用HPLC法测定预灌封注射剂中地塞米松磷酸钠的含量

黄 娟，朱全刚，曹 洁，张玲娟＊

（1.第二军医大学长海医院妇产科，上海200433；2.上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院药剂科，上海200437；3.第二军医大学长海医院护理部，上海200433）

［本文编辑］汪学昭

地塞米松是肾上腺皮质激素类药，具有抗炎、抗内毒素、免疫抑制、抗休克及增强应激反应等作用［1］。预灌封注射剂是一种新型、实用的药品包装形式，在节约时间、提高抢救成功率方面优势明显，具有使用方便、剂量准确、减少污染等优势［2，3］。因此，研制地塞米松磷酸钠预灌封注射剂对于临床抢救具有实际意义。鉴于此，本研究采用自制预灌封注射器制备地塞米松磷酸钠预灌封注射剂，建立地塞米松磷酸钠预灌封注射剂含量测定的HPLC法，从而更好地控制产品质量。

1 仪器和试药

1.1 仪器 LD－10ADvp HPLC 仪，包括 LC－10ADvp泵、CBM－20A系统控制器、SIL－10ADvp自动进样器、CTO－10ACvp柱温箱（日本岛津公司）；FA－2004电子天平（精度0.01mg，上海天平仪器厂）；预灌封注射器组合件（第二军医大学长海医院自制，批号120122）；SDJ－ZS生物超净工作台（上海淀山湖净化设备厂）。

1.2 药品和试剂 地塞米松磷酸钠对照品（含量99.5%，批号100016－201015，中国食品药品检定研究院）；地塞米松磷酸钠注射液（标示量1ml∶5mg，批号110815，西南药业股份有限公司）；地塞米松磷酸钠预灌封注射剂（批号120207、120224、120302、120304、120305、120306，本 院 自制）。甲醇（色谱纯，美国Tedia公司）；水为重蒸馏水（本院药学部自制）；其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 预灌封注射剂的制备 分别取地塞米松磷酸钠注射液、预灌封注射器组合件，脱去外包装后置于生物超净工作台，在无菌条件下将注射液灌装入玻璃针管，将活塞压入，使药液密封，然后加装推杆，进行包装。室温、避光保存。

2.2 溶液制备（1）对照品溶液：精密称取地塞米松磷酸钠对照品10.0mg，置10ml量瓶中，加流动相：三乙胺溶液［7.5ml三乙胺加重蒸馏水稀释至1000ml，用磷酸调pH值（3.0±0.05）］－甲醇（75∶25，V／V）溶解稀释至刻度，摇匀，制成1.00mg／ml的对照品储备液。精密量取对照品储备液适量，用流动相稀释，制备成浓度为0.5、1.0、10.0、25.0、50.0μg／ml的系列对照品溶液。置4℃冰箱保存待用。（2）供试品溶液：精密量取预灌封注射剂1ml（约相当于地塞米松磷酸钠5mg），置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成浓度约200μg／ml的溶液。精密移取此溶液1ml置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液。

2.3 色谱条件和系统适用性实验 色谱柱：Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相见2.2项；柱温：25℃；流速1.0ml／min；检测波长：242nm；进样量：20μl。在上述条件下，取供试品溶液、浓度为25.0μg／ml的对照品溶液分别进样，色谱图见图1。由图1可见，地塞米松磷酸钠出峰时间约为6min，此处无其他物质峰干扰。

图1 地塞米松磷酸钠预灌封注射剂的HPLC谱图

2.4 线性关系考察 分别精密移取2.2（1）项下配制的系列对照品溶液各20μl，按2.3项下色谱条件进样。以浓度（c）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为A＝12 465c＋2 376.5（r＝0.999 9，n＝5）。结果表明，地塞米松磷酸钠在0.5～50.0μg／ml浓度范围内线性关系良好。

2.5 精密度实验 分别精密量取低、中、高浓度（1.0、20.0、40.0μg／ml）的对照品溶液各20μl，按2.3项下色谱条件，重复进样3次，日内精密度每次进样间隔时间为4h，日间精密度每次进样间隔时间为24h，记录峰面积。结果低、中、高3种浓度对照品溶液日内RSD分别为2.91%、0.64%和0.90%（n＝3），日间 RSD 分别为2.55%、1.97%和2.24%（n＝3）。

2.6 重复性实验 取同一批（批号120302）供试品6份，按2.2（2）方法配制供试品溶液，按2.3项下色谱条件进样，测定峰面积并计算含量。此批号供试品的地塞米板磷酸钠含量的RSD为1.04%（n＝6），表明重复性良好。

2.7 稳定性实验 取批号为120305的供试品，按2.2（2）方法配制供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h按2.3项下色谱条件进样20μl，测定峰面积并计算含量。结果RSD为2.45%（n＝6），表明供试品溶液在12h内稳定。

2.8 加样回收率实验 精密量取已知含量的供试品溶液（批 号 120207，20.1μg／ml）9份，分别加入1.0、20.0、40.0μg／ml对照品溶液1ml，按2.3项下色谱条件进样测定峰面积并计算含量，结果加样回收率为（95.25±1.10）%、（94.36±0.89）%、（97.46±1.46）%（n＝3）。

2.9 样品含量测定 取3批预灌封注射剂（批号120304、120305、120306），按2.2（2）方法配制供试品溶液各3份，依2.3项下色谱条件各进样20μl，测定峰面积，代入线性回归方程计算地塞米松磷酸钠含量，并求算其相当于标示量的百分比。3批样品中地塞米松磷酸钠的平均含量分别为标示量的（102.86±4.10）%、（104.00±1.50）%、（104.90±1.58）%，均在标示量的85%～115%范围内，符合《中华人民共和国药典》2010版地塞米松磷酸钠注射液项下要求［4］。

3 讨 论

目前，临床上以地塞米松磷酸钠注射液针剂多见，为了适应在战创伤、危急重症情况下的需求，本课题组研制了地塞米松磷酸钠预灌封注射剂。在本研究建立的色谱条件下，溶剂在3min左右出峰，地塞米松磷酸钠出峰时间约在6min，保留时间较为合理。因此，本研究所建立的HPLC方法简便、准确、快速、重现性好，能用于地塞米松磷酸钠预灌封注射剂的含量测定。

［1］陈新谦，金有豫，汤 光.新编药物学［M］.17版.北京：人民卫生出版社，2011：616.Chen XinQian，Jin YouYu，Tang Guang.New materia medica［M］.17th ed.Beijing：People’s Health Press，2011：616.In Chinese.

［2］Nishiyama J，Suzuki T，Murata T，etal.A questionnaire survey on operability of syringe pumps for prefilled syringes［J］.Tokai J Exp Clin Med，2010，35（3）：95－98.

［3］黄 娟，朱全刚，曹 洁，等.用HPLC－电化学法测定盐酸肾上腺素预灌封注射剂中肾上腺素的含量［J］.药学服务与研究，2012，12（3）：216，223，227.Huang Juan，Zhu QuanGang，Cao Jie，etal.Determination of epinephrine hydrochloride content in epinephrine hydrochloride prefilled syringe by HPLC－electronic chemical detection method［J］.Pharm Care Res，2012，12（3）：216，223，227.In Chinese with English title.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典.2010年版 二部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：460.State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010ed.Volume 2［S］.Beijing：Chinese Medical Science Press，2010：460.In Chinese.