表示观察指标的表达情况。

1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用单因素方差分析，组间比较用LSD、S-N-K分析和Tamhanes T2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组在位子宫内膜CD31、MMP-2、VEGF的比较 与正常组比较，模型组在位内膜CD31表达显著下降（P<0.05）。经过治疗后，A、B、C组CD31表达均有上调趋势（P<0.05）。与模型组比较，A组CD31表达上调显著（P<0.05），A组显著优于B、C两组，差异均有统计学意义（P<0.05）。与正常组比较，模型组在位内膜MMP-2、VEGF，显著升高（P=0.019）。与模型组比较，经治疗后各组MMP-2表达均下调（A组：P=0.041；B组：P=0.091；C组：P=0.029），VEGF表达均显著下降（P<0.05），A、B、C组之间比较无差异，见表1。

2.2 各组异位子宫内膜CD31、MMP-2、VEGF的比较 与模型组比较，A、B、C组经治疗后异位内膜CD31表达显著下降（A组：P=0.018；B组：P=0.031；C组：P=0.004），A、B、C组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较，治疗后A、B、C组异位内膜MMP-2均显著下降（A组：P=0.002；B组：P<0.05；C组：P<0.05），且C组显著低于B组（P=0.042）及A组（P=0.001），见表2。

3 讨论

实验结果表明，模型组在位内膜CD31显著下降，局部处于缺血缺氧的状态，可能为AM发生的首要触发机制，缺氧可以通过HIF-1通路等诱导血管增殖，并可能是诱发促血管因子上调的最强因素之一[6]。而异位内膜CD31及VEGF表达显著增高，异位内膜血管的增殖，为异位病灶的发生发展提供了必要的条件[7]。经3种方法治疗后，在位内膜CD31的表达均上升，蒲灵化瘀止痛方组上升显著，优于其他治疗组。活血化瘀类中药治疗对血管生成的多靶点作用的研究表明，活血化瘀中药能够直接改善血液流变性、降低血黏度、抗凝、抑制血小板活性、促纤溶、抗血栓、消除微循环障碍，可以改善血液高凝状态，改善局部缺血缺氧状态[8]；同时，通过修复血管内皮细胞损伤，抑制其增殖，可能有效改善组织缺血缺氧的“血瘀”状态，而消除新生血管生成的条件，通过下调促血管生成因子、诱导内皮细胞凋亡、调节雌激素受体敏感性等多靶点作用，在血管形成前期阻断病变进一步发展[9-12]。本实验中，蒲灵化瘀止痛方组通过改善局部的缺血缺氧状态，显著上调在位CD31水平，下调在位及异位VEGF的异常增高，下调在位及异位MMP-2的异常表达，与现有的研究结果相似[13-14]。在下调血管生成关因子表达方面，中西药治疗组无显著差异。

综上所述，与西药治疗相比，蒲灵化瘀止痛方可以有效改善在位内膜的缺血缺氧状态，通过终止疾病的始动环节而控制该病的发生发展，从而达到有效缓解痛经、减少经量的临床治疗效果。在改善局部血供方面，行气活血中药与西药比较有明显优势。

参考文献

[1] Naftalin J，Hoo W，Pateman K，et al.How common is adenomyosis？ A prospective study of prevalence using transvaginal ultrasound in a gynaecology clinic[J].Hum Reprod，2012，27（12）：3432-3439.

[2] Salim R，Riris S，Saab W，et al.Adenomyosis reduces pregnancy rates in infertile women undergoing IVF[J].Reprod Biomed Online，2012，25（3）：273-237.

[3] Dietrich J E.An update on adenomyosis in the adolescent[J].Curr Opin Obstet Gynecol，2010，22（5）：388-392.

[4] Salim R，Riris S，Saab W，et al.Adenomyosis reduces pregnancy rates in infertile women undergoing IVF[J].Reprod Biomed Online，2012，25（3）：273-277.

[5]赵瑞，李艳，赵蔚.子宫腺肌病中异位子宫内膜血管发生的研究[J].医药论坛杂志，2007，28（21）：38.

[6] Won Y W，Lee M，Kim H A，et al.Post-translational regulated and hypoxia-responsible VEGF plasmid for efficient secretion[J].J Control Release，2012，160（3）：525-531.

[7] Xiao-xia W，Jia-li K，Xue-fei S，et al.Effect of GnRHa on apoptosis and release of VEGF in endometrial cell cultures from patients with adenomyosis[J].Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology，2012，28（1）：72-73.

[8]付先芸，魏绍斌，冯婷婷.丹莪妇康煎膏对子宫腺肌瘤小鼠在位及异位内膜MMP-2及VEGF表达的不同影响[J].中成药，2013，35（11）：2523-2525.

[9] Moreira L，De Carvalho E C，Caldas-Bussiere M C.Differential immunohistochemical expression of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 in cow uteri with adenomyosis during follicular phase[J].Vet Res Commun，2011，35（5）：261-269.

[10]吕晓霞，李楠.子宫腺肌病组织中PTTG、bFGF和VEGF的表达及意义[J].山东医药，2008，48（3）：97-98.

[11] Yasumura E G，Stilhano R S，Samoto V Y，et al.Treatment of mouse limb ischemia with an integrative hypoxia-responsive vector expressing the vascular endothelial growth factor gene[J].PLoS One，2012，7（3）：e33 944.

[12]贺丰杰，李小宁，张文婷.凋膜止崩液宫腔靶向给药对ADUB模型大鼠子宫内膜组织中MMP-1、TIMP-1、ER及亚型表达的影响[J].时珍国医国药，2012，23（6）：1861-1863.

[13]李所平.少腹逐瘀汤加味治疗子宫腺肌病50例[J].河北中医，2009，31（4）：592.

[14]李学应，杨廉泽.散结汤治疗子宫肌瘤子宫腺肌症的临床研究[J].浙江中医药大学学报，2006，30（4）：365-367.

（收稿日期：2014-05-25） （本文编辑：蔡元元）endprint

1.4 结果判定 取模实验小鼠右侧子宫纵切面及横切面切片，一个标本的同一切片显微镜下可同时观察异位内膜及在位内膜。在光学显微镜下分组观察，在40倍视野下分别找到在位内膜及异位内膜部位，转换为100倍视野，观察子宫内膜层腺细胞及间质细胞侵入子宫肌层内的情况及浸润深度。采用Mias图形分析系统，在200倍视野下分别选择异位及在位内膜组织的被覆上皮中含阳性物质（即棕黄色颗粒物质）最多的5个区域浏览，先测量被覆上皮面积，再测量相应面积中阳性物质的积分光密度，以此表示观察指标的表达情况。

1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用单因素方差分析，组间比较用LSD、S-N-K分析和Tamhanes T2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组在位子宫内膜CD31、MMP-2、VEGF的比较 与正常组比较，模型组在位内膜CD31表达显著下降（P<0.05）。经过治疗后，A、B、C组CD31表达均有上调趋势（P<0.05）。与模型组比较，A组CD31表达上调显著（P<0.05），A组显著优于B、C两组，差异均有统计学意义（P<0.05）。与正常组比较，模型组在位内膜MMP-2、VEGF，显著升高（P=0.019）。与模型组比较，经治疗后各组MMP-2表达均下调（A组：P=0.041；B组：P=0.091；C组：P=0.029），VEGF表达均显著下降（P<0.05），A、B、C组之间比较无差异，见表1。

2.2 各组异位子宫内膜CD31、MMP-2、VEGF的比较 与模型组比较，A、B、C组经治疗后异位内膜CD31表达显著下降（A组：P=0.018；B组：P=0.031；C组：P=0.004），A、B、C组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较，治疗后A、B、C组异位内膜MMP-2均显著下降（A组：P=0.002；B组：P<0.05；C组：P<0.05），且C组显著低于B组（P=0.042）及A组（P=0.001），见表2。

3 讨论

实验结果表明，模型组在位内膜CD31显著下降，局部处于缺血缺氧的状态，可能为AM发生的首要触发机制，缺氧可以通过HIF-1通路等诱导血管增殖，并可能是诱发促血管因子上调的最强因素之一[6]。而异位内膜CD31及VEGF表达显著增高，异位内膜血管的增殖，为异位病灶的发生发展提供了必要的条件[7]。经3种方法治疗后，在位内膜CD31的表达均上升，蒲灵化瘀止痛方组上升显著，优于其他治疗组。活血化瘀类中药治疗对血管生成的多靶点作用的研究表明，活血化瘀中药能够直接改善血液流变性、降低血黏度、抗凝、抑制血小板活性、促纤溶、抗血栓、消除微循环障碍，可以改善血液高凝状态，改善局部缺血缺氧状态[8]；同时，通过修复血管内皮细胞损伤，抑制其增殖，可能有效改善组织缺血缺氧的“血瘀”状态，而消除新生血管生成的条件，通过下调促血管生成因子、诱导内皮细胞凋亡、调节雌激素受体敏感性等多靶点作用，在血管形成前期阻断病变进一步发展[9-12]。本实验中，蒲灵化瘀止痛方组通过改善局部的缺血缺氧状态，显著上调在位CD31水平，下调在位及异位VEGF的异常增高，下调在位及异位MMP-2的异常表达，与现有的研究结果相似[13-14]。在下调血管生成关因子表达方面，中西药治疗组无显著差异。

综上所述，与西药治疗相比，蒲灵化瘀止痛方可以有效改善在位内膜的缺血缺氧状态，通过终止疾病的始动环节而控制该病的发生发展，从而达到有效缓解痛经、减少经量的临床治疗效果。在改善局部血供方面，行气活血中药与西药比较有明显优势。

参考文献

[1] Naftalin J，Hoo W，Pateman K，et al.How common is adenomyosis？ A prospective study of prevalence using transvaginal ultrasound in a gynaecology clinic[J].Hum Reprod，2012，27（12）：3432-3439.

[2] Salim R，Riris S，Saab W，et al.Adenomyosis reduces pregnancy rates in infertile women undergoing IVF[J].Reprod Biomed Online，2012，25（3）：273-237.

[3] Dietrich J E.An update on adenomyosis in the adolescent[J].Curr Opin Obstet Gynecol，2010，22（5）：388-392.

[4] Salim R，Riris S，Saab W，et al.Adenomyosis reduces pregnancy rates in infertile women undergoing IVF[J].Reprod Biomed Online，2012，25（3）：273-277.

[5]赵瑞，李艳，赵蔚.子宫腺肌病中异位子宫内膜血管发生的研究[J].医药论坛杂志，2007，28（21）：38.

[6] Won Y W，Lee M，Kim H A，et al.Post-translational regulated and hypoxia-responsible VEGF plasmid for efficient secretion[J].J Control Release，2012，160（3）：525-531.

[7] Xiao-xia W，Jia-li K，Xue-fei S，et al.Effect of GnRHa on apoptosis and release of VEGF in endometrial cell cultures from patients with adenomyosis[J].Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology，2012，28（1）：72-73.

[8]付先芸，魏绍斌，冯婷婷.丹莪妇康煎膏对子宫腺肌瘤小鼠在位及异位内膜MMP-2及VEGF表达的不同影响[J].中成药，2013，35（11）：2523-2525.

[9] Moreira L，De Carvalho E C，Caldas-Bussiere M C.Differential immunohistochemical expression of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 in cow uteri with adenomyosis during follicular phase[J].Vet Res Commun，2011，35（5）：261-269.

[10]吕晓霞，李楠.子宫腺肌病组织中PTTG、bFGF和VEGF的表达及意义[J].山东医药，2008，48（3）：97-98.

[11] Yasumura E G，Stilhano R S，Samoto V Y，et al.Treatment of mouse limb ischemia with an integrative hypoxia-responsive vector expressing the vascular endothelial growth factor gene[J].PLoS One，2012，7（3）：e33 944.

[12]贺丰杰，李小宁，张文婷.凋膜止崩液宫腔靶向给药对ADUB模型大鼠子宫内膜组织中MMP-1、TIMP-1、ER及亚型表达的影响[J].时珍国医国药，2012，23（6）：1861-1863.

[13]李所平.少腹逐瘀汤加味治疗子宫腺肌病50例[J].河北中医，2009，31（4）：592.

[14]李学应，杨廉泽.散结汤治疗子宫肌瘤子宫腺肌症的临床研究[J].浙江中医药大学学报，2006，30（4）：365-367.

（收稿日期：2014-05-25） （本文编辑：蔡元元）endprint